简介：胞外囊泡（extracellularvesicles,EVs）的定义及临床研究价值一、EVs的定义EVs是一种由细胞来源的脂质双分子层包绕的球状膜性结构,包括通常所说的微泡和外来体。EVs是一组直径介于40~5000nm间的囊泡状小体,多种细胞均可向其生存的微环境中分泌EVs[1-2]。EVs可携带多种生物活性物质,如蛋白酶、各种生长因子及受体、组蛋白、

简介：摘要目的探讨脓毒症大鼠肺组织来源的胞外囊泡对脓毒症肺内炎症反应及中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps, NETs）形成的影响。方法采用盲肠结扎穿孔术（cecal ligation and puncture, CLP）建立脓毒症大鼠模型，利用Collagenase D和DNase I充分酶解消化肺组织，多次离心去除杂质，最后通过差速超速离心法提取肺组织胞外囊泡（Ti-EVs）。将18只雄性SD大鼠随机分为3组：Ti-EVs组行CLP术并经气道滴入Ti-EVs混悬液（2.5 mg/kg）；CLP组行CLP术并经气道滴入等体积PBS；Sham组行假手术。24 h后利用苏木精-伊红（HE）染色检测肺组织病理学变化，酶联免疫吸附实验检测肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid, BALF）中IL-1β、TNF-α及IL-6的表达水平，免疫荧光法检测肺组织内NETs含量。结果分离提取的大鼠肺组织胞外囊泡经透射电镜观察为双层圆形的囊性小泡结构，粒子直径主要分布在150 nm，Western blot显示EVs标志物CD9、CD63、Tsg101呈阳性表达。肺组织HE染色可见脓毒症大鼠肺泡完整性破坏，炎症细胞浸润。与CLP组相比，Ti-EVs组肺组织损伤程度更重，且BALF中IL-1β、TNF-α、IL-6炎症因子表达水平均显著升高（P<0.01）；激光共聚焦显微镜下见脓毒症组和Ti-EVs组肺内均有NETs形成，Ti-EVs组肺内NETs荧光强度较脓毒症组明显增加。结论通过酶解消化、差速超速离心等系列步骤能够成功分离提取得到纯度较高的大鼠肺组织胞外囊泡。在脓毒症肺损伤进程中，肺组织胞外囊泡可加重肺内炎症反应，促进NETs形成。

简介：摘要急性肺损伤（ALI）和急性呼吸窘迫综合征（ARDS）的特点是肺泡上皮细胞、毛细血管内皮细胞屏障功能破坏以及炎性细胞募集，并导致肺泡及间质水肿、透明膜形成和肺部炎性浸润等，其机制尚未完全明确。目前的治疗方案以呼吸机支持治疗、液体管理、营养支持等综合性治疗为主，但预后仍较差。研究显示，不同来源的胞外囊泡微小RNA（miRNA）以不同方式参与调节上皮细胞、内皮细胞、吞噬细胞的功能，从而加重或改善ALI，并具有诊断、鉴别诊断及治疗价值。本文就相关ALI模型中不同来源的胞外囊泡miRNA在ALI中的调节机制、诊断与鉴别价值及干细胞胞外囊泡miRNA在治疗中的应用进行综述。

