简介：摘要目的探讨骆驼蓬总碱(TAH)能否诱导神经细胞自噬并促进神经毒性蛋白Tau蛋白和α-突触核蛋白(α-Syn)的降解。方法(1)将体外培养的PC12细胞分为空白对照组及1、2.5、5、10、20、50 μg/mL TAH组，分别加入0、1、2.5、5、10、20、50 μg/mL TAH作用24 h，观察细胞形态及数目的变化，采用MTT法检测细胞存活率；(2)将PC12细胞分为空白对照组、雷帕霉素组及1、2.5、5、10、20 μg/mL TAH组，分别加入等量溶剂、50 nmol/L自噬激活剂雷帕霉素及1、2.5、5、10、20 μg/mL TAH作用4 h，采用免疫荧光染色检测细胞自噬体数；(3)将PC12细胞分为空白对照组、雷帕霉素组、10 μg/mL TAH组，分别加入等量溶剂、50 nmol/L雷帕霉素、10 μg/mL TAH作用4 h，Western blotting检测细胞p62和微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ蛋白的表达；(4)将PC12细胞分为空白对照组、氯喹组、TAH组、TAH+氯喹组，分别加入等量溶剂、50 nmol/L自噬抑制剂氯喹、10 μg/mL TAH、10 μg/mL TAH+50 nmol/L氯喹作用4 h，Western blotting检测细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达；(5)将PC12细胞分为TAH组和空白对照组，分别加入10 μg/mL TAH和等量溶剂处理4 h后，Western blotting检测细胞磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、磷酸化p70核糖体蛋白S6激酶(p-p70S6K)的表达；(6)将过表达Tau-绿色荧光蛋白(GFP)的Tet on HEK293细胞分为空白对照组、TAH组、强力霉素组、强力霉素+TAH组、强力霉素+TAH+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、强力霉素+TAH+氯喹组，后4组细胞加入200 ng/mL强力霉素处理24 h后，空白对照组加入等量溶剂，TAH组加入10 μg/mL TAH，后3组细胞分别加入10 μg/mL TAH、10 μg/mL TAH+5 mmol/L 3-MA、10 μg/mL TAH+50 nmol/L氯喹，作用24 h后在激光共聚焦显微镜下观察细胞绿色荧光强度的变化，Western blotting检测细胞Tau-GFP和LC3-Ⅱ蛋白的表达；(7)将稳定表达α-Syn的HEK293细胞分为空白对照组、氯喹组、TAH组、TAH+氯喹组，分别加入等量溶剂、50 nmol/L氯喹、10 μg/mL TAH、10 μg/mL TAH+50 nmol/L氯喹作用24 h，Western blotting检测细胞α-Syn和LC3-Ⅱ蛋白的表达。结果(1)与空白对照组比较，20、50 μg/mL TAH组细胞存活率降低，且50 μg/mL TAH组细胞存活率低于20 μg/mL TAH组，差异均有统计学意义(P<0.05)；(2)与空白对照组比较，雷帕霉素组、10、20 μg/mL TAH组细胞自噬体数增多，且10 μg/mL TAH组细胞自噬体数多于20 μg/mL TAH组，差异均有统计学意义(P<0.05)，因此，选择10 μg/mL TAH用于后续实验；(3)与空白对照组比较，雷帕霉素组、TAH组细胞p62蛋白的表达均降低，LC3-Ⅱ蛋白的表达均增加，差异均有统计学意义(P<0.05)；(4)与空白对照组比较，氯喹组、TAH组、TAH+氯喹组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达均增加，且TAH+氯喹组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达高于氯喹组，差异均有统计学意义(P<0.05)；(5)与空白对照组比较，TAH组细胞p-mTOR、p-p70S6K的表达均降低，差异均有统计学意义(P<0.05)；(6)强力霉素组细胞Tau-GFP蛋白的表达较空白对照组增加，强力霉素+TAH组细胞Tau-GFP蛋白的表达较强力霉素组降低，强力霉素+TAH+3-MA组、强力霉素+TAH+氯喹组细胞Tau-GFP蛋白的表达较强力霉素+TAH组增高，差异均有统计学意义(P<0.05)。TAH组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达较空白对照组增加，强力霉素+TAH组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达较强力霉素组增加，强力霉素+TAH+3-MA组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达较强力霉素+TAH组降低，强力霉素+TAH+氯喹组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达较强力霉素+TAH组增高，差异均有统计学意义(P<0.05)；(7)与空白对照组比较，TAH组HEK293细胞α-Syn蛋白的表达降低，LC3-Ⅱ蛋白的表达升高，差异均有统计学意义(P<0.05)；TAH+氯喹组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达高于氯喹组，TAH+氯喹组细胞α-Syn蛋白的表达高于TAH组，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论TAH可能通过抑制mTOR/p70S6K信号通路激活神经细胞自噬，从而促进Tau和α-Syn的降解。

