简介：摘要目的观察骨膜微环境下，脂肪脱细胞基质(DAM)在体内向成脂或成骨方向分化的情况。方法2020年6—12月，将人体吸脂术获取的脂肪组织在全军整形外科研究所制备为DAM，选取6只4～6周雄性SD大鼠，按照同等初始体积植入到大鼠顶骨骨膜下。术后84 d取材，通过大体观察、组织学染色、免疫荧光染色观察DAM支架材料成脂和成骨分化情况；非标记定量蛋白质谱检测DAM中成骨相关蛋白。结果大体观察显示，DAM支架材料周围血管化丰富。HE和Masson染色观察到DAM脂肪再生和血管化现象，同时OCN免疫荧光染色证实，DAM少部分向成骨方向分化。质谱筛选出了成骨分化相关蛋白。结论骨膜微环境下，DAM主要向脂肪组织方向分化，但少部分具有向成骨方向分化的潜能，可能与DAM中含有部分成骨相关蛋白有关。

简介：摘要骨关节炎是一种常见的关节退行性疾病，而软骨损伤通常被认为是不可逆的关节变性早期因素。由于软骨的自我修复和再生能力有限，目前软骨缺损的修复仍是一个具有挑战性的医学难题。近年来，应用组织工程技术治疗软骨缺损被认为是一种新的治疗途径。软骨脱细胞基质（acellular cartilage matrix，ACM）保留了天然软骨的细胞外基质空间结构和生物活性成分，能够最大程度地模拟天然软骨的细胞外环境，是软骨修复与再生的理想材料。ACM的主要组成成分包括胶原蛋白、弹性蛋白、生长因子等，其中Ⅱ型胶原蛋白是透明软骨中的主要类型，在调节软骨组织的机械性能方面发挥重要作用。有研究证实Ⅱ型胶原蛋白、生长因子和低氧微环境分别在促进软骨再生中发挥重要作用。Ⅱ型胶原蛋白可以通过特定的方式诱导细胞聚集和软骨分化；ACM中含有的多种生长因子能够诱导Sox9的表达，促进干细胞成软骨分化；低氧微环境可上调Ⅱ型胶原（COL2A1）、Sox9的表达并维持软骨细胞表型。此外，ACM已被广泛应用于软骨再生的研究，将ACM制备成脱细胞支架、水凝胶或是利用3D生物打印技术对软骨缺损进行修复均取得了良好的软骨再生效果。尽管ACM源性生物材料具有诸多优点，但在实际应用中尚存在一些问题，例如ACM的成分丢失、支架的性能降低等，值得进行深度的探索和挖掘。

简介：目的观察葛根素对氧化应激后骨髓基质干细胞（BMSCs）损伤的影响。方法应用密度梯度离心联合贴壁筛选的方法，体外分离培养兔骨髓来源的BMSCs进行实验。氧化应激由过氧化氢（100μmol／L）诱导产生。应用不同浓度葛根素对过氧化氢诱导前的BMSCs预处理。通过噻唑蓝法观察葛根素对氧化后BMSCs增殖活性的影响。通过对碱性磷酸酶活性检测，观察葛根素对氧化后BMSCs早期成骨分化能力的影响。应用2’，7’一二氯荧光黄双乙酸盐检测活性氧含量反映细胞内氧化应激水平。应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果体外成功分离培养原代兔BMSCs。葛根素能够保护氧化应激导致的BMSCs损伤，提高细胞增殖能力，增强细胞碱性磷酸酶活性，降低细胞内活性氧含量，抑制细胞凋亡，具有浓度依赖性。结论葛根素通过抗氧化作用，抑制细胞凋亡，发挥对BMSCs氧化损伤的保护。

简介：可以看出没有玻璃化转变温度的样品Ｅ(6%ＨＥＳ+20%海藻糖+细胞悬液)冻干后细胞的存活率很低,如样品Ｃ(40%ＰＶＰ+20%海藻糖+细胞悬液)、Ｄ(50%ＰＶＰ+20%海藻糖+细胞悬液),样品Ｂ(30%ＰＶＰ+20%海藻糖+细胞悬液)冻干后骨髓基质干细胞的存活率最高

简介：摘要软骨脱细胞基质(acellular cartilage matrix, ACM)是软骨组织工程可选支架材料之一，有望成为对软骨缺损进行修复、重建的理想材料，临床应用潜力巨大。多种参数可以用来评估ACM支架的性能，包括孔隙率、孔径大小、吸水性、生物力学性能以及生物相容性等。ACM制备流程包括预处理、脱细胞、清洗、塑形等，且塑形后的ACM支架既可以保持原有的宏观形态，又可以微粒、薄片或复合支架的形态应用于动物实验。该文介绍了用于评估ACM的多种参数，总结和梳理ACM制备工艺的研究进展，比较不同类型ACM支架的优缺点及应用前景。

简介：摘要目的探讨磁场在大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞方向分化中的作用。方法在恒定磁场和无恒定磁场的条件下，分别在培养皿对大鼠骨髓基质干细胞进行成骨诱导，在实验的1、3、5、7天进行细胞增值，碱性磷酸酶，VonKossa染色检测。比较恒定磁场对大鼠骨髓基质干细胞成骨作用的影响。结果3天时，MTT显示细胞增值有差异。在5、7天时，所有检测均有差异。在第7天时，碱性磷酸酶染色结果显示磁场组的阳性率要高于非磁场组。结论恒定磁场增强骨髓基质干细的成骨细胞分化，改变细胞形态。

