简介:研究在BEP2D细胞中,作为Smads蛋白家族的抑制分子,Smad7对胞外信号调节的蛋白激酶(ERK1/2或p44/42)磷酸化水平的调控。将Smad7真核表达载体或人工合成的Smad7-siRNA转染BEP2D细胞,TGF—β刺激,通过Western印迹检测Smad7对p44/42蛋白磷酸化的影响。结果在永生化BEP2D细胞中,TGF-β1刺激后5min开始,可以检测到磷酸化的p44/42;到60min达到高峰,之后逐渐降低。细胞转染Smad7,TGF-β作用60rain后,p44/42磷酸化水平明显增高;而转染Smad7-SiRNA,TGF-β作用60min后,p44/42磷酸化水平显著降低。p44/42蛋白水平基本上不受TGF—β1刺激及Smad7表达水平的影响。以上结果说明,在BEP2D细胞中,Smad7可参与TGF—β对ERK/MAPK通路的活化作用。
简介:摘要目的探讨胃癌组织中肿瘤相关性成纤维细胞分泌胞外体中微小RNA(miR)-374a-5p的表达及其临床意义。方法新鲜胃癌组织分离肿瘤相关成纤维细胞,提取胞外体,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测胞外体中miR-374a-5p的表达水平,分析miR-374a-5p的表达水平与胃癌患者临床病理特征和预后的关系。数据分析采用t检验、χ2检验,Kaplan-Meier生存曲线法及Cox比例风险模型。结果胃癌胞外体中miR-374a-5p的表达水平高于正常人(2.571±0.213比1.244±0.125,t=7.663,P=0.011),其高表达与胃壁浸润深度(T1,T2/T3,T4高表达,25/45,P=0.019)、淋巴结转移(无/有淋巴结转移高表达,19/51,P=0.045)、肿瘤部位(近端/远端胃癌高表达,28/42,P=0.008)、远处转移(无/有远处转移高表达,47/23,P=0.022)、临床分期(早期/进展期高表达,9/61,P=0.023)及生存时间(高/低表达平均生存时间,37.8个月/48.1个月,P= 0.001)等均相关,是影响胃癌预后独立因素(P=0.000)。结论胃癌胞外体中miR-374a-5p表达升高可促进胃癌的发展并影响预后。
简介:从青岛海藻化工厂海带浸泡液中分离得到产酸克雷伯氏菌(KlebsiellaoxytocaXCH-1)。在有氧条件下。该菌在生长过程中产生大量的胞外多糖。并且粘度很大。目前国内外尚未有关于该菌胞外多糖理化性质的研究报道。实验用KlebsiellaoxytocaXCH-1胞外多糖为化学均一物质。用气相色谱分析法分析KlebsiellaoxytocaXCH-1胞外多糖单糖组分,结果表明其主要由D-葡萄糖、D-半乳糖和L-鼠李糖组成。
简介:摘要:细菌在面对环境压力时,通常会主动调节自身的生理行为以聚集生长或形成生物膜来抵御恶劣环境的影响。普遍存在于冷却水塔、食品加工厂或饮用水系统中的生物膜会导致微生物污染和系统堵塞,造成社会经济损失、威胁公众健康安全。生物膜形成包含一系列复杂的变化过程,由表面附着开始,随后是微菌落的形成和分化结构的演化。本文综述了细菌鞭毛介导的运动以及分泌的胞外聚合物(extracellular polymeric substances,EPS)在生物膜初期形成中的作用,并在此基础上为探究生物膜形成的内在机制提出了建议,以期为饮用水系统和其它水环境的微生物污染控制提供理论指导和新的思路。
简介:摘要目的探讨肿瘤相关性成纤维细胞分泌胞外体增强胃癌干细胞化疗耐药。方法收集2019年1月新鲜胃癌组织,从中分离出新鲜胃癌组织中分离肿瘤相关成纤维细胞,收集其条件培养基,提取胞外体,分为条件培养基组、胞外体组和对照组,体外成球实验和体内成瘤实验观察加入条件培养基或胞外体条件下,5-氟尿嘧啶对胃癌干细胞成球能力、成瘤能力和肿瘤生长速度的影响。蛋白质印迹法(Western blot)检测Wnt信号通路的主要蛋白β-连环蛋白(β-catenin)和Wnt2。采用t检验。结果体外成球实验和体内成瘤实验显示,在加入条件培养基或胞外体条件下,5-氟尿嘧啶对胃癌干细胞成球率[(2.90±0.25)%、(1.40±0.21)%,t=8.318,P<0.05;(3.40±0.34)%、(1.39±0.16)%,t=3.324,P<0.05]、成瘤能力[(483.36±39.15)、(185.25±12.31) mg,t=14.713,P<0.05;(572.62±47.39)、(188.36±13.19) mg,t=18.412,P<0.05]和肿瘤生长速度[(622.45±51.06)、(235.32±28.25) mm3,t=14.168,P<0.05;(702.45±65.31)、(255.39±20.47) mm3,t=13.308,P<0.05]均明显高于对照组,差异均有统计学意义。体外实验中加入胞外体后β-catenin和Wnt2表达明显增强,而胞外体抑制剂GW4869处理后β-catenin和Wnt2明显减弱(0.61±0.07、0.28±0.06;0.58±0.05、0.24±0.03),差异有统计学意义(t=5.284、6.380,P<0.05)。结论肿瘤相关成纤维细胞可通过胞外体增强胃癌干细胞的耐药性,机制可能与增强Wnt信号通路有关。
简介:目的初步探讨新生隐球菌分泌的胞外蛋白水解酶在新生隐球菌穿越血脑屏障致病过程中的作用。方法在含有成熟的脑微血管内皮细胞的培养皿中,分别加入胞外蛋白水解酶相关成分及其特异性抑制剂后,利用相差显微镜动态观察微血管内皮细胞形态学的改变;应用免疫组织细胞化学技术检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、微管相关蛋白(Tau-LRP)和低密度脂蛋白受体相关蛋白(LDL—LRP)表达的变化。结果①加入丝氨酸蛋白酶1h后可观察到内皮细胞开始收缩,面积变小,细胞间隙增宽,细胞收缩有时间依从性,至10h时仅为处理前的20%;加入丝氨酸蛋白酶+抑肽酶后细胞形态学无明显变化(P〉0.05)。②加入隐球菌浓缩上清液1h后内皮细胞开始收缩,至6h时为原来的20%;加入菌株浓缩上清液+抑肽酶后细胞形态学无明显变化(P〉0.05)。③丝氨酸蛋白酶使内皮细胞的MMP-9、Tau.LRP、LDL—LRP的表达上调,与对照组比较,有显著统计学差异(P〈0.01)。结论新生隐球菌分泌的胞外蛋白水解酶可能通过上调MMP-9和(或)Tau—LRP、LDL—LRP的表达,诱导内皮细胞基质降解和细胞自身微管结构及紧密连接发生变化,最终导致血脑屏障通透性增加,菌体细胞穿越血脑屏障而致病。