简介：摘要目的评价单核细胞趋化蛋白1诱导蛋白(MCPIP-1)在脓毒症大鼠急性肺损伤中的作用。方法清洁级健康雄性SD大鼠48只，8~12周龄，体重230~270 g，采用随机数字表法分为6组(n＝8)：假手术组(S组)、不同剂量泛素-蛋白酶体抑制剂组(M1组和M2组)、盲肠结扎穿孔(CLP)组和不同剂量泛素-蛋白酶体抑制剂＋CLP组(M1-CLP组和M2-CLP组)。采用CLP法制备大鼠脓毒症急性肺损伤模型。M1组和M2组假手术前30 min分别腹腔注射泛素-蛋白酶体抑制MG-132 5、10 mg/kg；M1-CLP和M2-CLP组于CLP前30 min分别腹腔注射MG-132 5、10 mg/kg。于CLP后6 h时处死大鼠，制备支气管肺泡灌洗液(BALF)，采用ELISA法检测TNF-α、IL-1β及IL-6浓度；取肺组织，行肺损伤评分，计算肺组织湿重/干重(W/D)比值，分别采用Western blot法和RT-PCR法检测MCPIP-1及其mRNA表达。结果与S组比较，CLP组肺损伤评分、W/D比值、BALF TNF-α、IL-1β及IL-6浓度升高(P<0.05)，M1组、M2组上述指标差异无统计学意义，CLP组肺组织MCPIP-1及其mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)，M1组和M2组肺组织MCPIP-1及其mRNA表达上调(P<0.05)；与CLP组比较，M1-CLP组和M2-CLP组肺损伤评分、W/D比值、BALF TNF-α、IL-1β及IL-6浓度降低，肺组织MCPIP-1及其mRNA表达上调(P<0.05)。结论MCPIP-1在脓毒症大鼠急性肺损伤时发挥内源性保护作用。

简介：无

简介：摘要目的观察血管内皮生长因子(VEGF)对小鼠单核/巨噬细胞系RAW 264.7的趋化作用，以及β2-糖蛋白Ⅰ(β2-GP)对VEGF诱导巨噬细胞迁移的影响，探讨其可能机制。方法体外培养RAW 264.7小鼠单核/巨噬细胞系，实验分为5组：空白对照组、VEGF组、VEGF＋β2-GP组、VEGF＋SB203580(p38抑制剂)组、β2-GP组。Transwell实验观察β2-GP对VEGF诱导巨噬细胞迁移的影响。ELISA法检测β2-GP对VEGF诱导巨噬细胞分泌趋化因子单核细胞趋化蛋白(MCP)-1、白细胞介素(IL)-8以及巨噬细胞炎性蛋白-1β(MIP-1β)的影响。Western印迹检测β2-GP对VEGF干预下巨噬细胞VEGF受体1(VEGFR1)和p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。结果(1)与空白对照组相比，VEGF组巨噬细胞迁移的数量增加(t＝22.089，P<0.05)，与VEGF组相比，VEGF＋β2-GP组和VEGF＋SB203580组巨噬细胞迁移明显降低(t＝22.687、63.625，P均<0.05)。(2)与空白对照组相比，VEGF组巨噬细胞趋化因子MCP-1、IL-8及MIP-1β的分泌增加(t＝3.339、11.140、2.254，P均<0.05)，与VEGF组相比，VEGF＋β2-GP组和VEGF＋SB203580组抑制VEGF诱导的3种趋化因子的分泌减少(t＝3.148、2.402、2.798、6.754、4.459、5.528，P均<0.05)。(3)与空白对照组相比，VEGF组巨噬细胞VEGFR1的表达及p38MAPK通路的磷酸化程度增加(t＝5.161，P<0.05)；与VEGF组相比，VEGF＋β2-GP组巨噬细胞VEGFR1表达及p38MAPK通路的磷酸化程度降低(t＝4.965，P<0.05)。结论VEGF通过促进巨噬细胞VEGFR1表达，活化p38MAPK，促进巨噬细胞的迁移以及趋化因子MCP-1、IL-8、MIP-1β的分泌；β2-GP可抑制VEGFR1的表达，部分抑制p38MAPK磷酸化，从而抑制VEGF诱导的巨噬细胞迁移及趋化因子分泌。

