简介：

简介：摘要感染仍是婴幼儿致病的重要原因。因年龄小、免疫功能不健全，儿童感染具有"急"、"重"、"致病原复杂"等特征，往往会造成严重后果，其快速、准确诊断尤为重要。然而，现有病原检测手段仍较为局限，存在检测效率低、周期长、受制于实验条件及人员等缺点，较难普及。以环介导等温扩增技术为基础的病原学检测手段效率高、反应成本低廉、操作简单，在儿童病原的快速、准确、低成本检测中具有巨大应用潜力，特别适合在基层医疗单位进行推广。环介导等温扩增技术与纸基微流控芯片、智能自动化系统、数字化系统等技术结合后，无疑将为儿童临床病原学诊断带来重大革新。

简介：摘要目的利用环介导恒温扩增技术探究儿童下呼吸道病原菌检测结果的临床分布特点，为实际临床工作提供参考。方法收集2018年8月至2019年7月在天津市某儿童医院初诊为呼吸道病原菌感染的2517例患者，采集支气管肺泡灌洗液标本或深部痰标本，采用环介导恒温扩增芯片法检测下呼吸道的13种病原菌，并对检测结果进行分析。结果应用环介导恒温扩增芯片法检测2517例下呼吸道感染住院患儿，共检出1771例病原菌阳性(痰液1174例(46.64%)，肺泡灌洗液597例(23.72%))。芯片法检出的主要病原菌为肺炎支原体934例(37.11%)、肺炎链球菌557例(22.13%)、耐甲氧西林葡萄球菌397例(15.78%)、流感嗜血杆菌295例(11.72%)和金黄色葡萄球菌214例(8.50%)。不同季节感染呼吸道病原菌的阳性率不同，小儿肺炎支原体感染全年均有发生，以秋冬季多见，肺炎链球菌冬季多见，耐甲氧西林葡萄球菌春季多发，流感嗜血杆菌以春夏多发。单一病原菌感染1179例(46.84%)，混合感染1338例(53.16%)。结论对儿童检测下呼吸道病原菌感染，芯片法具有操作简单、快速、准确，明显缩短标准周转时间(TAT)，且灵敏度更高、病原体覆盖面广等优势，能更好地服务于感染性疾病的快速诊断、抗生素的早期筛选以及合理使用。

简介：0引言注射胶原酶治疗腰椎间盘突出症有依赖介导和不依赖介导的,我们就依赖CT和透视介导注射胶原酶治疗腰椎间盘突出症的疗效和方法进行了比较研究,现将相关资料报道如下.

简介：摘要膀胱癌(BC)是泌尿系统常见的恶性肿瘤，除采用白光膀胱镜进行诊断和术后随访外，已有多种先进的光学成像技术应用于临床实践。但其诊疗效果并没有显著提高，临床上迫切需要研发新的诊疗技术。近些年来，基于分子靶向标记物引导的分子生物学技术迅猛发展，多种研究证实，碳酸酐酶Ⅸ(carbonic anhydrase Ⅸ，CAⅨ)作为BC的一种新的肿瘤标志物具有临床应用的巨大潜力。为此，本文将从CAⅨ的调控机制、在BC中的表达、与BC液体活检以及介导BC靶向诊疗等方面进行综合分析和系统综述，以指导CAⅨ的深入研究。

简介：无

简介：摘要目的验证沙利度胺在人体内经CYP2C19酶代谢。方法将重组CYP2C19-沙利度胺进行体外孵育，用HPLC检测沙利度胺的浓度。结果沙利度胺在灭活的重组CYP2C19孵育液中孵育后浓度无变化，而在重组CYP2C19孵育液中孵育后浓度降到检测限以下。结论沙利度胺在人体内被CYP2C19代谢得到证实。

简介：摘要压力超负荷不仅使心肌细胞肥大,同时伴有神经内分泌系统的激活。多种神经体液因子如ET、AngⅡ、醛固酮等含量升高，一方面维持心功能，另一方面成为刺激因素和介导因素，激活分子间的信号传递而诱导心肌细胞肥大并最终发展成心力衰竭。细胞内钙离子浓度升高或对钙离子敏感性增强是外界刺激和/或内在功能缺陷所致心肌肥大发生发展的重要环节。这些体液因子作用的共同特征都是引起细胞内钙离子浓度升高。而与之密切相关的钙调神经磷酸酶（calcincurin,CaN）信号转导系统，在机体信号传递网络中处于非常关键的位置。心肌重构是由于一系列复杂的分子和细胞机制导致心肌结构、功能和表型的变化。尽管临床上人们很早就认识了心肌重构,但直到近几年人们对心肌重构的分子机制才开始有所认识。虽然致心肌重构的各种刺激因素不同,但是心肌重构的分子机制却相似,即心肌细胞体积增大、蛋白合成增加、心肌成纤维细胞肥大增殖、心肌细胞坏死及凋亡。心肌细胞上存在着大量的受体，它们接受外界信息物质，把细胞外信号转导到细胞内，同时启动了信号转导通路，最后诱导或抑制新的蛋白质合成或是促进某些基因的异常表达而致心肌重构。钙调神经磷酸酶(CaN)引起心肌重构的信号转导通路与心肌重构的发生紧密联系。