简介：摘要目的研究间充质干细胞(MSCs)来源小胞外囊泡(sEVs)对小鼠视网膜光损伤的作用及其可能的机制。方法人脐带来源MSCs采用流式细胞术鉴定表面标记蛋白，收集第3~5代MSCs培养上清，超速离心收集sEVs并采用透射电子显微镜鉴定形态。将65只清洁级8~10周龄健康雌性BALB/c小鼠按照随机数字表法随机分为正常组(17只)、磷酸盐缓冲液(PBS)组(24只)和sEVs组(24只)。PBS组和sEVs组小鼠右眼玻璃体腔分别注射2 μl PBS和2 μl sEVs后，在蓝光照度930 lx的环境下照射6 h；正常组小鼠不做处理。分组处理后3 d，采用苏木精－伊红染色观察视网膜结构，原位末端转移酶标记(TUNEL)染色进行凋亡细胞计数，视网膜电图(ERG)检测小鼠视网膜功能，mRNA转录组测序技术检测PBS组与sEVs组小鼠视网膜mRNA表达差异情况，并进行差异基因KEGG聚类分析，实时荧光定量PCR法进一步验证差异基因表达。结果培养的MSCs中CD90、CD105表达阳性，而CD34、CD45表达阴性，提取的MSC-sEVs呈直径为80~140 nm的双层膜囊泡结构。苏木精－伊红染色结果显示，PBS组小鼠视网膜外核层细胞核排列紊乱，sEVs组视网膜结构紊乱程度轻于PBS组。sEVs组视网膜凋亡细胞计数为(14.60±4.04)个/视野，少于PBS组的(24.00±8.52)个/视野，差异有统计学意义(t＝2.37，P<0.05)。sEVs组ERG a波振幅为(64.38±16.70)μV，高于PBS组的(16.78±6.37)μV，差异有统计学意义(P<0.05)；PBS组和sEVs组b波振幅分别为(132.40±39.41)μV和(154.86±34.08)μV，明显低于正常组的(338.38±27.41)μV，差异均有统计学意义(均P<0.05)。mRNA测序共发现差异表达基因110个，其中sEVs组下调基因109个。KEGG聚类分析结果提示，差异基因主要集中于炎症性疾病、免疫相关信号通路。PCR结果显示，sEVs组视网膜中趋化因子配体2、趋化因子受体2、白三烯B4、白细胞免疫球蛋白样受体A6和白细胞介素1β的mRNA相对表达水平低于PBS组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论MSC-sEVs可以减轻蓝光造成的视网膜结构和功能损害，这种保护作用可能是通过抑制炎症反应来实现的。

简介：摘要细胞外囊泡（EV）能够携带包括核酸、蛋白和小分子代谢物在内的多种生物活性成分，其在肿瘤诊断与治疗中的价值已得到广泛认可。然而目前对于EV内含物的研究主要集中在RNA和蛋白质上，对于最能直接反映细胞状态的小分子代谢物在EV中的作用尚不明确。近年来EV代谢组学在肿瘤研究中逐渐受到了关注，尽管由于前处理复杂且代谢物含量较低，EV代谢组学研究仍存在诸多挑战，但其在调控肿瘤进展及作为肿瘤标志物方面的价值已逐步显现，有望为肿瘤的诊断与治疗提供新的靶点。

简介：摘要：通过高通量测序技术对及鸡输卵管细胞外囊泡中的总RNA样品进行测序，并通过生物信息学分析测序结果进行分析，结果共鉴定出265个已知miRNA，并预测出14个新miRNA；此外，针对miRNA预测分析共发现4089个靶基因，其中3801个有效靶基因。经过对表达量降序排序的前50位miRNA靶基因进行GO富集预测发现，细胞外囊泡miRNA靶基因除细胞组分有显著富集点外，分子功能等无显著富集。通过KEGG预测发现目标基因参与多种生化反应，对细胞的生长、发育、分裂等方面具有潜在重要作用。