简介：摘要目的探讨经典型蛋白激酶C（PKC）对低氧诱导的小鼠远端肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖及细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）、丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（Akt）表达的影响。方法利用Dynal MPC-1磁分离器分离含铁粉的远端肺小动脉，原代培养并鉴定肺动脉平滑肌细胞。应用PKC激动剂（PMA）、PKCα抑制剂（safingol）、PKCβⅠ抑制剂（Go6976）、PKCβⅡ抑制剂（LY333531）分别干预细胞。在常氧和低氧条件下，采用免疫印迹法观察cPKC亚型蛋白表达变化以及ERK1/2、Akt磷酸化水平变化。应用PKCα、PKCβ的慢病毒载体，通过病毒转染技术特异性敲减目标基因活性，采用免疫印迹法观察低氧诱导小鼠PASMC中cPKC亚型蛋白表达变化，以及ERK1/2、Akt磷酸化水平变化。结果采用Brdu法，检测到用safingol、Go6976、LY333531分别抑制cPKCα、βⅠ和βⅡ时，低氧诱导的PASMC增殖能力受到明显抑制，与低氧对照组相比，Brdu阳性细胞率分别为（7.35±0.26）% vs（11.28±0.43）%，（3.76±0.25）% vs（7.98±0.28）%和（4.12±0.46）% vs（7.78±0.53）%；且PMA在常氧条件下可显著促进PASMC的增殖能力，与常氧对照组相比，Brdu阳性细胞率分别为（9.65±0.47）% vs（6.34±0.52）%，（9.34±0.38）% vs（5.42±0.21）%和（7.78±0.53）% vs（4.12±0.46）%；此外经过PKCα、PKCβ的慢病毒载体转染细胞后，也发现低氧转染组的PASMC增殖能力较空载对照组显著下降，Brdu阳性细胞率分别为（3.58±0.54）% vs（5.97±0.63）%。用safingol、Go6976、LY333531分别抑制cPKCα、βⅠ和βⅡ表达后，低氧诱导的PASMC中ERK1/2、Akt的磷酸化水平较对照组显著降低，使用safingol之后，ERK1/2、Akt的磷酸化水平分别为：0.56±0.07 vs 1.08±0.13和0.49±0.04 vs 0.97±0.08，使用Go6976之后，ERK1/2、Akt的磷酸化水平分别为：0.41±0.09 vs 0.79±0.10和0.48±0.09 vs 0.82±0.16，使用LY333531之后，ERK1/2、Akt的磷酸化水平分别为：0.42±0.03 vs 0.87±0.06和0.34±0.07 vs 0.78±0.05；PMA可使常氧条件下PASMC中ERK1/2、Akt的磷酸化水平增高，分别为1.25±0.12 vs 0.41±0.07和0.98±0.06 vs 0.37±0.08；利用病毒转染技术对cPKCα、β的表达进行特异性敲底，发现在低氧条件下，转染细胞后均可使细胞中ERK1/2磷酸化水平显著降低，其磷酸化水平为0.29±0.06 vs 0.76±0.05，而Akt磷酸化水平较对照组无明显变化。结论激动剂及抑制剂干预或病毒转染可使PASMC中cPKCα、βⅠ和βⅡ表达下降，可显著抑制低氧诱导的小鼠远端PASMC异常增殖，其作用机制可能与cPKCα、βⅠ和βⅡ蛋白表达上调有关。低氧可能通过上调cPKCα、βⅠ和βⅡ的蛋白表达，使得ERK1/2磷酸化水平增高，最终引起小鼠远端PASMC的异常增殖，参与低氧性肺动脉高压的形成过程。

简介：摘要目的探讨环指蛋白152(RNF152)在结肠炎相关结肠癌(CAC)发生发展过程中的作用及其作用机制。方法联合应用氧化偶氮甲烷(AOM)和葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导C57BL/6小鼠，建立CAC发生发展4个阶段(分别为正常上皮组织、炎症恢复期、轻度不典型增生、腺癌)的小鼠模型。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测不同阶段小鼠结肠组织中RNF152 mRNA的表达。利用人结直肠癌RKO细胞建立稳定高表达RNF152的细胞系。采用流式细胞术检测RNF152高表达对细胞凋亡的影响，Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bcl-XL的表达。使用NO自由基供体DETA NONOate处理细胞，比较RNF152高表达对NO诱导细胞凋亡的影响。结果AOM和DSS联合使用能有效地模拟人类CAC的病程，AD3组小鼠成瘤率为100%。CAC小鼠模型的结肠全基因组表达谱芯片显示，RNF152 mRNA的表达水平随着结肠癌的发生发展逐步降低。RT-qPCR检测结果显示，腺癌组结肠组织中RNF152 mRNA的表达水平为1.23±0.18，高于对照组结肠组织(0.52±0.08, P<0.01)。RNF152稳定高表达的RKO-RNF152细胞中，sub-G1期细胞比例[(3.6±0.4)%]高于RKO-PCDB细胞[(1.8±0.1)%, P<0.01]，Bcl-XL和Bcl-2的蛋白表达水平明显下调。DETA NONOate处理后，RKO-RNF152细胞的凋亡比例为(31.2±3.1)%，高于RKO-PCDB细胞[(14.2±2.1)%, P<0.001]。结论RNF152的表达降低与CAC的发生发展有关，可能通过抑制细胞凋亡促进了CAC的发生发展。

