简介:目的探讨体外培养的脑胶质瘤细胞对化疗药物的敏感性,为临床有效治疗胶质瘤提供实验依据:方法采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测26例原代培养胶质瘤细胞在体外对顺铂(DDP)、环磷酰胺(CTX)、5-氟脲嘴啶(5-FU)、长春新碱(VCR)化疗药物的敏感性。结果19例胶质瘤细胞对单一化疗药物的敏感性从高到低依次为DDP〉CTX〉5-FU〉VCR。患者年龄与药物敏感性均无明显相关性;除DI)P外,病理分级与其他药物敏感性无明显相关性。结论比色法是一种快速、有效检测体外药物敏感性的方法。体外药敏试验对排除无效药物、筛选敏感药物进行个体化的化疗,提高临床化疗效果,具有重要意义。
简介:摘要长非编码RNA(lncRNA)和环状RNA(circRNA)是两类重要的非编码RNA,可通过与DNA、RNA或蛋白质相互作用调控基因表达。lncRNA、circRNA不仅能够预测食管鳞状细胞癌(ESCC)患者的放化疗预后情况,还可以通过竞争性内源RNA机制、调控PI3K/Akt/mTOR及Wnt/β-catenin信号通路、参与DNA及蛋白质修饰、调节细胞周期等多种途径影响ESCC放化疗敏感性。对lncRNA、circRNA调控ESCC放化疗敏感性的作用机制进行深入研究,将有助于指导筛选患者人群,提高ESCC患者放化疗效果。
简介:摘要目的探讨微小RNA(miR)-203对食管癌化疗敏感性的影响及其机制。方法采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析顺铂(DDP)耐药食管癌细胞株TE-8/DDP和亲本细胞株TE-8细胞中miR-203表达水平。将TE-8/DDP细胞株分为对照组和miR-203组,采用慢病毒感染建立对照和miR-203过表达细胞系。细胞计数试剂盒(CCK-8)分析对照组和miR-203组细胞对DDP的敏感性;流式细胞术分析两组细胞凋亡水平;生物信息学和双荧光素酶实验分析miR-203靶基因。蛋白质免疫印迹分析miR-203靶蛋白表达水平。计量资料比较采用t检验。结果亲本细胞株TE-8细胞miR-203表达水平(1.31±0.15)明显高于DDP耐药食管癌细胞株TE-8/DDP中miR-203表达水平(0.53±0.18),差异有统计学意义(t=4.801,P<0.05)。对照组细胞经50 μg/ml和100 μg/ml DDP处理36 h后细胞吸光度值(1.98±0.13、1.43±0.12)明显高于miR-203组细胞吸光度值(1.58±0.11、1.11±0.12),差异有统计学意义(t=3.781、3.017,P<0.05)。对照组细胞经50 μg/ml和100 μg/ml DDP处理36 h后细胞凋亡率[(30.54±5.81)%、(51.45±6.29)%]明显低于miR-203组细胞吸光度值[(49.29±5.00)%、(78.27±8.81)%],差异有统计学意义(t=3.781、3.017,P<0.05)。100 mg/kg DDP治疗20 d后,对照组细胞形成肿瘤体积[(498.35±43.10) mm3]明显大于miR-203组细胞体内肿瘤体积[(309.44±27.87) mm3],差异有统计学意义(t=5.091,P<0.05)。对照组细胞形成肿瘤质量[(8.91±1.29) g]明显高于miR-203组细胞体内肿瘤质量[(4.73±1.01) g],差异有统计学意义(t=3.182,P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶结果显示三磷酸腺苷结合盒转运子E1(ABCE1)是miR-203的靶基因。对照组细胞ABCE1表达水平(0.89±0.09)明显高于miR-203组细胞ABCE1表达水平(0.25±0.07),差异有统计学意义(t=4.761,P<0.05)。对照组细胞半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3表达水平(0.38±0.09)明显高于miR-203组细胞Caspase-3表达水平(1.21±0.13),差异有统计学意义(t=6.281,P<0.05)。结论miR-203通过靶向ABCE1蛋白调控食管癌对顺铂的耐药性。