简介：摘要目的探讨脂肪干细胞-细胞外囊泡(ASC-EVs)对肌成纤维细胞转分化过程中转化生长因子β(TGF-β)-Smad信号通路的调控作用。方法脂肪干细胞来源于南昌大学第二附属医院整形美容科行吸脂术患者的抽吸脂肪。真皮成纤维细胞来源于同一科室包皮环切术患者自愿捐赠的皮肤组织。将脂肪抽吸物离心纯化后经酶消化提取脂肪来源于细胞(ASCs)，扩增后行流式细胞术检测表面蛋白标记物。收集第3～5代ASCs上清液提取胞外囊泡(EVs)，透射电镜观察微观形态，纳米颗粒跟踪分析仪NanoSight检测粒径分布，流式细胞术检测其膜表面标志性蛋白CD63、Alix和TSG101。用PKH67荧光标记的ASC-EVs与真皮成纤维细胞共培养后，共聚焦显微镜观察细胞对EVs的摄取情况。通过TGF-β1持续诱导真皮成纤维细胞5 d，并添加50、100 μg/ml浓度的ASC-EVs，通过免疫荧光染色，RT-PCR和蛋白质印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及Smad-2/3/4的表达。结果流式细胞术结果提示，第3代ASCs表面标记物CD73、CD49d、CD90、CD105为阳性，CD34、CD45为阴性。透射电镜下ASC-EVs为圆形膜性囊泡，边缘清晰，由双层磷脂膜包裹。95%以上的ASC-EVs粒径为(30.0～261.0)nm，平均(166.0±86.1)nm。EVs高表达标志蛋白CD63、Alix和TSG101。共聚焦显微镜下可见携带绿色荧光的ASC-EVs被真皮成纤维细胞摄取并分布在胞浆内，部分ASC-EVs在细胞核周围分布。α-SMA免疫荧光染色后，经连续5 d的TGF-β1诱导，共聚焦显微镜下见真皮成纤维细胞中α-SMA绿色荧光的表达显著提高，而采用50 μg/ml和100 μg/ml ASC-EVs作用的真皮成纤维细胞中，α-SMA的表达较未经ASC-EVs作用的真皮成纤维细胞显著降低，但不呈现浓度依赖；细胞α-SMA和Smad-2/3/4的mRNA转录水平较未经ASC-EVs作用的真皮成纤维细胞显著下降，α-SMA和Smad-2/3/4的蛋白表达也显著降低。此外，ASC-EVs可显著降低细胞分泌至上清液中的Ⅰ型胶原的含量，但对Ⅲ型胶原的分泌量无明显干预作用。结论ASC-EVs抑制瘢痕增生的作用机制可能与抑制真皮成纤维细胞中TGF-β-Smad信号通路，干扰肌成纤维细胞转分化，减少Ⅰ型胶原分泌密切相关。

简介：摘要细胞外囊泡（EV）是细胞或微生物分泌的直径在30~1 000 nm的双层脂质囊泡，内含有丰富的蛋白质、核酸、脂质及其他生物信息分子。因此EV可以作为细胞间物质传递的载体。目前在感染性疾病中，病原微生物的EV可作为双刃剑，起到双重作用。既可在宿主的感染免疫，病原菌的感染致病及耐药性传递中发挥负面“敌”的重要作用，也可在临床诊疗中展现病原微生物EV“友”的优势。

简介：摘要目的探讨低氧对人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)及其细胞外囊泡(EVs)生成的影响，初步阐述其调控机制。方法分离培养原代hUCMSCs，将其分为常氧组和低氧组，分别在常氧(21%O2)和低氧(5%O2)培养箱中培养，用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖，提取hUCMSCs生成的EVs，利用透射电子显微镜(TEM)和纳米颗粒示踪分析(NTA)进行鉴定，蛋白质印迹法(Western blot)检测EVs膜标志蛋白CD9和CD63表达，转录组高通量测序分析低氧对hUCMSCs表达谱的影响，Western blot分析细胞内缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)和磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(p-Akt)、以及磷酸化40×103大小的富含脯氨酸的Akt底物(p-PRAS40)的表达水平。两组间采用t检验进行统计分析。结果低氧处理hUCMSCs 24 h后，CCK-8结果显示低氧组吸光度值(2.151±0.116)高于常氧组(1.929±0.145)，差异有统计学意义(t＝2.659，P<0.05)；NTA检测结果显示低氧组EVs颗粒浓度[(13.714±1.704)×109/ml]高于常氧组[(1.271±0.573)×109/ml]，差异有统计学意义(t＝18.310，P<0.05)；低氧组EVs蛋白浓度(2.743±1.013)高于常氧组(0.403±0.303)，差异有统计学意义(t＝3.831，P<0.05)；Western blot结果显示低氧组EVs的CD9、CD63表达水平(4.092±1.711、1 162.225±573.901)高于常氧组(1±0，t＝3.005、3.505，P<0.05)。转录组高通量测序分析显示有1 429个基因存在显著表达差异，且主要富集于细胞因子相关通路。Western blot结果显示低氧组HIF-1α、Akt、p-Akt、p-Akt/Akt，以及p-PRAS40的表达水平(2.593±0.556、1.395±0.044、2.586±0.130、1.953±0.104、2.131±0.572)均高于常氧组(1±0)，差异有统计学意义(t＝3.098、4.246、4.059、3.149、2.799，P<0.05)。结论低氧可通过激活HIF-1α和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt信号通路促进hUCMSCs增殖和EVs生成。

