抗凝溶栓治疗血栓后血管内膜损伤程度和血栓附着力的实验研究

杨海平任丽华

河北省滦平县医院(河北滦平068250)

【摘要】目的观察肝素、尿激酶及肝素加尿激酶治疗急性大鼠下腔深静

脉血栓（DVT）形成后不同时相内皮细胞损伤程度与血栓附着力大小的关系。方法100只雄性大鼠建立急性下腔静脉血栓模型后随机分为3组：肝素组(A组),尿激酶组(B组),尿激酶加肝素组(C组),各30只;另10只为假手术组(D组)为对照。其中A,B,C组再分为术后第1,3,7,14,28d天获取形成血栓段的血管，扫描电镜观察内皮细胞损伤情况。并通过生物机能实验系统测量血栓与血管附着力。结果B、C两组分别于血栓形成后1,3d时内皮层基本完整,损伤多为Ⅰ～Ⅱ级,血栓附着力低。7,14d时损伤在Ⅲ～Ⅳ级，血栓附着力较高。

结论肝素联合尿激酶治疗大鼠急性下腔静脉血栓早期内皮细胞损伤程度较低，血栓与血管壁的粘附力相对亦较低。

【关键词】静脉血栓形成抗凝溶栓血管内皮损伤血栓附着力

［中图分类号］

R969.4［文献标识码］A［文章编号］1810－5734(2011)11-44-02

血流缓慢、血管壁损伤、高凝状态是导致深静脉血栓形成的高危因素。血小板黏附和聚集是血栓形成的关键。抗凝、溶栓是治疗DVT形成的重要方法之一。DVT后多表现为内膜增生、附壁血栓纤维化等表现，并会出现明显的血流动力学改变，导致血栓形成后综合征。本实验通过分别应用肝素、尿激酶及联合肝素加尿激酶治疗急性大鼠下腔静脉血栓形成后，病变血管段血栓与血管壁的粘附力的影响。

1材料和方法

1.1动物分组

100只雄性大鼠(体重160-200g,承德医学院动物实验中心提供),随机分为3组：肝素组(A组),尿激酶组(B组),尿激酶加肝素组(C组),各30只;另10只为假手术组(D组)为对照。其中A,B,C组再分为术后第1,3,7,14,28d天5个时相组,每个时相6只大鼠。

1.2急性下腔静脉血栓形成模型的制作

2%苯巴比妥钠40mg/kg腹腔麻醉,游离左肾静脉与下腔静脉汇合处和髂总静脉分叉处之间的下腔静脉段。分别在左肾静脉下腔静脉处汇合处下方用丝线结扎下腔静脉,在髂总静脉分叉处上方用显微血管夹暂时阻断下腔静脉1h,经25G细针穿刺无血液流出,证实该段静脉内血栓已形成，给予关腹。对照组只显露腔静脉但不结扎。

1.3药物治疗

成功建模后,A,B,C组分别给予尾静脉注入肝素钠200U/kg,尿激酶40000U/kg,尿激酶40000U/kg+肝素200U/kg。D组给予相同容量的生理盐水5毫升。每天1次,尿激酶7天，肝素钠10d。

1.4观察指标

分别于术后的第1,3,7,14,28天,切除血栓形成的下腔静脉段,纵行剪开管壁，去除血栓，分别固定于10%甲醛溶液和25%戊二醛中。HE染色观察:血栓的结构演变与机化程度(10×40倍)。扫描电镜下行内皮损伤分级［１］,I级:内皮细胞脱落0～10%,内皮层完整×1000;II级:内皮细胞脱落11%～25%,内皮层轻微断裂伴白细胞及血小板沉积×1000;III级:内皮细胞脱落26%～50%,片状内皮脱落,明显的内皮下基质显露×1000;IV级:内皮细胞脱落51%～75%,内皮肿胀伴明显组织坏死×1000;V级:内皮细胞脱落76%～100%,严重的内皮脱落伴明显的内皮下基质暴露×1000。