简介：摘要目的探讨环指蛋白152(RNF152)在结肠炎相关结肠癌(CAC)发生发展过程中的作用及其作用机制。方法联合应用氧化偶氮甲烷(AOM)和葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导C57BL/6小鼠，建立CAC发生发展4个阶段(分别为正常上皮组织、炎症恢复期、轻度不典型增生、腺癌)的小鼠模型。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测不同阶段小鼠结肠组织中RNF152 mRNA的表达。利用人结直肠癌RKO细胞建立稳定高表达RNF152的细胞系。采用流式细胞术检测RNF152高表达对细胞凋亡的影响，Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bcl-XL的表达。使用NO自由基供体DETA NONOate处理细胞，比较RNF152高表达对NO诱导细胞凋亡的影响。结果AOM和DSS联合使用能有效地模拟人类CAC的病程，AD3组小鼠成瘤率为100%。CAC小鼠模型的结肠全基因组表达谱芯片显示，RNF152 mRNA的表达水平随着结肠癌的发生发展逐步降低。RT-qPCR检测结果显示，腺癌组结肠组织中RNF152 mRNA的表达水平为1.23±0.18，高于对照组结肠组织(0.52±0.08, P<0.01)。RNF152稳定高表达的RKO-RNF152细胞中，sub-G1期细胞比例[(3.6±0.4)%]高于RKO-PCDB细胞[(1.8±0.1)%, P<0.01]，Bcl-XL和Bcl-2的蛋白表达水平明显下调。DETA NONOate处理后，RKO-RNF152细胞的凋亡比例为(31.2±3.1)%，高于RKO-PCDB细胞[(14.2±2.1)%, P<0.001]。结论RNF152的表达降低与CAC的发生发展有关，可能通过抑制细胞凋亡促进了CAC的发生发展。

简介：摘要目的探讨甲胎蛋白抑制顺铂诱导的肝癌细胞凋亡的分子机制。方法选用HepG2(甲胎蛋白阳性)和QSG-7701(甲胎蛋白阴性)两种常见肝癌细胞系。分别在HepG2细胞中转染甲胎蛋白干扰质粒和在QSG-7701细胞中转染甲胎蛋白过表达质粒，培养12、24、36和48 h后，采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖情况；在HepG2和QSG-7701细胞中分别干扰和过表达甲胎蛋白24 h后，加入凋亡诱导剂顺铂，采用流式细胞术检测甲胎蛋白对顺铂诱导的肝癌细胞凋亡的影响；采用蛋白质免疫共沉淀技术(CoIP)检测甲胎蛋白与转录因子维甲酸受体(RAR)的相互作用；运用染色质免疫共沉淀技术(ChIP)实验联合蛋白质印迹法验证甲胎蛋白表达水平对DNA损伤诱导转录基因1(DDIT1)表达的影响，以及甲胎蛋白和DDIT1对肝癌细胞凋亡的影响。统计学方法采用t检验。结果CCK-8结果显示，质粒转染12、24、36和48 h后，过表达甲胎蛋白的QSG-7701细胞相对增殖率分别较对照组升高28.7%±2.7%、49.8%±6.1%、65.8%±3.0%和79.3%±2.0%，而敲减甲胎蛋白后的HepG2细胞相对增殖率分别较对照组降低16.5%±6.1%、28.5%±5.7%、42.5%±1.7%和57.6%±3.8%，差异均有统计学意义(t＝3.978、4.357、3.461、3.636、2.858、2.446、3.233、4.492，P均<0.05)。流式细胞术结果显示，QSG-7701细胞过表达甲胎蛋白24和48 h后的细胞凋亡率较单独顺铂处理细胞24和48 h后分别降低46.3%±2.9%和47.7%±7.4%，HepG2细胞敲减甲胎蛋白24和48 h后的细胞凋亡率较单独顺铂处理细胞24和48 h后分别升高86.7%±4.0%和31.6%±10.5%，差异均有统计学意义(t＝3.543、3.893、2.336、2.561，P均<0.05)。CoIP实验结果显示，AFP与RAR能够发生相互作用。在HepG2细胞中敲减甲胎蛋白表达后，提取核蛋白发现RAR的入核较对照组增加；而在QSG-7701细胞中过表达甲胎蛋白后，RAR的入核较对照组减少。ChIP实验结果显示，AFP能够调控DDIT1表达。敲减甲胎蛋白的HepG2细胞中DDIT1表达量高于对照组，而过表达甲胎蛋白的QSG-7701细胞中DDIT1表达量低于对照组。转染DDIT1后，HepG2和QSG-7701细胞凋亡率分别较对照组上升53.1%±4.0%和73.3%±6.4%，差异均有统计学意义(t＝3.462、3.012，P＝0.009、0.017)。在QSG-7701细胞中，过表达甲胎蛋白后细胞凋亡率较单独加入顺铂下降46.6%±4.8%，过表达甲胎蛋白＋顺铂＋过表达DDIT1后细胞凋亡率较过表达甲胎蛋白＋顺铂上升43.6%±2.7%，差异均有统计学意义(t＝2.833、2.545，P＝0.018、0.029)。在HepG2细胞中，敲减甲胎蛋白后的细胞凋亡率较单独加入顺铂上升73.3%±6.1%，敲减甲胎蛋白＋顺铂＋敲减DDIT1后的细胞凋亡率较敲减甲胎蛋白＋顺铂下降32.7%±3.7%，差异均有统计学意义(t＝2.497、2.773，P＝0.032、0.020)。结论甲胎蛋白能够通过与转录因子RAR相互作用，抑制其下游基因DDIT1表达，不仅促进肝癌细胞增殖，还可增强肝癌细胞的抗凋亡能力，削弱顺铂对肝癌细胞的促凋亡作用。

