简介:摘要目的探讨钙网蛋白(calreticulin,CRT)在毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)诱导胰腺癌细胞上皮细胞间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)中的作用及其机制。方法免疫组化检测CRT在胰腺癌组织中表达差异,分析其与胰腺癌患者临床病理学参数的关系。免疫印迹和Transwell检测CRT沉默对TG诱导EMT表型影响。Fluro-4/AM和共聚焦显微镜检测胰腺癌细胞胞浆内钙离子水平。结果CRT在胰腺癌组织中高表达(P<0.01),与淋巴结转移(P=0.017)、UICC分期(P=0.021)呈正相关,与E钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)表达呈负相关(P=0.013)。CRT高表达联合E-cad低表达胰腺癌患者预后不良(P=0.023)。在胰腺癌细胞中,TG诱导EMT表型被CRT沉默所逆转。同时,CRT沉默能够抑制TG诱导胰腺癌胞浆内钙离子增加。结论CRT通过介导TG对胞浆内钙离子调控,最终促进胰腺癌细胞EMT的发生。
简介:摘要目的建立吉祥草中β-胡萝卜素的高效液相色谱测定方法。方法以丙酮-石油醚(1∶1v/v)的混合溶液浸提吉祥草中β-胡萝卜素。色谱条件色谱柱为DiamonsilC18柱(200mm×4.6mm,5μm),流动相乙腈-甲醇-乙酸乙酯-三乙胺(80∶10∶10∶0.05);流速1.0ml·min-1;柱温20℃;检测波长为450nm。进行了线性关系、精密度、稳定性、重复性、回收率等项的考察。结果β-胡萝卜素的质量浓度在0.0074~0.0666μg范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率(n=6)为99.33%,稳定性400分钟内RSD=1.94%。结论该法专属性强,结果准确,重现性好,可用作吉祥草中β-胡萝卜素的含量测定方法。
简介:研究了红酵母菌株AS2.2241液态发酵产类胡萝卜素的最佳培养基配方和工艺条件,分析了碳源、氮源、无机盐的质量浓度,以及反应温度、初始pH值、菌种种龄、发酵时间、转速等因素对类胡萝卜素产量的影响,确定了小规模发酵生产的最适培养基和发酵条件。红酵母AS2.2241菌株在5L发酵罐中产类胡萝卜素的最佳发酵条件为:葡萄糖40g/L,酵母粉10gm,蛋白胨10g/L,MgSO41g/L,K2HPO40.5g/L,发酵温度28℃,pH值6.0,接种量10%,接种龄48h,培养时间145h,发酵液体积2L,转速280r/min,空气流速量3.00L/min,罐压0.01MPa。在此条件下,获得生物量的质量浓度达35.12g/L,类胡萝卜素的质量浓度达301.78μg/g。
简介:目的:探讨毒胡萝卜紊诱导大鼠皮层神经元内质网应激凋亡的机制及丹红注射液的干预作用。方法:体外培养SD乳鼠皮层神经元,免疫组织化学、免疫荧光染色鉴定神经元纯度。流式细胞术AnnexinV、PI双标检测凋亡率及活性caspase-3、caspase-8、caspase-7、caspase-9表达,WesternNoting免疫印迹分析caspase-12、GRP78、Bcl-2、细胞色素C蛋白表达,Fura-2/AM法荧光分光光度计检测细胞内钙浓度([Ca^2+]i)。结果:SD乳鼠皮层神经元可纯化体外培养。2μmol/L毒胡萝卜素作用神经元24、48h细胞凋亡率分别是17.88%、21.38%,丹红治疗组分别是6.30%、6.11%,两组比较差异有统计学意义(P〈0.05)。毒胡萝卜素诱导神经元GRP78表达上调,剪切活化caspase-3、caspase-8、caspase-9、caspase-12,使细胞色素C表达增加,Bcl-2表达减少。丹红注射液促进细胞Bcl-2表达,抑制细胞色素C释放,减少活化的caspase-3、caspase-8、caspase-9含量,稳定游离钙浓度。结论:毒胡萝卜素诱导神经元内质网应激反应性凋亡。丹红注射液能抑制体外培养神经元内质网应激所致凋亡。
简介:叶黄素是一种富集于眼睛视网膜黄斑区的黄色素,缺乏叶黄素会增加可致盲的老年性黄斑变性的患病风险;β-胡萝卜素作为维生素A的前体物质,被人体吸收后可转化维生素A营养眼睛。一年生草本植物紫苏是我国卫生部颁布的药食同源植物之一,为了确定紫苏中对视力有保护作用的叶黄素和β-胡萝卜素含量,在优化提取条件的前提下,采用高效液相方法分析了两个紫苏品种不同采收期叶黄素和β-胡萝卜素含量。结果表明添加了pH为7的15%醋酸三乙胺的乙醇为叶黄素的最佳提取溶剂,β-胡萝卜素的最佳提取溶剂为石油醚-丙酮(8∶2),叶黄素和β-胡萝卜素在紫苏叶中最高含量分别为740μg/g干重和543μg/g干重。