简介：摘要目的改良人胰腺癌细胞系PANC-1细胞的体外培养方法，简化细胞培养步骤。方法在人胰腺癌细胞系PANC-1细胞培养过程中，复苏及传代时，避免使用离心机离心这一步骤。结果通过和传统细胞培养方法对比，这种改良的方法，培养PANC-1细胞，污染的机会少，特别适用于新手。

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简介：摘要目的探讨胰腺癌细胞株PANC-1中肿瘤干细胞的体外耐药性。方法经胰腺癌肿瘤干细胞表面标记途径和侧群(SP)细胞途径，分离人胰腺癌细胞株PANC-1内SP/NSP(非SP)细胞、CD44+CD24+/CD44-CD24-细胞亚群，采取MTT方法检测亚群细胞体外化疗药物耐受性，经实时荧光定量PCR检测耐药基因ABCG2、ABCB1和PLK-1表达情况。结果人胰腺癌细胞株PANC-1内SP细胞构成比为(7.58±0.54)%，CD44+CD24+细胞构成比(2.58±0.85)%；SP、CD44+CD24+细胞化疗耐受性更强、抗凋亡效果更为明显；经荧光定量RT-PCR表明，SP、CD44+CD24+细胞耐药基因ABCG2、ABCB1和PLK1具有较高表达。结论人胰腺癌细胞株PANC-1内SP及CD44+CD24+细胞存在明显化疗耐受性。

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简介：目的研究抗癌药吉西他滨（Gemcitabine）诱导胰腺癌Panc-1细胞凋亡的相关基因。方法应用基因芯片技术检测50．33μg／LGemcitabine作用于胰腺癌PANC-1细胞48h后凋亡基因表达的变化。结果Gemcitabine抑制细胞表达14种凋亡相关基因，包括IRF-4、Scotin、14—3—3gamma、PDE4、GRPS、TID1、AFP、STAT5、Sox-4、c-Rel、MYCN、Htt、CatD、Gd。相反，gemcitabine促进了3种凋亡相关基因的表达，包括CyclinB1、ASK1、AKT2。结论Gemcitabine诱导胰腺癌Panc—1细胞凋亡通过非依赖caspaseASK1途径。

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简介：摘要目的观察微小RNA(miRNA，miR)-762对胰腺癌PANC-1细胞株吉西他滨(GEM)耐药性的影响。方法采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-762在GEM耐药的胰腺癌细胞株PANC-1/GEM和购自中国科学院上海生科院细胞资源中心的非耐药株PANC-1中的表达。通过Lipofectamine™ 2000将miR-762 mimics、miR-762 inhibitors及其scramble序列分别转染PANC-1/GEM细胞。细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞增殖及GEM敏感性；流式细胞术检测细胞凋亡；蛋白质印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白表达。应用SPSS 22.0统计软件分析，计量资料采用均值±标准差(Mean±SD)表示。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK检验。结果miR-762 mRNA在GEM耐药的胰腺癌细胞株PANC-1/GEM中的表达量(2.88±0.37)显著高于非耐药株(1.22±0.32)，差异有统计学意义(t＝7.340，P<0.01)。转染miR-762 mimics后PANC-1/GEM细胞miR-762 mRNA相对表达量(4.96±0.67)与阴性对照组(2.87±0.45)比较显著增高(t＝－4.920，P<0.01)，差异有统计学意义，而转染miR-762 inhibitors后PANC-1/GEM细胞miR-762 mRNA表达量(0.72±0.18)与阴性对照组(2.87±0.45)比较显著降低(t＝8.430，P<0.01)，差异有统计学意义。同时miR-762 mimics组吸光度(A)450值、半数抑制浓度(IC50)值及B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化糖原合成激酶3β(p-GSK-3β)蛋白表达量显著增高，细胞凋亡率及bcl-2相关X蛋白(bax)表达量显著降低；而miR-762 inhibitors组A450值、IC50值及bcl-2、p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达量显著降低，细胞凋亡率及bax蛋白表达量显著增高(P<0.01)，差异有统计学意义。结论miR-762在胰腺癌耐药细胞株中高表达，能够诱导胰腺癌细胞增殖并抑制其凋亡，从而导致胰腺癌细胞对GEM耐药，其机制可能与上调bcl-2、p-Akt、p-GSK-3β表达、下调bax表达有关。