简介:目的:探讨长链非编码RNA(longnon-codingRNA,lncRNA)SNHG20抑制结肠癌细胞对5-FU化疗敏感性的调控机制。方法:利用结肠癌细胞株LoVo构建对5-FU抵抗的细胞株LoVo/5-FU,通过qRTPCR的方法检测LoVo/5-FU中lncRNASNHG20的表达情况。进一步分别构建lncRNASNHG20稳定过表达及表达沉默的结肠癌细胞株,利用CCK-8的方法检测lncRNASNHG20对5-FUIC50的影响,通过平板克隆形成实验检测lncRNASNHG20对克隆形成能力的影响。最后运用Westernblot方法探讨lncRNASNHG20抑制结肠癌对5-FU化疗敏感性的调控机制。结果:在对5-FU耐药的结肠癌细胞株LoVo/5-FU中,lncRNASNHG20显著高表达(P〈0.001)。lncRNASNHG20高表达能明显提高5-FU的IC50,而沉默lncRNASNHG20则显著提高LoVo/5-FU对5-FU的敏感性(P〈0.001)。平板克隆形成实验结果显示lncRNASNHG20显著提高细胞的克隆形成能力(P〈0.001)。Westernblot结果表明,lncRNASNHG20能显著抑制结肠癌细胞株PTEN蛋白的表达,而p-AKT及p-PI3K表达水平明显上调。结论:lncRNASNHG20通过调控PTEN/PI3K/AKT信号通路抑制结肠癌细胞对5-FU的化疗敏感性。
简介:摘要目的探讨阿法替尼(Afatinib)与顺铂联合应用于膀胱癌细胞的协同作用,并对其作用机制及耐药性进行初步探讨。方法先进行膀胱癌阿霉素耐药T24细胞株(T24-ADM)的制备,用噻唑蓝(MTT)法观察Afatinib联合顺铂对T24细胞增殖的抑制作用;分别用MTT法检测Afatinib作用前后顺铂对T24-ADM细胞增殖的抑制作用。结果Afatinib和顺铂联合用药的T24细胞的增殖抑制率高于单用顺铂;顺铂对Afatinib作用后的T24-ADM细胞抑制率高于Afatinib作用前。结论Afatinib与顺铂同时作用膀胱癌T24细胞时,两者在抑制T24细胞增殖上表现出协同作用,Afatinib作用后顺铂对于膀胱T24-ADM细胞的抑制率高于单独用顺铂的抑制率。
简介:【摘要】目的:研究Ⅳ期结直肠癌化疗前血小板参数与化疗敏感性及预后的关系。方法:选取2017年1月~2017年12月院内Ⅳ期结直肠癌患者100例为观察对象,统计患者化疗前血小板计数,评估患者化疗效果。观察不同血小板计数分组患者的化疗效果及预后情况。结果:结合血小板数量进行分组,其中血小板计数≤276×109/L组患者的总有效率为60.00%,比照血小板计数>276×109/L组患者的36.36%,明显较高(P<0.05)。对患者进行为期5年随访,100例患者中3例失访,获取完整随访资料共计97例,两组患者3年与5年内生存率对比无差异性(P>0.05),但血小板计数>276×109/L的化疗后复发率为9.62%,明显高于血小板计数≤276×109/L患者(P<0.05)。结论:血小板计数与Ⅳ期结直肠癌患者化疗敏感性及预后相关,水平过高可降低化疗敏感性,并增加化疗后复发风险。
简介:摘要目的探索性研究Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1,YAP1)对胃癌细胞SGC-7901生物学行为能力及顺铂化疗敏感性的影响,分析相关作用机制。方法于2019年1月至2020年12月采用反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫印迹试验(Western blot,WB)检测正常胃上皮黏膜细胞GES1和胃癌细胞SGC-7901中YAP1相对表达量表达差异。