简介:利用PCR以实验室构建的原核重组表达质粒pProEX-OCIF为模板扩增得到N末端融合有6×His标签和rTEV蛋白酶识别序列的人破骨细胞形成抑制因子(OsteoclastogenesisInhibitoryFactor,简称OCIF)结构域D1~D6(简称OCIFm)编码基因片段;将其与pMD18-T连接,转化大肠杆菌TOP10,筛选得到阳性重组质粒pMD18-OCIFm,双酶切重组克隆质粒pMD18-OCIFm得到OCIFm基因片段;将其定向插入甲醇营养型酵母分泌表达载体pPIC9中,构建获得重组表达质粒pPIC9-OCIFm.测序验证后,以限制性内切酶SalⅠ线化,电穿孔转化酵母宿主菌GS115.筛选得到阳性表达菌株后,甲醇诱导表达4d,SDS-PAGE和Westernblot对表达情况进行分析和确认.所获得的OCIFm基因片段在甲醇营养型酵母中表达量占菌体总蛋白的30%以上.利用Ni-NTA树脂对表达产物进行一步亲和层析纯化.活性测定表明纯化的表达产物可诱导体外培养的成熟破骨细胞样细胞的凋亡.表达产物的生物学活性较利用原核表达系统明显提高.
简介:本文讨论了目前我国养老保险体制改革的相关问题。首先,通过分析年工资增长趋势,对其数据进行回归分析,构造出年工资的Logistic模型,并预测出职工未来年份的年平均年工资;其次,构造养老金替代率模型,并得到多种情况下的替代率;再次,建立养老金缺口模型,用来分析养老基金缺口情况以及达到平衡时领取养老金的年数;最后,分析得出影响养老金替代率和收支平衡的4个因素,即社会统筹基金的缴费比例、基金收益率、退休年龄和开始缴纳养老保险的年龄,对其进行敏感性分析,并提出一些相应的改进建议。