简介：摘要目的探讨肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子1（TIPE1）在顺铂诱导的急性肾损伤（AKI）动物模型及细胞中的表达及作用。方法12只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠被随机分为对照组和模型组，模型组小鼠接受20 mg/kg顺铂单次腹腔注射，对照组给予单次20 mg/kg生理盐水腹腔注射，5 d后处死小鼠并留取血清和肾脏标本。检测Scr、血BUN水平；HE染色法观察小鼠肾组织病理学改变；免疫组化法检测肾组织TIPE1的表达；实时荧光定量PCR法检测小鼠肾组织TIPE1 mRNA相对表达量；Western印迹法检测肾组织TIPE1和小管损伤标志物中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（NGAL）相对表达量。20 μmol/L顺铂刺激人肾近端小管上皮细胞（HK-2）0、6、12、24 h构建体外顺铂诱导急性肾损伤细胞模型，实时荧光定量PCR法及Western印迹法检测HK-2细胞TIPE1 mRNA和蛋白的表达水平。用包含TIPE1 siRNA序列的慢病毒靶向沉默TIPE1基因，20 μmol/L顺铂处理TIPE1稳定敲除的HK-2细胞株24 h，Western印迹法检测HK-2细胞NGAL、自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链（LC）3及Beclin1的表达。结果与对照组相比，模型组小鼠肾组织中TIPE1 mRNA及蛋白表达量、NGAL蛋白表达量显著升高（均P<0.05）；HK-2细胞TIPE1 mRNA及蛋白表达量随顺铂处理时间延长而增加（均P<0.05）。慢病毒干扰HK-2的TIPE1表达后，TIPE1 siRNA组的HK-2细胞NGAL、LC3-Ⅱ及Beclin1蛋白表达较阴性对照Scramble组显著升高（均P<0.05）。结论急性肾损伤模型中TIPE1 mRNA及蛋白表达增加。沉默TIPE1表达后，早期肾小管损伤标志物及自噬相关蛋白表达增加，提示过度自噬加重肾小管损伤，TIPE1可能参与了急性肾损伤的发病过程。

简介：无

简介：摘要目的探讨基质金属蛋白酶9（MMP-9）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、迁移诱导蛋白7（MIG-7）、细丝蛋白A（FLNa）在结肠癌组织中的表达及其对预后的影响。方法收集2013年1月至2015年12月南京医科大学附属淮安市第一人民医院899例结肠癌患者手术切除的肿瘤标本及其对应的癌旁正常组织。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定结肠癌组织与癌旁正常组织中MMP-9、MMP-2、MIG-7、FLNa的表达水平，分析其与患者临床病理特征及预后的关系。结果结肠癌组织中MMP-2、MMP-9、MIG-7表达水平分别为（481±69）ng/ml、（262±85）ng/ml、（156±23）ng/ml，均高于癌旁正常组织[分别为（136±33）ng/ml、（191±21）ng/ml、（98±18）ng/ml]，差异均有统计学意义（t值分别为41.591、120.224、59.896，均P<0.01）；结肠癌组织中FLNa表达水平为（19.5±3.2）ng/ml，低于癌旁正常组织[（65.4± 8.3）ng/ml]，差异有统计学意义（t=154.902，P<0.05）。结肠癌组织中MMP-9、MMP-2、MIG-7、FLNa表达水平与肿瘤长径、Dukes分期、淋巴结转移、分化程度均有关（均P<0.05）。多因素Cox回归分析结果显示，MMP-9高表达、MMP-2高表达、MIG-7高表达及FLNa低表达均是患者预后不良的独立影响因素（均P<0.05）。Kaplan-Meier生存分析显示，MMP-9、MMP-2、MIG-7低表达患者中位总生存期分别为55个月（95% CI 25~78个月）、56个月（95% CI 26~79个月）、54个月（95% CI 25~78个月），均长于高表达患者；而FLNa高表达患者中位总生存期为58个月（95%CI 27~80个月），长于低表达患者，差异有统计学意义（P<0.05）。结论MMP-9、MMP-2、MIG-7、FLNa与结肠癌的发生、发展密切相关，MMP-9、MMP-2、MIG-7高表达和FLNa低表达均影响结肠癌患者预后，可作为临床预后判断的重要指标。

