简介:摘要目的构建斑马鱼脑出血模型,并以此筛选诱导斑马鱼脑出血的相关基因。方法通过吗啉代寡核苷酸(MO)技术和单细胞显微注射技术构建斑马鱼脑出血模型,并从宏观、微观角度多重验证。首先,造模实验采用注射Control MO的正常野生型AB品系斑马鱼作为对照组,实验组在AB斑马鱼胚胎单细胞时期分别注射神经嵴源性细胞(NCDCs)发育相关基因的MO,包括col8a1 MO、tfap2α MO、msx1a MO、msx2 MO、dkk1a MO等,于显微镜白光视野下初步验证模型。其次,采用Tg(flk1:GFP;gata1:dsRed)双转基因斑马鱼进行模型验证,该转基因鱼用绿色荧光蛋白(GFP)标记血管内皮细胞,用红色荧光蛋白(dsRed)标记血红细胞,能够更清晰地观察到斑马鱼脑出血的部位。在斑马鱼胚胎单细胞时期注射Control MO 作为对照组,注射col8a1 MO作为实验组,正常培养至受精后48 h通过激光共聚焦观察红细胞渗漏情况,构建荧光视野可观察的脑出血模型。最后,采用Tg(flk1:GFP)转基因斑马鱼进行基于血脑屏障的模型验证,通过Dextran-Rhodamin和DAPI染料的渗漏现象进一步明确斑马鱼血脑屏障的破坏与脑出血的发生,并进行定量统计,从而验证NCDCs发育相关基因与脑出血表型的关系,证明造模有效。结果与注射Control MO的正常野生型AB品系斑马鱼对照组相比,col8a1、tfap2α和msx1基因突变的实验组斑马鱼有明显的脑出血现象,出血比例分别为18.18%(52/286)、23.04%(62/251)、35.94%(23/64),而msx2和dkk1a基因突变的斑马鱼极少观察到脑出血,出血比例仅分别为1.03%(1/97)和1.15%(1/87)。注射Control MO与col8a1 MO的Tg(flk1:GFP;gata1:dsRed)双转基因斑马鱼红细胞渗漏发生率分别为0.37%(1/273)与18.18%(52/286)(P<0.001)。注射Control MO与col8a1 MO组Tg(flk1:GFP)转基因斑马鱼DAPI阳性的细胞核数分别为(10.05±5.27)个与(60.35±3.96)个(P<0.001);Dextran-Rhodamin染料渗漏引起的中脑实质荧光示踪强度值分别为2.54±4.70与5.13±3.52(P<0.001),两组比较差异有统计学意义。结论本研究成功构建了斑马鱼脑出血模型,并筛选出col8a1、tfap2α、msx1等诱导斑马鱼脑出血的相关基因。
简介:造血干细胞是最重要的成体干细胞之一,通常认为其能够通过程序性的分裂完成自我更新,并具备向下分化为完整血细胞谱系的能力,因此,自体造血干细胞被认为是人类血液疾病的治疗手段之一,受到了较大的关注和重视。由于哺乳动物的造血干细胞能够在成体中被分离出来并实现体外培养,因此关于其分裂和分化的行为倾向和调节因子方面的研究也已相当成熟、然而。囿于哺乳动物营胎生造成胚胎期活体观察的诸多不便,造血干细胞在体内的产生方式一直以来都悬而未决。本研究中使用的斑马鱼是一种硬骨鱼类,其在进化水平上与哺乳动物具有很高的相似性,具备相对完善的血液系统,更重要的是,在受精后0~7天(f)~7dpfdayspostfertilization)的斑马鱼幼鱼的皮肤是通体透明的、本研究基于此项独特优势,使用荧光蛋白转基因斑马鱼品系,实现在体观察尾部动脉血管腹侧壁的造血干细胞产生过程。后又使用另一个可变色荧光蛋白转基因品系TgLL将既有研究中发现的背部动脉前段产生之造血干细胞和尾部产生之造血干细胞进行分别标记和追踪,得出这两批产生时间和产生位置均不相同的造血干细胞在分裂和分化上的异同,希望能为斑马鱼和哺乳动物造血系统的相关研究提供新的思路和依据。
简介:所谓皇马,就是御用的骏马,高大而威猛,但却被彻底驯服,一举一动都归于模式化;所谓斑马,就是自由的野马,也许看上去并不强壮,但在残酷的生存竞争中,他们锻炼出了惊人的速度和战斗力,这是那些养尊处优的皇马们不可比拟的,而如果对比两个种群,那一定是斑马战而胜之。而在人类的绿茵世界中,在冠军联赛的八强决战中,就上演了一出斑马对皇马的歼灭战,星光闪耀、头顶王冠的皇马在都灵再次感受了朴实无华的斑马的凶猛铁蹄,一片嘶咛、践踏过后,皇马洁白无瑕的身躯血迹斑斑,王冠滑落,星光暗淡,而斑马们则昂首继续向前。皇马不是斑马,冠军联赛首先需要成绩,其次才是名气和地位。