实验分为沉默(Lv-shRNA-YAP1)组、阴性对照(Lv-shRNA-NC)组、空白对照组,构建YAP1沉默重组慢病毒颗粒Lv-shRNA-YAP1和阴性对照Lv-shRNA-NC分别转染胃癌细胞SGC-7901,空白对照组不做任何处理,分别采用细胞计数8(Cell Counting Kit-8,CCK8)实验、划痕实验、Transwell实验观察YAP1对胃癌细胞增殖、运动、迁移、侵袭等生物学行为能力的影响;向3组细胞加入不同浓度顺铂溶液,采用CCK8实验检测各组细胞存活率及顺铂对细胞的半数有效抑制浓度(IC50),取空白对照组、Lv-shRNA-YAP1组细胞加入IC50顺铂溶液,进一步分为空白对照组、Lv-shRNA-YAP1组、顺铂组、Lv-shRNA-YAP1+顺铂组,采用RT-PCR实验和WB实验比较4组细胞中YAP1及其下游靶基因胰岛素样生长因子(insulin like growth factor,IGF)、苏氨酸蛋白激酶(prote in k inase B,Akt)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)表达情况。结果与正常胃上皮黏膜细胞GES1[mRNA(1.00±0.03),蛋白(1.00±0.02)]比较,YAP1在胃癌细胞SGC-7901中呈高表达[mRNA(6.43±0.43),蛋白(2.54±0.13)],差异均有统计学意义(t=11.821、8.371,均P<0.05)。空白对照组胃癌细胞在24 h、48 h、72 h的增殖能力分别为(0.44±0.05)、(0.72±0.05)、(0.97±0.04),细胞运动距离(82.32±4.53)%,细胞迁移及侵袭能力分别为(543±43)个、(586±54)个,Lv-shRNA-NC组分别为(0.40±0.05)、(0.68±0.04)、(0.92±0.05)、(84.42±5.42)%、(523±51)个、(573±54)个,Lv-shRNA-YAP1组胃癌细胞在24 h、48 h、72 h的增殖能力均明显降低[分别为(0.34±0.04),(0.52±0.04),(0.73±0.05),均P<0.05],细胞运动距离明显较小[(51.42±5.31)%,P<0.05],细胞迁移及侵袭能力均明显降低[分别为(432±44)个、(485±53)个,均P<0.05]。当顺铂浓度为0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 μg/ml时,Lv-shRNA-YAP1组胃癌细胞SGC-7901存活率均明显低于空白对照组和Lv-shRNA-NC组细胞(均P<0.05);Lv-shRNA-YAP1组顺铂对细胞的IC50为(1.48±0.33)μg/ml,明显低于空白对照组和Lv-shRNA-NC组[分别为(4.43±0.32)μg/ml,(4.18±0.42)μg/ml,均P<0.05]。空白对照组细胞中IGF、Akt、TGF-β的mRNA和蛋白相对表达量分别为(1.00±0.03)、(1.00±0.02)、(1.00±0.04),(1.00±0.02)、(1.00±0.04)、(1.00±0.03),Lv-shRNA-YAP1组分别为(0.58±0.03)、(0.62±0.03)、(0.39±0.03),(0.78±0.03)、(0.73±0.03)、(0.74±0.05),顺铂组分别为(0.67±0.02)、(0.73±0.03)、(0.40±0.02),(0.72±0.04)、(0.74±0.04)、(0.77±0.05),Lv-shRNA-YAP1组和顺铂组细胞中IGF、Akt、TGF-β的mRNA和蛋白相对表达量明显优于空白对照组细胞(均P<0.05),Lv-shRNA-YAP1+顺铂组细胞中IGF、Akt、TGF-β的mRNA和蛋白相对表达量[(0.70±0.02)、(0.68±0.03)、(0.34±0.04),(0.51±0.03)、(0.46±0.03)、(0.55±0.05)]则明显低于Lv-shRNA-YAP1组和顺铂组(均P<0.05)。结论YAP1蛋白在胃癌细胞SGC-7901中高表达,靶向沉默YAP1蛋白可有效改善胃癌细胞SGC-7901对顺铂的敏感性,抑制肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭,其机制可能与IGF、Akt、TGF-β表达下调有关。