简介：摘要为探讨聚合酶链反应（PCR）DNA扩增对诊断活动性肺结核的临床价值，本文用PCR技术扩增结核杆菌特有的MPB64蛋白基因序列，对121例病人临床标本进行检测，发现34例活动性肺结核中有28例PCR阳性，疑诊为肺结核者33例中有18例阳性，非结核肺疾患54例中有10例阳性，其中有肺结核既往史者阳性6例，有结核接触史者阳性3例。提示PCR阳性并非为活动性肺结核所特有。

简介：摘要等温扩增技术是在恒温条件下进行扩增的一类新型核酸扩增技术。基于该技术建立的方法操作简便，且具有较高的灵敏度与特异性，在临床与科研等方面展现了较好的应用前景。本文就环介导等温扩增、交叉引物扩增、链替代扩增、依赖核酸序列的等温扩增和滚环扩增等技术的原理、特点及应用进行了综述。

简介：比较双链腺相关病毒（Double－strandedadeno－associatedvirus，dsAAV）及单链AAV（Single－strandedadeno－associatedvirus，ssAAV）介导Exendin－4分泌表达效率。应用基因工程方法构建dsAAV／pSSHG／Exendin－4，与重组ssAAV比较转染NIH3T3细胞效率及转染后细胞上清Exendin－4浓度，免疫组化检测Exendin－4表达。经限制性内切酶及测序证实载体构建成功，测定重组dsAAVpSSHG／Exendin－4滴度为2．5＆#215;1011pfu，较重组ssAA滴度高（2．5×109pfu）；dsAAV／pSSHG／GFP转染NIH3T3细胞表达绿色荧光强；ELISA法检测感染重组dsAAV的NIH3T3细胞上清中Exendin－4的浓度为181．1±8．75pmol／ml，较重组ssAAV分泌浓度（133．81±8．09pmol／ml）升高（P＜0．05）；重组dsAAV及ssAAV转染NIH3T3细胞Exendin－4表达均为阳性。重组dsAAV可分泌表达Exendin－4并较ssAAV具有更高效转染能力，为研究Exendin－4功能及应用于临床打下基础。

简介：目的T7RNA聚合酶催化的荧光扩增技术（CellularFACTT）检测人循环肿瘤细胞中hTERT表达。方法以亲和素作为连接分子，连接生物素化的检测抗体和生物素化的DNA，加入r17RNA聚合酶进行转录扩增反应，对生成的RNA产物进行荧光检测，并同时用酶联免疫方法检测hTERT及CEA作为比对。结果64例结直肠癌患者血清hTERT阳性率是45．3％（29／64），血清CEA阳性率是57．8％（37／64）；CellularFACTT方法检测循环肿瘤细胞的hTERT检出率为81．3％（52／64）。其检测的灵敏度与酶联免疫检测方法有显著差异P〈0．01。结论T7RNA聚合酶催化的荧光扩增技术较酶联免疫检测方法具有更高的敏感性，有可能作为一种新的检测方法用于临床的诊断。

简介：摘要：PCR（聚合酶链式反应，polymerase chain reaction）在现代分子生物学分析和遗传学中具有不可撼动的根本性基石地位。它与分子克隆和DNA序列分析几乎构成了整个分子生物学的基础部分。在现代生物科技中，它的应用领域涵盖了方方面面，包括农业、医学、法学与食品科学等。现有PCR扩增技术受限于空间与成本，无法真正流水线处理，现提出一种集自动清洗，扩增与检测于一体的流路装置。

简介：以植物乳杆菌P-8（Lactobacillusplantarumsubsp.plantarumP-8）亚油酸异构酶为研究对象,通过http：//swissmodel.expasy.org/,http：//smart.embl-heidelberg.de/和vecterNTI等在线工具与软件,对亚油酸异构酶进行生物信息学分析并预测与酶活性相关的位点,预测亚油酸异构酶的3个氨基酸可能为第68位甘氨酸、第107位精氨酸和第172位组氨酸。设计1对含突变的引物,以重组质粒pQE30-LAI为模板,利用PCR介导的定点突变技术构建突变体。经序列比对表明,成功构建了突变体G68A（甘氨酸突变为丙氨酸）、R107L（精氨酸突变为亮氨酸）和H172P（组氨酸突变为脯氨酸）,为进一步研究LAI的结构和功能奠定了基础。