简介：摘要细胞外囊泡（EV）作为一种新型的细胞间信号传导载体，几乎参与了肿瘤发生、发展、转移、耐药等各个环节。因此，EV已成为癌症诊断和抗癌治疗生物标志物的理想候选者和研究热点。但EV肿瘤标志物研究前期主要集中于RNA和蛋白质，少部分关注脂质，其DNA成分的相关研究较少。近年来EV DNA的肿瘤诊断价值才逐渐受到关注。对EV DNA生物学特性以及功能的研究有望为肿瘤诊断提供新方向。

简介：摘要细胞外囊泡（EVs）作为细胞间相互作用的基本方式之一，携带有大量生物学活性物质，在疾病诊断和治疗中显示出巨大的潜力。与组织活检相比，其检测具有无创、取样简便、可实时监测等优势，故EVs生物标志物的研究与临床应用已成为国际研究热点。本文对EVs在疾病诊断中的意义及其作为生物标志物的筛选策略与临床验证进行了梳理总结，鼓励加快疾病EVs生物标志物的筛选验证与检测技术的研发，进一步推进EVs生物标志物研究成果向疾病临床诊疗的转化应用。

简介：摘要过去十年研究发现，包括凋亡小体、微泡和外泌体在内的细胞外囊泡，作为细胞间通讯的参与者，在生理和病理条件下对细胞间物质和信息的传递发挥着重要作用。细胞外囊泡可以携带和运输各种生物活性分子，通过血液循环和体液运输至相邻靶细胞或远处组织细胞，进而诱导各种信号级联。细胞外囊泡参与了血管发育，生长和成熟，在再生医学和血管新生相关疾病中的潜在价值引起越来越多的关注。来源于各种细胞类型的细胞外囊泡有可能向内皮细胞递送复杂的信息，并诱导促血管新生或抑制血管新生信号。本文对不同细胞来源的细胞外囊泡在血管新生中的作用作一综述，并对其在临床疾病和生物医学研究应用中的先决条件和主要挑战予以探讨。

简介：摘要细胞外囊泡（EV）微小RNA（miRNA）是细胞主动分泌或释放的具有脂质双层膜结构包裹的一类非编码小分子RNA，可介导细胞间通讯和信息交流。外周血EV miRNA可作为多种肿瘤诊断、疗效监控、预后评估分子标志物，是肿瘤领域最具潜力和转化应用潜能的液体活检分子指标，全面、系统的EV miRNA临床研究策略是筛选应用价值高的标志物关键。EV miRNA还可通过调节肿瘤微环境代谢、间质上皮转化、血管新生、免疫及耐药等参与肿瘤发生发展，对一些关键EV miRNA研究可为肿瘤早期诊断、伴随诊断、远端转移、放化疗方案选择和生存分析精准诊疗液体活检指标研发及肿瘤靶向生物治疗提供新方向。