简介：摘要目的利用体外模型探讨着丝粒蛋白M(CENPM)对肾纤维化的影响及其机制。方法体外培养人源肾小管上皮细胞(HK-2)，先用0、10、20、50 ng/ml的转化生长因子-β(TGF-β) HK-2 24 h，利用蛋白质印迹法(Western blot)和细胞免疫荧光检测CENPM蛋白表达；倒置显微镜观察HK-2细胞形态变化。随后利用腺病毒载体构建sh-CENPM病毒转染HK-2细胞，将细胞分为3组：短发卡RNA(shRNA)空白载体组；shRNA+TGF-β组(TGF-β 50 ng/ml处理24 h)；sh-CENPM+TGF-β组(sh-CENPM腺病毒转染+TGF-β处理)。利用细胞免疫荧光检测Fibronectin(Fn)表达，Western blot检测胶原蛋白、核因子-κB(NF-κB)通路相关蛋白及凋亡蛋白表达；同时酶联免疫吸附试验(ELISA)检测NF-κB下游白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度变化；流式细胞术检测3组细胞内活性氧(ROS)水平。两组间比较采用t检验。结果50 ng/ml TGF-β处理24 h后CENPM表达量显著升高(2.85±0.32比1.00±0.01，t＝9.803，P<0.01)，且HK-2细胞形态由卵圆形变为长梭形。与shRNA+TGF-β组比较，利用sh-CENPM腺病毒抑制CENPM表达后，能明显减少TGF-β诱导的Fn及COL-I的表达(1.74±0.27比2.37±0.21，t＝2.635，P<0.05；1.98±0.34比3.23±0.26，t＝2.477，P<0.05)，且抑制NF-κB信号通路的激活，减少下游IL-1β(144.23±18比297.45±41.63，t＝6.278，P<0.01)、IL-6(197.46±27.51比378.43±41.22，t＝7.954，P<0.01)和TNF-α(311.42±31.57比557.38±49.34，t＝10.290，P<0.05)的生成，缓解细胞内ROS的产生及细胞凋亡。结论抑制CENPM能够通过反向调节肾小管上皮细胞内的炎性反应及细胞凋亡，减缓肾纤维化的发展。

简介：摘要目的评价肿瘤坏死因子α诱导蛋白家族8样蛋白2(TIPE2)在小鼠内毒素性急性肺损伤(ALI)中的作用。方法SPF级健康成年雄性BALB/c小鼠40只，6～8周龄，体重20～25 g，采用随机数字表法分为4组(n＝10)：空载质粒组(VP组)、空载质粒组+ALI组(VP+ALI组)、腺相关病毒过表达TIPE2组(T组)和腺相关病毒过表达TIPE2组+ALI组(T+ALI组)。VP组和VP+ALI组气管内注射空载腺相关病毒，T组和T+ALI组气管内给予携带TIPE2干扰序列的腺相关病毒，3周后制备小鼠内毒素性ALI模型。VP组和T组气管内注射等容量PBS，VP+ALI组和T+ALI组气管内注射LPS 5 mg/kg。各组于注射LPS后24 h时采集腹主动脉血样，行血气分析并计算氧合指数(OI)，采用ELISA法检测血清TNF-α浓度，随后处死小鼠取肺组织，HE染色观察病理学结果并行肺损伤评分，确定肺湿重/干重(W/D)比值，测定髓过氧化物酶(MPO)活性，采用Western blot法检测TIPE2、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)和NF-κB的表达。结果与VP组比较，VP+ALI组肺损伤评分、W/D比值、MPO活性和血清TNF-α浓度升高，PaO2和OI降低，肺组织TIPE2表达下调，p-JNK和NF-κB表达上调(P<0.05)，T组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)；与VP+ALI组比较，T+ALI组肺损伤评分、W/D比值、MPO活性和血清TNF-α浓度降低，PaO2和OI升高，肺组织TIPE2表达上调，p-JNK和NF-κB表达下调(P<0.05)。结论TIPE2表达下调参与了小鼠内毒素性ALI的过程。