简介：1题目人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选。利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如图2所示。

简介：从褐菖鲉肝脏中克隆了热休克蛋白HSC70基因,利用环介导等温扩增技术（loop-mediatedisothermalamplification,LAMP）建立HSC70基因的定量检测方法。为检测该方法的可行性,将褐菖鲉分别暴露于石油水溶性成分（water-solublefraction,WSF）20、60、180μg·L-11d后,利用real-timePCR及LAMP技术同时测定褐菖鲉肝HSC70mRNA表达量,两种方法测定结果基本一致,证实LAMP技术可用于褐菖鲉肝HSC70基因的定量。为更细致了解石油WSF影响褐菖鲉肝脏HSC70基因表达的剂量-效应关系,将褐菖鲉分别暴露于25、50、75、100、125、150、175μg·L-1WSF中,5d后采样,用LAMP技术定量检测HSC70mRNA。结果表明,HSC70mRNA表达量在50μg·L-1浓度组即被显著诱导,在75μg·L-1浓度下达到最大值,这说明褐菖鲉肝HSC70基因对石油污染较敏感,有潜力作为海洋石油污染的生物标志物。

简介：摘要目的探讨在乳腺癌中人类表皮生长因子受体HER－２/neu和拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)之间的关系,及其与临床病理因素之间的相关性.方法利用实时定量聚合酶链式反应(RQ－PCR)对９６例患者进行检测来评估基因扩增水平,采用免疫组织化学(IHC)微阵列(n＝７６)来检查基因扩增和蛋白质表达水平之间是否存在相互关系.结果根据RQ－PCR或IHC微阵列取得的HER－２/neu基因状态,TOP２A基因的扩增水平并不存在显著差异.结论我们的研究结果表明乳腺癌中TOP２A基因的扩增并不局限于带有HER－２/neu＋基因型的人,并且表明很大比例的HER－２/neu－基因型患者表现出具有高水平的TOP２A基因.关键词乳腺癌;拓扑异构酶;表皮生长因子;TOP２A;HER－２/neu中图分类号R７３７文献标识码B文章编号１００８－６３１５(２０１５)１２－１２５６－０１

简介：为获得快速生长的泥鳅(Misgurnusanguillicaudatus),研究了泥鳅β-actin基因启动子介导的革胡子鲶(Clariasgariepinus)生长激素(growthhormone,GH)重组基因。采用PCR和RT-PCR技术克隆泥鳅β-actin基因近端启动子、3′-UTR及革胡子鲶GH基因编码区,构建一个长为2418bp的GH重组基因DPRK。首先,构建了以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因作为报告基因的重组表达载体pAF(pβ-actinpromoter-EGFP),然后转染DF1真核细胞,同时经酶切线性化后显微注射到斑马鱼(Daniorerio)和泥鳅的受精卵中,以评价泥鳅β-actin启动子的启动活性。其次,将重组基因DPRK显微注射到泥鳅受精卵中。结果显示:泥鳅β-actin启动子能在DF1细胞、斑马鱼和泥鳅的受精卵中启动绿色荧光蛋白的表达;泥鳅的荧光表达率(78.44%)显著高于斑马鱼(29.62%);泥鳅受精卵显微注射DPRK20d后,在mRNA水平检测到GH基因的表达。这表明泥鳅β-actin基因近端启动子具有显著的启动活性,且重组基因DPRK能在泥鳅体内表达,为下一步泥鳅的基因工程育种奠定了理论基础。

简介：目的：建立一种适合以红花cDNA为模板进行相关序列扩增多态性（SRAP）扩增的体系,筛选最佳的SRAP-PCR反应条件。方法：提取红花RNA并反转录成cDNA,以此为模板,使用正交设计表设计PCR反应中的3个重要因素Taq酶、三磷酸脱氧核苷（dNTPs）、引物的反应浓度。随后设计Mg^2＋的反应浓度以及模板含量,分别进行单因素试验。结果：本研究建立的红花cDNA-SRAP扩增条件为：25μL反应体系中含模板cDNA20ng,1×PCR缓冲液2.5mmol/L,Mg^2＋2.0mmol/L,TaqDNA聚合酶0.04U/μL,dNTPs0.2mmol/L,引物0.2μmol/L。优化后扩增结果稳定性好,条带清晰,多态性好。结论：该体系为红花功能基因的研究奠定了基础。

简介：摘要：既往临床诊断中主要对聚合酶链反应（PCR）技术进行应用，但其存在一定程度的缺陷，而恒温扩增技术因为具有引物种类的多样性，所以检测方法相对多变，能够对传统PCR中存在的缺陷有效弥补，并在分子诊断工作中得到了广泛应用。