简介：摘要目的探讨高压氧（HBO）联合吉西他滨（GEM）处理对裸鼠胰腺癌PANC-1细胞凋亡及血清肿瘤标志物的影响。方法构建裸鼠胰腺癌移植瘤模型15只，按照实验设计随机分成对照组、GEM组及HBO+GEM组，每组5只。对照组造模成功后不作处理；GEM组予以10 mg/kg GEM灌胃处理；HBO+GEM组在给予10 mg/kg GEM灌胃处理后，在0.2 MPa环境下吸氧60 min。3组均为隔天处理，共计处理21 d。测定移植瘤体积及重量，TUNEL法检测胰腺癌PANC-1细胞凋亡情况，使用全自动化学发光免疫分析仪测定患者血清肿瘤标志物水平，Western blotting实验检测肿瘤组织凋亡相关蛋白的表达水平。结果HBO+GEM组裸鼠胰腺癌移植瘤体积在6、9、10、15、18及21 d明显低于对照组和GEM组，差异有统计学意义（P<0.05）。HBO+GEM组裸鼠移植瘤肿瘤重量［（0.54±0.08）g］明显低于对照组［（1.23±0.17）g］和GEM组［（0.89±0.11）g］，差异有统计学意义（P<0.05）。HBO+GEM组PANC-1细胞凋亡率［（47.26±7.22）%］明显高于对照组［（6.83±0.89）%］和GEM组［（26.84±3.29）%］，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。HBO+GEM组胰腺癌裸鼠血清癌胚抗原（CEA）水平较对照组和GEM组显著降低，血清糖类抗原19-9（CA19-9）及肿瘤特异生长因子（TSGF）水平则较对照组和GEM组显著升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。HBO+GEM组裸鼠移植瘤组织中Bax、caspase-3、Cytochrome C蛋白表达水平较对照组和GEM组显著升高，Bcl-2的蛋白表达水平明显降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论HBO联用GEM能够增强GEM对胰腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用，其机制可能与诱发PANC-1细胞凋亡有关。

简介：摘要目的观察微小RNA-200c(miR-200c)对人胰腺癌细胞株PANC-1中转化生长因子-β诱导基因-克隆3(βig-h3)表达的影响。方法将miR-200c前体片段和阴性对照片段分别转染到PANC-1细胞中。应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后的PANC-1细胞中miR-200c和βig-h3的表达。应用Transwell实验检测转染后PANC-1细胞的侵袭能力。采用t检验。结果转染miR-200c前体片段和阴性对照片段的PANC-1细胞中miR-200c的相对表达值分别为1.00±0.12和0.17±0.06，差异有统计学意义(t＝3.008，P<0.05)。βig-h3的相对表达值分别为0.21±0.16和0.71±0.23，差异有统计学意义(t＝2.236，P<0.05)。转染miR-200c前体片段和阴性对照片段的PANC-1细胞平均穿膜细胞数分别为(65.00±18.19)和(308.00±5.73)个，差异有统计学意义(t＝2.107，P<0.05)。结论miR-200c可以抑制胰腺癌细胞的侵袭能力，可能与下调βig-h3的表达有关。

简介：目的探讨花姜酮对胰腺癌PANC1细胞增殖和凋亡的影响,探讨其作用机制.方法应用3.75、7.5、15、30、60μg/ml的花姜酮处理PANC1细胞,以未处理细胞作为对照.CCK-8法检测细胞增殖抑制率,Hoechst33342染色观察细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡率,Westernblotting法检测细胞磷酸化STAT1（p-STAT1）、Bax和Bcl-2蛋白的表达.结果花姜酮呈时间-剂量依赖性抑制PANC1细胞的生长,15μg/ml花姜酮作用48h后,细胞增殖抑制率达（72.8±2.72）%,并可观察到典型的细胞凋亡形态学改变,细胞凋亡率达14.2%;同时,PANC1细胞p-STAT1和Bax蛋白表达明显增加（0.654±0.048对0.074±0.011,0.577±0.044对0.218±0.027,P＜0.05）,Bcl-2蛋白表达明显下降（0.162±0.029对0.459±0.034,P＜0.05）.结论花姜酮可能通过上调STAT1活性,升高Bax/Bcl-2比率,从而诱导PANC1细胞的凋亡和抑制细胞增殖.

