简介：

简介：目的构建人野生型Cx30与红色荧光蛋白DsRed的融合蛋白表达载体,为揭示Cx30突变患者发病机制提供实验依据。方法用PCR法扩增GJB6基因,将PCR产物与T载体连接,用双切酶酶切pEASY-GJB6与载体DsRed-N1,连接回收后的片断,构建野生型Cx30编码序列与PDsRed2表达载体,测序鉴定序列正确性。将GJB6-DsRed用脂质体转染HEK293细胞,荧光显微镜观察表达的融合蛋白。结果GJB6-DsRed在HEK293细胞中高效表达,表达主要位于细胞膜中。结论成功构建了人野生型Cx30与红色荧光蛋白DsRed的融合蛋白表达载体,为进一步研究非综合征性聋的致聋机制奠定了基础。

简介：目的构建6种分别携带GJB2基因错义突变A40G、V37I、L90P、L90V、V84L和W44C的真核表达载体,转染HEK293细胞,建立6种错义突变的稳定表达细胞系。方法以野生型Cx26-EGFP融合蛋白质粒为模板,用Stratagene公司定点突变试剂盒构建错义突变表达载体,直接测序鉴定序列正确性,选取含有突变的载体转染HEK293细胞,G418选择性培养2周,流式细胞仪筛选表达阳性细胞,扩增培养形成稳定表达人Cx26突变的HEK293细胞系。培养细胞用4%多聚甲醛固定,鬼笔环肽和4',6-二脒基-2-苯基吲哚衬染细胞核,荧光显微镜下检测结果。结果6种突变表达载体经过测序,均含有相应突变,无多余突变出现,转染后均可在细胞间形成缝隙连接,呈现绿色荧光。结论成功构建6种携带GJB2基因错义突变的真核表达载体,为进一步研究错义突变致聋原因奠定了实验基础。

简介：目的构建含有人髓细胞白血病基因-1（myeloidcellleukemia-1,MCL1）和绿色荧光蛋白基因（pEGFP）的真核共表达载体,为聋病的基因治疗奠定实验基础。方法应用基因重组技术和限制性内切酶酶切,及基因测序方法,构建并鉴定pEGFP-MCL1真核表达质粒。经脂质体介导转染293细胞系,荧光显微镜下观察pEGFP-MCL1真核表达质粒在293细胞系中的表达,利用逆转录-聚合酶链反应（Reversetranscriptionpolymerasechainreaction,RT-PCR）检测MCL1mRNA的表达,WesternBlot（蛋白质印迹）方法检测MCL1蛋白的表达。结果阳性重组子经酶切鉴定含有MCL1基因片段,基因测序结果与GenBank中MCL1序列相同。重组pEGFP-MCL1真核表达质粒转入293细胞系后24小时,荧光显微镜下可见绿色荧光表达,RT-PCR能够扩增出MCL1的条带,WesternBlot检测出40kDa大小的蛋白。结论成功地构建了含有人全长MCL1基因和pEGFP基因的真核共表达载体,且能在哺乳动物293细胞系中表达。

简介：目的构建含有小鼠Smad4基因和增强型绿色荧光蛋白基因（EGFP）的慢病毒病毒表达载体,为今后应用该重组慢病毒介导的内耳基因导入和相关的聋病基因治疗奠定实验基础.方法利用基因重组、限制性内切酶酶切及基因测序的方法,构建并鉴定pLenti6.3-Smad4-IRES2-EGFP真核表达质粒;利用脂质体介导转染的方法,将pLenti6.3-Smad4-IRES2-EGFP转染导入293T细胞,荧光显微镜下观察EGFP基因表达情况,利用实时荧光PCR的方法检测小鼠Smad4基因mRNA水平的表达情况.结果经PCR鉴定和基因测序证实了小鼠Smad4基因序列与基因bank中的序列相一致.pLenti6.3-Smad4-IRES2-EGFP质粒转入293T细胞后,荧光显微镜下可见有绿色荧光蛋白表达.293T细胞经慢病毒感染后,其小鼠Smad4基因mRNA表达量增加了66427倍.病毒滴度经测定为2.5×108TU/ml.结论成功地构建了含有小鼠Smad4基因的慢病毒表达载体,并能在293T细胞中表达.

简介：目的比较腺病毒、脂质体、纳米材料三种不同类型的载体携带目的基因对293T细胞的转染效率及细胞毒性的大小,筛选理想的基因载体。方法用重组腺病毒、Lipofectamine^TM2000、Entranster^TM—D纳米材料为转染载体,携带含有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因的Math1-EGFP基因及真核表达质粒pRK5-Math1—EGFP，按照转染试剂盒说明优化其转染条件，分别转染293T细胞。24小时后在共聚焦显微镜下观察转染结果并计数阳性细胞率，采用RT—PCR法检测转染细胞中Math1基因mRNA的表达，用MTT法检测不同转染条件下，不同转染载体对293T细胞的细胞毒性。结果经优化转染条件，重组腺病毒载体转导的细胞中荧光蛋白表达几乎为95％以上,Lipofectamine^TM2000、Entranste^TM-D纳米材料载体转染的细胞中荧光蛋白表达也分别达到70％和80％以上，而Entranste^rTM-D纳米材料载体在最高转染效率的剂量下仍然保持80％以上的细胞生存率。RT-PCR进一步证实，三种载体转染细胞均有Math1基因mRNA的表达。结论Entranster^TM—D纳米载体作为一种新型纳米聚合物转染试剂，能成功携带内耳基因治疗关键基因Math1基因转染293T细胞，并表现了低毒、高效性能。