简介:目的探究食管癌同步放化疗敏感性与p53基因表达的关系,为预测食管癌的疗效提供一定参考。方法检测选取的63例食管癌患者的外周血白细胞中p53基因mRNA的表达情况。对每位患者给予总量为60~70Gy的三维适形调强放疗以及2周期同步氟尿嘧啶+顺祐(DF)方案化疗,观察、分析p53基因表达和同步放化疗疗效间的关系。结果p53阳性组24例中CR为7例,PR为12例,SD为3例,PD为2例。p53阴性组39例中CR为20例,PR为16例,SD为3例,PD为0例,阳性组的治疗有效率为76%,明显低于阴性组的92.31%。两组间的疗效差异有统计学意义(P<0.05)。结论食管癌患者放、化疗敏感性可将p53基因表达量的检测作为一个参考指标。食管癌外周血的p53基因表达,可反映出癌瘤组织的某些生物学特性,结合p53的表达量,可指导放、化疗方案的科学制定。
简介:摘要目的应用基因表达谱芯片,筛选下咽鳞状细胞癌患者对紫杉醇+顺铂+5-氟尿嘧啶(TPF)方案诱导化疗敏感性的差异表达基因,并进行初步分析。方法选取2013年1月至2017年12月北京同仁医院头颈外科29例原发下咽鳞状细胞癌患者(男28例,女1例,年龄43~73岁)TPF方案诱导化疗治疗前的新鲜肿瘤标本。分为诱导化疗敏感组(16例)和不敏感组(13例)。应用Illumina人类全基因组表达芯片检测2组的表达差异,对差异基因进行生物信息学分析。在29例样本基础上增加符合入组条件的14例样本,应用反转录实时定量聚合酶链反应(reverse transcription and quantitative real-time PCR,RT-qPCR)技术检测潜在功能核心基因在诱导化疗敏感组患者及诱导化疗不敏感组患者组织中表达的差异。采用Graphpad prism 7.0软件对测量结果进行统计分析。结果共筛选出1 381个差异基因。经GO(Gene Ontology)数据库分析,功能上调的集合主要包括:细胞外基质隔离、趋化因子受体结合、钾离子通道调节活性等集合;下调的集合包括:血管生成调节、钙离子结合、自然杀伤细胞免疫应答活性等集合。经KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)数据库分析,下调通路主要有:细胞外基质受体相互作用通路、过氧化物酶体通路等;上调通路主要有:谷胱甘肽代谢通路、过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator activated receptor,PPAR)信号通路等。其中CD44、IL-6R分别为表达下调基因和上调基因,可能位于核心功能调控位置。经RT-qPCR检测,CD44 mRNA在诱导化疗不敏感组织中相对表达量(0.54±0.06)显著高于诱导化疗敏感组织(0.33±0.04)中相对表达量(P<0.01);IL-6R mRNA在诱导化疗不敏感组织中相对表达量(0.44±0.03)显著低于诱导化疗敏感组织中相对表达量(0.68±0.03),差异有统计学意义(P<0.01)。结论CD44、IL-6R可能是下咽鳞状细胞癌TPF诱导化疗敏感性相关的潜在功能性基因。
简介:目的探讨乳腺癌基因BRCA1在乳腺癌组织中的表达与多西紫杉醇化疗敏感性的关系.方法应用免疫组化方法检测乳腺癌患者癌组织中BRCA1的表达,用含多西紫杉醇化疗方案(TEC)对该组患者行新辅助化疗,分析其与多西紫杉醇化疗敏感性的关系.结果乳腺癌患者BRCA1表达阳性患者完全缓解率、部分缓解率、稳定率、进展率分别为22.6%、71.7%、5.7%、0%;乳腺癌患者BRCA1表达阴性患者完全缓解率、部分缓解率、稳定率、进展率分别为11.8%、58.9%、27.4%、2.0%,2组相比各项指标差异均有统计学意义.结论BRCA1表达水平与含多西紫杉醇的化疗方案(TEC)的化疗敏感性呈显著正相关,BRCA1可能作为一项预测紫杉醇类疗效、筛选乳腺癌化疗药物、指导制定合理治疗方案的新指标.