简介：摘要采用CCK8检测胰腺癌PANC1细胞的存活率，划痕实验和Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力，蛋白质印迹法检测与细胞增殖、凋亡及上皮间质转化相关的蛋白表达等方法探讨黄芪甲苷对胰腺癌PANC1细胞恶性生物学行为的影响。结果显示，黄芪甲苷干预PANC1细胞后可抑制细胞的存活率，显著减少迁移和穿膜的细胞数量，影响相关蛋白的表达，提示黄芪甲苷抑制胰腺癌PANC1细胞生长的机制可能与其抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡、抑制上皮间质转化过程有关。

简介：目的探讨负载胰腺癌细胞株PANCl裂解产物（tumorlysate，TL）的树突状细胞（dendriticcells，DC）经卡介苗（CGB）活化后诱导的自体淋巴细胞体外抗胰腺癌效应。方法应用rhGM—CSF和rhIL-4从健康人外周血单个核细胞诱导培养DC，用TL负载DC，并用CGB促其成熟。倒置相差显微镜观察DC形态，流式细胞仪检测细胞CD1a、CD83、CD86及HLA—DR表型，ELISA法检测培养上清液中TNF—α和IL-12p70含量。CCK-8检测DC诱导自体混合淋巴细胞的增殖率以及活化淋巴细胞对PANC1、PaTu8988及SCG7901细胞的杀伤率。结果CGB活化负载TL的DC后，CD83和CD86阳性率分别从（3．7±0．3）％和（38．6±5．0）％显著增加至（16．5±0．6）％和（76．5±2．5）％（P〈0．05）；DC分泌的IL-12p70和TNF—α量分别从（20．18±2．06）pg／ml和（61．38±1．19）pg／ml显著增加至（62．48±3．80）pg／ml和（592．53±17．96）pg／ml（P〈0．01）；DC与自体混合淋巴细胞以1：100、1：50、1：10、1：5的比例共培养，淋巴细胞增殖率分别从（3．90±1．41）％、（4．07±0．40）％、（3．39±1．05）％、（2．82±0．39）％显著增加至（55．38±3．58）％、（75．00±2．54）％、（77．07±3．40）％、（99．07±2．40）％（P〈0．01）；DC活化淋巴细胞对PANCl细胞的杀伤率在效靶比为1：5、1：10、1：20、1：50时分别可达（71．73±0．46）％、（49．44±0．98）％、（31．76±2．77）％、（19．03±3．04）％，但对PaTu8988和SCG7901细胞的杀伤率显著降低。结论经CGB活化的胰腺癌DC疫苗成熟度增加，体外表现出高效特异的抗胰腺癌细胞的效应。

简介：摘要目的观察微小RNA-21(miR-21)对胰腺癌PANC1细胞侵袭、迁移和凋亡的影响，探讨其可能的作用机制。方法构建插入miR-21或靶向miR-21的小干扰RNA的重组质粒，以空质粒为对照，应用脂质体法分别转染人胰腺癌PANC1细胞，建立空白组、miR-21过表达组(过表达组)和miR-21沉默组(沉默组)PANC1细胞株，采用MTT法检测细胞增殖率，流式细胞仪检测细胞凋亡，Transwell小室检测细胞侵袭能力，划痕试验检测细胞迁移能力，酶联免疫法检测miR-21靶向结合的程序性细胞死亡因子4(PDCD4)蛋白的表达，蛋白质免疫印迹法检测磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)、血管内皮生长因子(VEGF)、survivin、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白表达。结果培养24 h时，空白组、过表达组、沉默组细胞增殖率分别为(20.72±5.62)%、(28.46±6.12)%、(14.05±3.36)%；细胞凋亡率分别为(5.89±0.26)%、(4.62±0.19)%、(8.66±2.25)%；穿膜细胞数分别为(212.4±32.5)、(508.8±50.7)、(50.9±10.6)个/200倍视野；细胞迁移覆盖面积分别为(75.6±12.1)、(118.8±20.2)、(48.8±9.5)mm2/200倍视野；PDCD4表达量为0.85±0.22、0.72±0.10、1.36±0.41；PTEN表达量为0.85±0.21、0.28±0.09、1.36±0.45；VEGF表达量为0.79±0.24、1.15±0.31、0.46±0.10；survivin为1.02±0.33、1.51±0.42、0.52±0.12；MMP-2为1.12±0.22、1.86±0.52、0.56±0.18；MMP-9为1.06±0.15、1.78±0.48、0.49±0.12，3组间的差异均有统计学意义(P值均<0.05)。与空白组比较，沉默组的细胞凋亡率及PDCD4、PTEN表达量均增加，而细胞增殖、侵袭、迁移能力以及VEGF、survivin、MMP-2、MMP-9蛋白表达量均下降；过表达组的变化与沉默组完全相反，过表达组、沉默组与空白组的差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论沉默miR-21能抑制PANC1细胞的增殖、迁移和侵袭力，促进细胞凋亡，其机制可能与上调PDCD4及PTEN蛋白表达有关。