简介：摘要自新型冠状病毒肺炎（COVID-19）疫情暴发以来，全球都在寻找有效的治疗方法。细胞外囊泡（EV）/外泌体是细胞间通讯的有效载体，研究表明，间充质干细胞源EV/外泌体是对抗急性呼吸窘迫综合征的无细胞治疗的替代选择；此外，EV在COVID-19相关代谢组学、蛋白质组学、复发复阳、深静脉血栓、心肌毒性、液体活检以及生物治疗的研究，都将为COVID-19的诊疗提供新的思路。本文将对EV/外泌体在COVID-19诊治中的潜在价值进行综述。

简介：胰原基伴囊泡肾、囊泡肾上腺等多项变异一例肖洪文泸州医学院泸州６４６０００在解剖一例约３０岁男尸时发现：（１）肝大，长约２５ｃｍ，左叶达左腋中线；（２）胰原基：腹背胰分离。腹胰呈一底向上的三角形，位于十二指肠降部内侧缘和肠系膜上血管之间，细小的腹胰管开...

简介：摘要胞外囊泡是由细胞分泌的纳米级囊泡，包括外泌体和微囊泡。它可以通过多种机制被受体细胞摄取，传递细胞间信息，调控细胞的生物学功能。有研究发现，胞外囊泡与自身免疫性疾病、色素性疾病、肿瘤及皮肤创伤愈合等密切相关，在各种生理和病理过程中发挥着重要的生物学作用。本文综述胞外囊泡与皮肤科相关研究进展。

简介：摘要胞外囊泡(EVs)在中枢神经系统中的主要作用之一是在不同类型的细胞之间交换分子，帮助维持它们的正常功能，在病理条件下(如胶质瘤)，肿瘤细胞释放EVs对肿瘤微环境的不同组成部分造成影响，介导细胞外基质修饰、免疫调节、肿瘤进展和侵袭。本文就EVs的结构与分子组成、对胶质瘤微环境的影响及作为生物标志物的研究进展进行综述。

简介：摘要急性呼吸窘迫综合征（ARDS）是由肺内外源性多种损伤因素引起的一类临床综合征，其发病率及病死率一直居高不下。近年来研究表明，内皮衍生的细胞外囊泡是病理信号转导的重要媒介，在ARDS发生发展及预后转归中发挥重要调控作用，现就内皮来源的细胞外囊泡在ARDS中的调控机制进行综述。

简介：摘要目的分离胰腺癌细胞(PANC-1)和人胰腺导管上皮细胞(HPDE6-C7)细胞培养上清液中的细胞外囊泡，分别比较微小RNA(miRNA，miR)-483-5p在两种细胞及其所分泌的细胞外囊泡中的差异性表达。方法超速离心法制备去除胎牛血清源性囊泡的完全培养基，细胞计数试剂盒(CCK-8)检测超速离心前(对照组)与超速离心后(实验组)的完全培养基对细胞增殖作用的差异；用去除血清囊泡的完全培养基培养细胞，超速离心方法提取细胞外囊泡，用二喹啉甲酸(BCA)蛋白浓度测定试剂盒和纳米颗粒跟踪分析(NTA)检测细胞外囊泡(EVs)的浓度；用透射电镜、NTA、蛋白质印迹法(Western blot)鉴定其是否符合细胞外囊泡特征。定量即时聚合酶链反应(qPCR)检测miR-483-5p在两组细胞及其分泌的细胞外囊泡中的表达。CCK-8增殖实验和qPCR实验的结果采用t检验分析。结果CCK-8增殖实验结果显示48 h和72 h后，HPDE6-C7的实验组与对照组之间差异无统计学意义(0.674±0.036比0.671±0.016，t＝0.315，P48 h>0.05；0.890±0.027比0.925±0.099，t＝0.581，P72 h>0.05)；PANC-1的实验组与对照组之间差异无统计学意义(0.759±0.004比0.761±0.016，t＝0.249，P48 h>0.05；1.114±0.025比1.145±0.014，t＝1.898，P72 h>0.05)；透射电镜：细胞外囊泡呈"茶杯托盘"状、NTA结果：98%PANC-1源性细胞外囊泡的直径为130.0 nm、98%HPDE6-C7源性细胞外囊泡的直径为129.7 nm；Western blot实验显示：细胞外囊泡表现为CD63、TSG101阳性，而GM130为阴性；蛋白浓度测定试剂盒和NTA分析测得PANC-1和HPDE6-C7源性的细胞外囊泡浓度分别为：1.5 g/L、1.510 11颗粒/毫升和1.3 g/L、1.610 11颗粒/毫升；与HPDE6-C7比较，PANC-1中miR-483-5p的表达显著增加(2.820±0.180比1.000±0.006，t＝－17.539，P<0.01)；与HPDE6-C7源性细胞外囊泡比较，PANC-1源性细胞外囊泡中miR-483-5p的表达显著增加(3.503±0.265比1.002±0.084，t＝－15.582，P<0.01)。结论超速离心法去除胎牛血清源性囊泡的完全培养基不影响细胞的正常增殖；鉴定结果显示所分离的沉淀符合细胞外囊泡的特征；根据NTA的结果可以判断其应归类于小细胞外囊泡；qPCR结果表明，miR-483-5p在PANC-1和其分泌的细胞外囊泡中均为高表达。