简介：无

简介：摘要目的筛选含有WW结构域的泛素蛋白连接酶1(WWP1)相互作用蛋白，探讨WWP1和依托泊苷诱导蛋白24(EI24)对肝癌细胞增殖的影响。方法利用酵母双杂交的方法筛选与WWP1相互作用的蛋白，并利用免疫共沉淀来进行相互作用验证。通过体内泛素化实验验证泛素连接酶WWP1与EI24酶和底物的关系。以慢病毒感染的方法建立WWP1和EI24稳定过表达或敲低表达的肝癌细胞系。通过细胞增殖实验、平板克隆实验和裸鼠成瘤实验检测WWP1和EI24对肝癌细胞增殖的影响。结果WWP1可以与底物EI24相互作用，并能够在体内将EI24泛素化降解。成功构建稳定过表达或敲低表达的WWP1和EI24的肝癌细胞系HepG2。在HepG2细胞中，过表达WWP1可以降低内源EI24的蛋白水平，而敲低WWP1可以使EI24蛋白水平增加。细胞计数盒8(CCK-8)法检测结果表明，在36 h时，WWP1过表达组和shWWP1组细胞的相对增殖活性分别为(347.00±8.15)%和(187.08±4.86)%，与对照组(270.33±15.01)%比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。在36 h时，EI24过表达组和shEI24组细胞的增殖活性分别为(183.75±8.11)%和(317.33±9.60)%，与对照组(270.33±15.01)%比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。克隆形成实验结果显示，对照组、WWP1过表达组和shWWP1组的克隆形成数分别为(52±7)个/视野、(76±4)个/视野和(19±3)个/视野，WWP1过表达组细胞克隆形成明显增多(P<0.05)，而敲低WWP1后细胞克隆形成较对照组减少(P<0.05)。对照组、EI24过表达组和shEI24组的克隆形成数分别为(38±4)个/视野、(10±3)个/视野和(69±7)个/视野。与对照组比较，过表达EI24使细胞克隆形成明显减少(P<0.05)，敲低EI24的表达使细胞克隆形成明显增多(P<0.05)。裸鼠体内实验结果显示，经过4周同等条件喂养后，对照组、WWP1过表达组和shWWP1组的裸鼠移植肿瘤体积分别为(1 400.00±43.71)mm3、(2 636.67±290.45)mm3和(642.17±36.00)mm3，差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组、WWP1过表达组和shWWP1组的裸鼠移植肿瘤重量分别为(1.23±0.08)g、(2.05±0.17)g和(0.88±0.09)g，差异均有统计学意义(P<0.05)。WWP1过表达组细胞成瘤能力明显增强，shWWP1组成瘤能力明显减弱。对照组、EI24过表达组和shEI24组的裸鼠移植肿瘤体积分别为(1 245.17±93.10)mm3、(662.17±60.88)mm3和(1 986.67±226.75)mm3，差异有统计学意义(P<0.05)。对照组、EI24过表达组和shEI24组的裸鼠移植肿瘤重量分别为(1.15±0.04) g、(0.85±0.02)g和(1.73±0.05)g，差异有统计学意义(P<0.05)。EI24过表达组细胞成瘤能力明显减弱，shEI24组成瘤能力明显增强。结论WWP1可以靶向底物EI24进行泛素化降解，并促进肝癌细胞的增殖。

简介：摘要目的探究猪带绦虫（Ts）14-3-3.3蛋白作为囊虫病疫苗候选分子的潜力。方法选取60只昆明小鼠，体重为18 ~ 22 g，按体重采用随机数字表法分为3组，分别为生理盐水对照组（对照组）、Ts14-3-3.3重组蛋白疫苗组（疫苗组）、Ts14-3-3.3重组蛋白疫苗 +佐剂组（疫苗 +佐剂组），每组20只。采用多点皮下注射法，在0周首次免疫后进行2次加强免疫，共免疫3次，每次接种间隔2周。3组在首次免疫后0、2、4、6、8周分别剖杀4只小鼠，摘眼球取血和无菌取脾，分别用于分离血清和制备脾淋巴细胞悬液[处理因素：原液、抗原刺激、刀豆蛋白A（ConA）刺激]。采用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测小鼠血清特异性抗体免疫球蛋白（Ig）G、IgG2a、IgG1及IgE水平；采用CCK-8法检测小鼠脾淋巴细胞增殖水平；采用双抗夹心ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞培养上清液肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-12、IL-13、IL-10水平。结果疫苗、疫苗 +佐剂组免疫2 ~ 8周IgG、IgG2a、IgG1水平均高于对照组，且疫苗 +佐剂组免疫2 ~ 8周上述指标均高于疫苗组（P均 < 0.05）。组间相同处理因素下，免疫2 ~ 8周脾淋巴细胞增殖水平以及培养上清液TNF-α、IL-12、IL-13、IL-10水平比较，差异均有统计学意义（P均 < 0.05）；疫苗、疫苗 +佐剂组免疫2 ~ 8周脾淋巴细胞增殖水平以及培养上清液TNF-α、IL-12、IL-13、IL-10水平均高于对照组，且疫苗 +佐剂组免疫2 ~ 8周上述指标均高于疫苗组（P均 < 0.05）。组内不同处理因素下，抗原刺激、ConA刺激时免疫0 ~ 8周脾淋巴细胞增殖水平以及培养上清液TNF-α、IL-12、IL-13、IL-10水平均高于原液，且ConA刺激时免疫0 ~ 8周上述指标均高于抗原刺激（P均 < 0.05）。结论Ts14-3-3.3重组蛋白疫苗可诱导小鼠产生有效的免疫应答。