1．5血栓静脉内皮细胞扫描电镜观察结果

实验干预组各时相点内皮细胞均有损伤。所有血栓形成的内皮(EC)形态均与正常对照存在明显差异。A组EC损伤程度随血栓形成的进展进行性增大,1d时多为Ⅰ-Ⅱ级;3、7d时损伤加重,14、28d时为Ⅳ-V级;B组1、3d时内皮层基本完整,多为Ⅰ-Ⅱ级;7d时EC形态变为长条形,有少量的EC脱落,细胞间隙增大,基质部分暴露,有血小板和白细胞沉积,损伤在Ⅲ-Ⅳ级;溶栓后14,28d,EC修复再生,内皮形态渐趋规则,但修复不完全,部分基质暴露,内皮损伤多为Ⅱ-Ⅲ级。C组1,3d时内皮层基本完整,多为Ⅰ-Ⅱ级,7,14d时损伤在Ⅲ-Ⅳ级，EC形态变化与B组相似,但较B组损伤轻;28d时,内皮修复较好,损伤多为Ⅰ-Ⅱ级

1.6观察指标

分别于术后的第1,3,7,14,28天,切除血栓形成的下腔静脉段约2厘米。其近端截取1厘米长血管套于自制血管衡速加压器上，370C生理盐水冲注，后接张力换能器感受压力，BL-410生物机能实验系统测量附壁血栓刚好从管壁脱落的阈值。分析采集数据以x±s标准差作为样本数据。

各组在治疗后5个时相的血栓附着力

注:1)与A组比较,P<0.01;2)与B组比较,P<0.01;3)与C组比较,P<0.01。

2结果

各组在治疗后5个时相的血栓附着力检测结果。除血栓完全崩解消失或完全机化无法进行血栓附着力测定外，B、C两组分别于血栓形成后1、3天较A组血栓附着力低，7天时B组附着力较A组低。

3讨论

正常血管内膜是血小板凝集的生理屏障,当血管内膜损伤后,血小板发生黏附、凝集,并释放生物活性物质,进一步加重血小板的凝集,促进血栓形成。同时内膜损伤后释放凝血因子Ⅲ及其他组织因子,启动外源性凝血系统,凝血酶原被激活,继而血小板和纤维蛋白并和其他以红细胞为主的各种血细胞共同形成血栓。急性下肢深静脉血栓形成多用抗凝、溶栓及外科取栓来治疗。据文献报道,抗凝、溶栓较外科取栓有更好的内皮结构保护作用［２，３］。而EC在血栓形成、复发的过程中具有重要作用,还是炎症和免疫反应的介导者及调节者［4，5］。当内皮细胞受损将会失去其抗血栓作用而导致炎症反应等。因此在血栓形成的治疗中,保护血管内皮细胞便成为治疗成功与否的重点。急性静脉血栓时,血栓中纤维蛋白和纤维蛋白原结合了大量被激活的凝血酶,这种凝血酶不易被肝素所灭活,而在血栓局部发挥持久的生物活性作用,刺激其特异性结合受体在静脉内皮细胞上表达。本实验光镜观察发现,A组静脉壁IH及胶原纤维沉积比B、C组严重,且扫描电镜结果显示A组EC损伤程度随血栓形成病程进行性增大,说明如只予抗凝治疗无法阻止静脉内皮及平滑肌细胞遭到进一步的损伤。急性血栓所引起的血管壁急性炎性反应迅速而强烈。本实验中显示大剂量尿激酶能迅速溶解血栓防止且局部作用持久,可以减轻内膜损伤和血栓机化所致内膜增生［６］。在平滑肌细胞增生和胶原纤维沉积上尿激酶组明显轻于肝素组。说明尿激酶不仅有溶栓作用,而且能减轻血栓引起的血管壁急性炎症反应

［7，8］。尿激酶合肝素治疗急性腔静脉血栓形成即可溶解现有血栓,减轻血管壁急性炎症反应;又能通过肝素的抗凝作用,控制血栓向周边蔓延的可能,因此对血管内皮细胞破坏较小,用于治疗大鼠下腔静脉血栓形成后28d,内皮修复较好,损伤多为Ⅰ-Ⅱ级,血管壁结构基本完整。本实验证实尿激酶联合肝素治疗大鼠急性下腔静脉血栓形成具有良好的早中期效果，并且具有很好的内皮保护作用。

参考文献

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