简介：摘要目的初步探讨铜绿假单胞菌外膜囊泡(outer membrane vesicles，OMVs)对巨噬细胞炎症反应的调节作用及其分子机制。方法体外培养铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)提取OMVs，不同浓度OMVs刺激RAW264.7细胞后，酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)、实时荧光定量PCR(quantitative real time PCR，qRT-PCR)分别检测细胞上清中白细胞介素(interleukin，IL)-8及其mRNA的表达水平，并通过Western blot法检测细胞内核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)抑制蛋白(inhibitor of NF-κB，IκB)磷酸化水平；siRNA沉默Toll样受体4(Toll-like receptor 4，TLR4)后，检测细胞中IL-8的分泌水平；最后通过髓样分化因子(myeloid differentiation factor88，MyD88)抑制剂以及NF-κB抑制剂BAY11-7082预处理后OMVs刺激细胞，并检测细胞中IL-8的变化水平。结果不同浓度的OMVs(1、5、10 μg/mL)刺激处理RAW264.7细胞后，细胞内IL-8及其mRNA表达水平较未刺激组(0 μg/mL OMVs)均明显增高[IL-8(1、5、10 μg/mL OMVs)：(31.54±4.25)pg/mL、(82.04±10.20)pg/mL、(136.30±16.03)pg/mL比(16.42±6.14)pg/mL，t值分别为7.23，8.92和10.76，P值均<0.05; mRNA(1、5、10 μg/mL OMVs)：(1.25±0.09)，(2.34±0.12)、(4.25±0.43)比(1.00±0.07)，t值分别为5.24，7.98和9.63，P值均<0.05]，且呈一定的剂量依赖性。siRNA沉默TLR4后细胞中IL-8分泌水平较对照组显著降低[(46.07±18.23)pg/mL比(115.50±22.02)pg/mL，t＝9.25，P<0.05]。而通过MyD88抑制剂以及NF-κB抑制剂预处理后，RAW264.7细胞内IL-8的分泌水平较处理前也明显减少[MyD88抑制剂预处理后：(54.04±12.02)pg/mL比(134.02±18.01)pg/mL, t＝9.72，P<0.05；NF-κB抑制剂预处理后：(51.03±17.01)pg/mL比(142.01±22.02)pg/mL，t＝7.21，P<0.05]。结论铜绿假单胞菌OMVs能够通过TLR4以及NF-κB途径诱导巨噬细胞RAW264.7分泌IL-8。