简介：摘要目的探讨环指蛋白187(RNF187)表达与肝癌侵袭转移和上皮间变的关系。方法2019年4月至2019年10月，利用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测高转移潜能肝癌细胞株(MHCC97-H)和低转移潜能的肝癌细胞株(PLC/PRF/5、HepG2，中国科学院上海生物所)中RNF187的表达。通过慢病毒转染技术沉默RNF187后，RT-qPCR和Western blot法分别检测RNF187 mRNA及蛋白的表达水平及上皮-间充质转化(EMT)分子标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、黏结合蛋白多糖-1(Syndecan-1)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形纤维蛋白(Vimentin)的表达情况，噻唑蓝(MTT)法和Transwell法分别检测MHCC97-H细胞增殖和侵袭能力的影响。计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示，组间比较采用t检验。结果高转移潜能组MHCC97-H的RNF187的mRNA表达(0.082±0.006)明显高于低转移潜能组PLC/PRF/5(0.014±0.003)、HepG2(0.017±0.002，t＝41.755、36.248，P均<0.05)，MHCC97-H的RNF187蛋白表达(2.8±0.3)明显高于PLC/PRF/5(1.8±0.2)、HepG2(1.7±0.2，t＝11.030、11.667，P均<0.05)。MHCC97-H-Mock和MHCC97-H-短发卡RNA(shRNA)-RNF187的EMT分子标志物的表达分别为，上皮标志物E-cadherin(0.81±0.08，0.31±0.06)、Syndecan-1(0.70±0.08，0.22±0.07)；间皮标志物N-cadherin(0.28±0.04，0.73±0.09)和Vimentin(0.26±0.03，0.68±0.08)。两组细胞株EMT各分子标志物的表达比较差异有统计学意义(t＝22.312、24.634、19.424、17.854，P均<0.05)，提示MHCC97-H-shRNA-RNF187细胞株EMT过程显著下调。MTT法示，72 h后，MHCC97-H-shRNA-RNF187的增殖能力(2.2±0.4)明显低于MHCC97-H-Mock(4.5±0.6，t＝2.428，P<0.05)。Transwell小室法示，MHCC97-H-shRNA-RNF187组细胞穿过微孔滤膜的细胞数量[(178±67)个]明显少于MHCC97-H-Mock组[(482±73)个，t＝14.563，P<0.05]。结论RNF187表达可诱导EMT并参与肝癌细胞的侵袭与转移过程。

简介：摘要目的观察Wnt诱导分泌蛋白-2(WISP-2)对胃癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响并探讨其分子机制。方法选取2015年6月到2018年6月收集的112例胃癌组织和对应的癌旁组织作为研究对象。采用免疫组织化学观察胃癌组织和癌旁组织中WISP-2蛋白的表达。采用携带WISP-2基因和空载体的慢病毒感染胃癌细胞株MKN-28，建立WISP-2过表达细胞株(WISP-2组)和对照细胞株(对照组)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析两组细胞的增殖能力；采用异种肿瘤移植模型分析两组细胞在体内的生长；采用流式细胞术分析两组细胞的凋亡水平；采用Transwell分析两组细胞的迁移能力。采用蛋白质印迹法(Western blot)分析两组细胞WISP-2蛋白、凋亡相关蛋白与迁移相关蛋白的表达。采用t检验和方差分析。结果胃癌组织中WISP-2蛋白的表达水平(89.43±7.51)较癌旁组织中WISP-2蛋白表达水平(193.42±12.09)显著下调，差异有统计学意义(t＝6.019，P<0.05)。WISP-2组细胞增殖(1.21±0.14)明显低于对照组(1.79±0.21)，差异有统计学意义(t＝2.916，P<0.05)。WISP-2组细胞在裸鼠中的肿瘤体积[(1 029.32±101.58) mm3]明显小于对照组[(1 930.60±198.44) mm3]，差异有统计学意义(t＝3.001，P<0.05)。WISP-2组细胞凋亡水平(21.45±4.91)较对照组(3.41±0.56)显著增加，差异有统计学意义(t＝2.819，P<0.05)。WISP-2组细胞迁移数量[(231.23±19.32)个]明显低于对照组细胞迁移数量[(98.21±10.32)个]，差异有统计学意义(t＝4.013，P<0.05)。WISP-2组细胞半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)蛋白表达水平(1.94±0.34、1.53±0.19)较对照组Caspase-3和bax表达水平(0.98±0.24、0.55±0.10)显著增加，差异有统计学意义(t＝2.193、3.018，P<0.05)。WISP-2组细胞黏着斑激酶(FAK)蛋白表达水平(0.58±0.10)较对照组细胞FAK蛋白表达水平(1.27±0.17)显著下降，差异有统计学意义(t＝2.990，P<0.05)。结论WISP-2蛋白在胃癌组织中低表达，参与胃癌细胞增殖、凋亡和迁移。

简介：无

简介：摘要目的探讨钙网蛋白（calreticulin，CRT）在毒胡萝卜素（thapsigargin，TG）诱导胰腺癌细胞上皮细胞间质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）中的作用及其机制。方法免疫组化检测CRT在胰腺癌组织中表达差异，分析其与胰腺癌患者临床病理学参数的关系。免疫印迹和Transwell检测CRT沉默对TG诱导EMT表型影响。Fluro-4/AM和共聚焦显微镜检测胰腺癌细胞胞浆内钙离子水平。结果CRT在胰腺癌组织中高表达（P<0.01），与淋巴结转移（P=0.017）、UICC分期（P=0.021）呈正相关，与E钙黏蛋白（E-cadherin，E-cad）表达呈负相关（P=0.013）。CRT高表达联合E-cad低表达胰腺癌患者预后不良（P=0.023）。在胰腺癌细胞中，TG诱导EMT表型被CRT沉默所逆转。同时，CRT沉默能够抑制TG诱导胰腺癌胞浆内钙离子增加。结论CRT通过介导TG对胞浆内钙离子调控，最终促进胰腺癌细胞EMT的发生。