简介:目的观察靶向血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)基因小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)对胰腺癌BxPC3细胞化疗药物敏感性的影响,并探讨其可能机制.方法将培养后的BxPC3细胞分为单纯BxPC3细胞组、脂质体处理组、错配siRNA转染组和VEGFsiRNA转染组.以5、10、20、100、200nmol/L的VEGFsiRNA转染BxPC3细胞.采用实时定量RT-PCR和ELASA法检测细胞VEGFmRNA和蛋白的表达;MTT法检测吉西他滨对各组细胞生长的影响;蛋白质印迹法检测BxPC3细胞Akt蛋白的磷酸化.结果VEGFsiRNA转染后,BxPC3细胞VEGFmRNA和蛋白呈浓度和时间依赖性明显下调,但对BxPC3细胞的增殖无明显影响.用0.2μmol/L吉西他滨处理细胞48h后,BxPC3细胞组、错配siRNA组及5、10、20nmol/LsiRNA组细胞的生长抑制率分别为(16.9±0.3)%、(17.3±0.3)%、(28.8±0.4)%、(52.2±0.3)%、(75.4±0.4)%,抑制率与siRNA浓度相关(r=0.928).同时,siRNA转染后细胞Akt蛋白的磷酸化被明显抑制.结论VEGF基因在胰腺癌BxPC3细胞耐药中起着重要的作用,其机制可能与Akt蛋白磷酸化有关.
简介:摘要目的探讨膀胱癌组织中二肽基肽酶-4(DPP4)的表达,以及其对膀胱癌增殖,迁移和侵袭的以及顺铂化疗敏感性调节。方法收集江苏省人民医院32例膀胱癌患者的根治性膀胱切除术后的病理标本,包括膀胱癌组织及癌旁组织。使用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测DPP4在膀胱癌组织和细胞株中的表达。在BIU87细胞系中转染DPP4小干扰RNA(siRNA)及其阴性对照,分组为DPP4敲低组(si-DPP4)和对照组(si-NC),通过细胞计数试剂盒(CCK-8)实验,细胞克隆,划痕实验和Transwell实验分别观察DPP4对膀胱癌增殖,迁移和侵袭的影响。通过蛋白质印迹法(Western blot)法检测DPP4蛋白表达情况和顺铂耐药实验验证DPP4对膀胱癌化疗敏感性的影响。结果RT-qPCR结果表明DPP4在膀胱癌组织中表达水平高于正常组织表达水平,差异有统计学意义(t=3.90,P<0.01);膀胱癌细胞系中表达水平(2.55±0.29、1.54±0.23)高于人正常膀胱上皮细胞系(1.00±0.03),差异有统计学意义(t=9.30、3.92,P<0.01),生存分析显示DPP4高表达与预后不良明显相关(P<0.05)。与对照组比较,DPP4敲低组的细胞增殖能力(0.84±0.02,0.87±0.02)低于敲低对照组(0.92±0.02),差异有统计学意义(t=5.08、3.65,P<0.05)、DPP4敲低组的克隆数[(203.98±6.73)、(252.77±5.83)个]低于敲低对照组[(351.64±8.53)个],差异有统计学意义(t=23.53、16.57,P<0.01)、DPP4敲低组的迁移能力(2.24±0.43,3.12±0.47)低于敲低对照组的迁移能力(7.59±0.44),差异有统计学意义(t=15.11、12.05,P<0.01);DPP4敲低组的侵袭数目[(147.23±8.71)、(179.19±9.83)个]低于敲低对照组[(372.21±18.52)个],差异有统计学意义(t=19.02、15.94,P<0.01)能力下降。顺铂药物敏感性实验表明,DPP4敲低组(18.63±1.40、19.56±1.47)膀胱癌细胞顺铂半数抑制浓度(IC50)值低于敲低对照组(26.21±1.78),差异有统计学意义(t=5.78、4.98,P<0.01),并且在同时应用顺铂和DPP4抑制剂西他列汀时IC50值(16.96±1.10)低于顺铂单药对照组IC50值(23.62±1.88),差异有统计学意义(t=5.284,P<0.01)。结论敲低DPP4基因可以通过抑制膀胱癌细胞的增殖,迁移和侵袭能力,同时增加顺铂化疗敏感性,最终限制膀胱癌进展。