简介:为获得快速生长的泥鳅(Misgurnusanguillicaudatus),研究了泥鳅β-actin基因启动子介导的革胡子鲶(Clariasgariepinus)生长激素(growthhormone,GH)重组基因。采用PCR和RT-PCR技术克隆泥鳅β-actin基因近端启动子、3′-UTR及革胡子鲶GH基因编码区,构建一个长为2418bp的GH重组基因DPRK。首先,构建了以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因作为报告基因的重组表达载体pAF(pβ-actinpromoter-EGFP),然后转染DF1真核细胞,同时经酶切线性化后显微注射到斑马鱼(Daniorerio)和泥鳅的受精卵中,以评价泥鳅β-actin启动子的启动活性。其次,将重组基因DPRK显微注射到泥鳅受精卵中。结果显示:泥鳅β-actin启动子能在DF1细胞、斑马鱼和泥鳅的受精卵中启动绿色荧光蛋白的表达;泥鳅的荧光表达率(78.44%)显著高于斑马鱼(29.62%);泥鳅受精卵显微注射DPRK20d后,在mRNA水平检测到GH基因的表达。这表明泥鳅β-actin基因近端启动子具有显著的启动活性,且重组基因DPRK能在泥鳅体内表达,为下一步泥鳅的基因工程育种奠定了理论基础。
简介:摘要目的分析本地区361例疑似生殖器疱疹(GH)患者单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)脱氧核糖核酸(DNA)检测情况,比较不同性别、年龄和不同季节阳性检出率的差异,为防治HSV-2感染提供参考。方法对2017年8月-2018年1月在我院门诊就诊的疑似GH患者,采取实时荧光定量聚合酶链反应检测HSV-2DNA,对检测结果进行统计分析。结果患者男性占72.30%,女性占27.70%,平均年龄(39.38±13.38)岁,总阳性检出率36.29%,其中男性组阳性检出率34.87%,女性组阳性检出率40.00%,两者差异无统计学意义(P>0.05);不同年龄段阳性检出率不同,但差异无统计学意义(P>0.05);秋季组阳性检出率34.16%,冬季组阳性检出率38.99%,两者差异无统计学意义(P>0.05)。结论本地区HSV-2感染集中于性活跃人群,男女感染比例相当,不同年龄和秋冬两季阳性检出率差异不显著。因此,对所有高危人群及感染性伴侣要随时进行HSV-2的筛查和防治。