简介：方案教学（ProjectApproach）又称为方案活动（Projectwork），最初是受杜威的观点启发而来，随后由威廉·H·基尔帕特里克（WiIIiamH·KiIparrick）在进步主义运动中倡导．后又被称为“方案教学法”[1]。这一理念所提出的假设是：当儿童的兴趣被充分激发并被视为中心时．

简介：教师是教的主体，学生是学的主体。由于听力语言康复教师所教授的对象具有明显的听觉或语言障碍，这就为教与学主体问的交往、沟通平添了一种阻隔。致使在教学实践过程中，共同面对学习内容时，两个主体之间的沟通难以实现，自然就出现一种教师不停地“说”，学生被动地“听”的单向信息传递方式，严重滞阻教与学的效果。

简介：兴趣可使人优先注意某种事物，并进行更好地学习。作者通过设置情境．直观教具、游戏、提问、活动延伸等方法介绍了如何在听障儿童听觉言语康复训练中对其实施兴趣教学，从而达到事半功倍的康复效果。

简介：研究目的:探讨电化教学对聋儿语训工作的促进作用,帮助教师解决在使用电化教学手段开展教学活动时出现课程内容与实施手段不协调的问题.基本论点:聋儿康复教学过程是一个复杂的、动态的系统工程.而在变化、渐进的发展过程中,通过教学媒介的选择,真正达到为教育聋儿服务的目的.指导意义:帮助教师了解开展电化教学活动的优势在于可以产生极强的视觉刺激,十分有效地吸引聋儿的注意力,提高聋儿学习知识的兴趣,使较枯燥的、教师不易讲解的、聋儿不易理解的内容,通过动画等多媒体手段,形象地表现出来,以此来调动聋儿视、听等多种感官功能,从而使聋儿获得很好的学习效果.

简介：摘要本文通过对儿科临床实验教学经验方法的总结，得出了贯穿整个儿科临床教学过程的儿科临床技能培训教学新体系，强调了模拟训练与临床实践相结合的教学体系，提高了临床教学效率和教学资源的利用率，保证了儿科临床实践教学质量。

简介：本文概述了我国聋校语言教学的现状与制约因素，提出面对聋校语言教学的挑战，应打破以学习语言知识代替发展交往语言的传统教学体系，建构缺陷补偿、特殊途径的教育及语言实践为依托的改革构思。

简介：聋生在书面词语理解方面存在着严重的缺陷.在语文教学中,需要向聋生讲解的书面词语比需要向听力正常学生讲解的要多得多.向聋生进行书面词语讲解也比向听力正常学生进行书面词语讲解困难得多.聋校的书面词语教学需要从聋生的实际出发,采用适合聋生特点的书面词语教学方法.

简介：耳显微外科技术因颞骨的复杂解剖及其空间位置。深奥的学术理论，以及所需的手术设备要求较高，限制了其规模性的发展。即便进入21世纪，在我国也仅限于少数大城市的三级甲等医院能够比较系统地开展耳显微外科手术。因此，手术理论教学及手术解剖训练成为耳科医师的必修科目。

简介：本文主要介绍了言语矫治技术在聋儿集体教学中运用的方法及原则。其中，重点介绍的方法包括：放松训练．呼吸训练、嗓音训练．构音训练等。应用的原则有两点：①自主开发与专业指导相结合；②游戏的精心设计与自然生成相结合。

简介：耳内科学(otologicalmedicineoraudiologicalvestibularmedicine)是指以内耳及与之相关的听觉平衡通路的病变和功能异常为主要诊治对象的非手术专业医学领域[1]。耳聋、耳鸣和眩晕的庞大患者群及迫切的临床需求是促使耳内科学发展壮大的原动力。

简介：自从1984年Song等报道游离股前外侧皮瓣的解剖以来，游离股前外侧皮瓣得到了广泛的研究和应用。1997年Kimata等埘首先报道了其在头颈部缺损修复重建中的临床应用，截止到2008年2月，已有大量应用该皮瓣修复头颈部缺损的报道。股前外侧皮瓣具有提供的皮肤和软组织量大（最大可达20cm×25cm），可携带肌肉，可塑性强（可修成5mm薄），供区畸形及并发症少等优点，在很多头颈部的修复中有取代前臂皮瓣的趋势。我科自2002年开展游离股前外侧皮瓣修复头颈部缺损，迄今已经有20余例，现对皮瓣制作中的教学体会加以总结，供同道参考。

简介：语言能力的获得离不开语言环境，在聋校语文教学中恰当地运用课堂表演，不仅有利于提高聋生的语言表达能力和塑造良好的心理素质，而且可以培养他们的想象力和创造力。本文从3个方面阐述了课堂表演在聋校语文教学中的作用，介绍了课堂表演在教学中的具体实施方法，简析了课堂表演在语文教学中的意义。

简介：本文总结了教师在确立聋儿康复教学活动目标中存在的问题,并结合实例进行了分析,提出了确立教学活动目标应注意的问题,以期帮助聋儿康复教师提高教学活动效果。

简介：目的对云南3所特殊教育学校聋生人群进行系统性的耳聋临床资料分析，为开展耳聋基因的分子流行病学研究提供参考依据。方法了解聋生详细的耳聋病史；进行全身及耳鼻咽喉常规检查；进行纯音听阂测试及声导抗测试，了解聋生双耳听功能和中耳功能状况。结果聋生耳聋前有耳毒性药物用药史者占8．2％，有家族史者占19．5％，综合征性耳聋占5．3％，耳聋病因不明者亦占较大比例；汉族与非汉族聋生在综合征性耳聋和聋前用药史方面无显著差异，汉族聋生有家族史的比例高于非汉族聋生。结论云南省聋生可能的致聋原因有遗传性聋、药物性聋，但大部分聋生病因不明，尚需借助分子生物学理论和技术，从基因水平进行耳聋病因学的深入研究。。