简介：肿瘤由异质性的肿瘤细胞组成，其中包含一个在肿瘤发生、发展、侵袭转移和耐药中起关键作用的亚群——肿瘤干细胞。近年根据肿瘤于细胞理论分选到了胰腺癌于细胞（CD24^＋CD44^＋ESA^＋），而且从胰腺癌细胞系PANC1中分离的CD24^＋CD44^＋细胞具有高致瘤性。本实验探讨从胰腺癌细胞系PANC1中富集CD24^＋CD44^＋细胞的方法，为进一步研究这种细胞的生物学特性提供足量的细胞。

简介：摘要目的本研究旨在探讨长链非编码RNA母系表达基因3（LncRNA MEG3）过表达对胰腺癌细胞（PANC1）自噬、凋亡及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路的影响。方法构建pCMV-N-Flag-MEG3表达质粒并转染入PANC1细胞。实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）法检测HPDE6C7（正常胰腺细胞）组、PANC1（空白对照）组、Vector（PANC1细胞转染空载体）组和MEG3（PANC1细胞转染pCMV-N-Flag-MEG3重组质粒）组中LncRNA MEG3表达量；四甲基偶氮唑蓝比色（MTT）法、流式细胞术和单丹磺酰尸胺（MDC）染色法分别检测LncRNA MEG3过表达对胰腺癌细胞PANC1增殖、凋亡和自噬的影响；蛋白免疫印迹（Western blot）法检测LncRNA MEG3过表达对胰腺癌细胞PANC1中抑凋亡因子（Bcl-2）、促凋亡因子（Bax）和自噬因子（Beclin 1）蛋白表达水平及mTOR通路中mTOR、核糖体p70S6激酶蛋白（SK61）和核起始因子4E结合蛋白1（4E-BP1）磷酸化水平的影响。结果与PANC1组和Vector组相比，MEG3组LncRNA MEG3表达水平（0.36±0.08 vs 0.35±0.11 vs 0.69±0.09）、胰腺癌细胞PANC1增殖抑制率（3.35%±0.12% vs 3.23%±0.09% vs 36.77%±0.13%）、自噬率（29.32%±1.03% vs 26.73%±1.32% vs 57.76%±1.09%）、凋亡率（9.85%±1.58% vs 9.73%±1.12% vs 35.89%±1.05%）、Bax（0.26±0.08 vs 0.29±0.05 vs 0.83±0.08）和Beclin 1（0.15±0.06 vs 0.17±0.02 vs 0.61±0.03）表达水平显著升高（均P < 0.05），Bcl-2表达水平（0.79±0.12 vs 0.81±0.09 vs 0.30±0.03）及mTOR通路中mTOR（1.08±0.05 vs 1.06±0.08 vs 0.37±0.10）、SK61（1.12±0.06 vs 1.11±0.09 vs 0.41±0.03）和4E-BP1（0.97±0.07 vs 0.95±0.03 vs 0.39±0.05）磷酸化水平显著降低（均P<0.05）。结论LncRNA MEG3过表达能抑制胰腺癌细胞PANC1增殖促进细胞凋亡，促进细胞自噬囊泡的形成，可能与阻滞mTOR通路有关。

简介：目的运用RNA干扰技术阻断人胰腺癌细胞株PANC1的NF-κBp65表达，观察该基因沉默后对细胞增殖能力及体外侵袭能力的影响。方法采用阳离子脂质体Lipofectamine^TM2000将化学合成的人NF-κBp65的小干扰RNA（siRNA）转染人胰腺癌细胞PANC1作为siRNA组，另设无同源性siRNA转染细胞的阴性对照组和蒸馏水空白对照组。实验重复6次。应用RT—PCR检测转染细胞NF-κBp65mRNA与细胞间黏附分子-1（ICAM-1）mRNA的表达。MTY结合克隆形成实验测定细胞生长抑制率。Matrigel细胞侵袭实验测定细胞体外侵袭能力。结果siRNA组、阴性对照组和空白对照组NF-κBp65mRNA相对表达量分别为0．227．4±0．045、0．381．4±0．038和0．404．4±0．031；ICAM-1mRNA相对表达量分别为0．597±0．083、0．983±0．068和1．027±0．098；细胞生长抑制率（72h）分别为18．3％、2．3％和0；克隆形成率分别为（14．1±3．1）％、（24．5±2．1）％和（27．2±2．6）％；侵袭细胞数分别为80．25±6．35、123．83±8．80和127．68±9．23。siRNA组均明显低于2个对照组（P〈0．01）。结论NF-κBp65的RNA干扰能抑制胰腺癌PANC1细胞NF-κBp65mRNA和ICAM-1mRNA的表达，抑制细胞的生长和侵袭。

简介：摘要目的探讨多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)抑制剂氟唑帕利对胰腺癌PANC1细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法以常规培养液培养的PANC1细胞为对照组，以含有氟唑帕利培养液培养的PANC1细胞为氟唑帕利组，采用CCK8法检测不同浓度氟唑帕利作用不同时间后对PANC1细胞增殖活性的影响，计算氟唑帕利对PANC1细胞的半抑制浓度(IC50)。应用流式细胞仪检测氟唑帕利对PANC1细胞凋亡及细胞周期的影响，采用细胞划痕实验和Transwell小室检测PANC1细胞迁移能力。结果与对照组比较，随着氟唑帕利浓度的增加以及作用时间的延长，氟唑帕利组PANC1细胞增殖活性显著下降，差异均有统计学意义(P值均<0.05)。氟唑帕利对培养24 h的PANC1细胞的IC50为0.03 mmol/L。培养24 h后，IC50氟唑帕利组PANC1细胞凋亡率为(32.19±2.48)%，对照组凋亡率为(21.99±6.30)%，氟唑帕利组较对照组显著增加，差异有统计学意义(P<0.05)。氟唑帕利组G2/M期细胞比例为(16.28±0.62)%，对照组为(11.64±0.88)%，两组差异有统计学意义(P<0.05)。IC50氟唑帕利组PANC1细胞迁移率在培养12、24 h时分别为(2.59±1.46)%、(19.76±7.84)%，对照组分别为(27.08±2.17)%、(45.92±3.61)%；氟唑帕利组穿膜细胞数为(348±19)个/10倍视野，对照组为(587±14)个/10倍视野，氟唑帕利组PANC1细胞迁移能力较对照组显著下降，差异有统计学意义(P值均<0.05)。结论氟唑帕利在体外可以抑制PANC1的增殖和迁移，促进PANC1凋亡，可能成为治疗胰腺癌的有效药物。

简介：摘要目的探讨胰腺癌双特异性抗体诱导特异性T淋巴细胞的效应及其对KIF20A阳性表达的胰腺癌PANC1细胞系的杀伤作用。方法采用化学交联的方法，经凝胶分子排阻Sephrose-G25层析纯化，制备CD3/KIF20A双特异性抗体(双抗)并浓缩。采集健康志愿者外周血，采用淋巴细胞分离液分离出单核细胞，再分别培养为树突样细胞(DC)及T细胞，并联合培养为DC-T细胞，同时应用维生素C干预DC-T细胞(vcDC-T细胞)。采用流式细胞仪检测各组T细胞亚群及培养上清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-12水平。将10、50、100、300 ng双抗装载的1×105个T细胞、DC-T细胞、vcDC-T细胞与PANC1细胞(20∶1)共培养2、6、10 h后，明确杀伤率最高的双抗装载剂量；将DC-T细胞及装载杀伤率最高的双抗剂量的DC-T细胞、vcDC-T细胞与PANC1细胞(20∶1)共培养2、4、6、8、10、12 h，倒置显微镜下观察效应细胞对靶细胞的聚集效应，乳酸脱氢酶(LDH)法检测肿瘤细胞杀伤率。结果CD3/KIF20A双抗经SDS凝胶电泳鉴定，其分子质量为130 000。与DC-T细胞比较，vcDC-T细胞的CD8＋CD28＋及CD40L亚群比例增加[(47.6±15.8)%比(38.2±7.6)%，(52.1±4.9)%比(44.7±3.2)%]，负性调节细胞Treg比例降低[(4.3±0.8)%比(8.3±1.1)%]，分泌的IL-2、IFN-γ、IL-12增加[(201.2±17.3)ng/L比(163.4±13.1)ng/L，(303.3±22.6)ng/L比(221.8±17.6)ng/L，(190.4±11.7)ng/L比(80.3±8.6)ng/L]，差异均有统计学意义(P值均<0.05)；显微镜下可观察到100 ng CD3/KIF20A双抗装载T细胞对KIF20A＋胰腺癌PANC1细胞有明显的靶向性，有最强的杀伤力。效靶细胞比20∶1、共培养4 h时，双抗vcDC-T细胞对PANC1细胞的杀伤率为(88.6±2.6)%，显著高于双抗DC-T组的(68.4±3.4)%及DC-T组的(39.2±2.1)%，杀伤率分别提高20%及45%以上。结论CD3/KIF20A双特异性抗体装载的DC-T细胞能显著提高对KIF20A阳性表达的胰腺癌PANC1细胞的杀伤率，维生素C干预后更进一步增强对双抗装载T细胞的细胞杀伤能力。