简介：摘要目的探讨高糖环境下基质细胞衍生因子-1(SDF-1)对巨噬细胞生物学功能的影响及其机制。方法体外建立RAW264.7巨噬细胞系，细胞计数试剂盒(CCK-8)检测SDF-1对巨噬细胞的毒性。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测高糖(22.5 mmol/L)和正常糖(5.5 mmol/L)对巨噬细胞相关蛋白表达的影响。实验分组：A组(对照)、B组(SDF-1)、C组(磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B通路抑制剂：LY294002)、D组(SDF-1+ LY294002)，Transwell实验检测巨噬细胞的迁移能力，Western blot检测各组相关蛋白的表达变化。两组间比较采用非配对t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果CCK-8实验结果显示，各组间比较差异无统计学意义(F＝0.464，P>0.05)。高糖组巨噬细胞SDF-1、血管内皮生长因子(VEGF)、SDF-1的特异受体(CXCR4)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达低于正常糖组(SDF-1、VEGF、CXCR4、MMP-9组间比较，t＝50.510、11.020、27.660、55.350，均P<0.05)。Transwell实验中，A、B、C、D组迁移巨噬细胞数分别为(86.630±4.096)、(144.300±5.044)、(59.000±2.646)、(65.670±4.256)个。与A组比较，B组及C组差异有统计学意义(t＝21.460、5.574，均P<0.05)。此外，SDF-1可以增加巨噬细胞CXCR4、PI3K、蛋白激酶B(Akt)、MMP-9、VEGF的表达，而LY294002可以减少上述蛋白的表达(Western blot检测各蛋白，B组：CXCR4、PI3K、Akt、MMP-9、VEGF组间比较，t＝44.690、5.393、4.640、13.250、8.551，均P<0.05；C组：PI3K、Akt、MMP-9、VEGF组间比较，t＝13.430、5.287、4.381、45.510,均P<0.05)。结论高糖环境可以影响巨噬细胞SDF-1、VEGF、CXCR4及MMP-9的表达，SDF-1可能通过上调PI3K/Akt通路促进巨噬细胞分泌MMP-9及VEGF。

简介：为探讨转染FL基因的人原代骨髓基质细胞对脐血CD34+细胞的体外扩增效应,建立了转基因骨髓基质细胞与人脐血CD34+细胞共培养体系.采用免疫磁珠法分离人脐血CD34+细胞,在不同的体外培养体系中进行培养并取样检测细胞总数,CFC和CD34+细胞百分率.结果表明,在不同组合的培养体系中,转基因骨髓基质细胞培养体系较骨髓基质细胞培养体系和无滋养层培养体系对有核细胞总数,CFC含量和CD34+细胞含量均具有明显的扩增作用,分别扩增了122.5±4.3,39.6±2.7和11.8±0.52倍(P<0.05).结论:转染FL基因的人骨髓基质细胞协同其它细胞因子可增强对人脐血CD34+细胞的体外扩增作用.

简介：摘要目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)/内皮祖细胞(EPC)作为种子细胞构建的基质依赖型组织工程骨(ECM-TEB)修复大鼠股骨缺损的效果。方法分离培养骨髓来源的MSC和EPC并进行功能鉴定，种植上架于纳米晶胶原基人工骨颗粒，培养14 d后冻干，获得MSC/EPC ECM-TEB和MSC ECM-TEB。扫描电镜观察MSC和EPC在支架表面的生长形态。分别提取MSC ECM-TEB蛋白浸提液(对照组)和MSC/EPC ECM-TEB蛋白浸提液(实验组)，加入EPC培养系统中进行迁移、划痕修复、管腔形成检测；另加入MSC培养系统中进行茜素红染色和碱性磷酸酶(ALP)染色检测，观察两组细胞募集、血管生成和成骨分化情况。选取12只SD大鼠，建立股骨缺损模型，按照随机数字表法分为：(1)假手术组：仅在缺损处进行清创处理；(2)MSC ECM-TEB组：在缺损处植入MSC ECM-TEB；(3)MSC/EPC ECM-TEB组：在缺损处植入MSC/EPC ECM-TEB，每组4只大鼠。2个月后行Micro-CT检查和缺损区Masson三色染色观察骨缺损修复情况。冻干后低温保存3个月，采取同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)标记蛋白质谱检测MSC ECM-TEB和MSC/EPC ECM-TEB在成血管方面的差异，并采用基因本体论/京都基因与基因组百科全书技术(GO/KEGG)功能富集方法分析其原因。结果MSC和EPC在支架表面生长、增殖良好，形成光滑的细胞层状结构。实验组在细胞迁移数、划痕修复比例和管腔形成长度分别为(121.6±8.3)个、(61.5±5.9)%、(11.3±0.6)mm，较对照组显著增多[(85.0±6.7)个、(39.3±3.6)%、(5.9±0.4)mm](P均<0.01)。茜素红染色和ALP染色结果显示，实验组钙结节矿化面积比例显著增加[(38.8±3.3)%∶(49.9±3.0)%、(38.8±2.4)%∶(45.3±3.3)%] (P均<0.05)。Micro-CT和Masson染色结果表明，MSC/EPC ECM-TEB组骨缺损修复良好，MSC ECM-TEB组仅形成少量新骨，假手术组几乎没有新骨形成；骨体积分数、骨小梁数量和骨小梁厚度差异均有统计学意义(P<0.05)。蛋白质谱分析结果表明，与MSC ECM-TEB组相比，MSC/EPC ECM-TEB组中有83个血管生成相关的因子显著上调(差异倍数>2，P<0.05)；GO/KEGG功能富集分析显示，与MSC ECM-TEB相比，MSC/EPC ECM-TEB在"血管发育"等生物过程存在明显差异(P<0.01)，"血管平滑肌收缩通路"等显著增强(P<0.01)。结论与MSC ECM-TEB相比，MSC/EPC ECM-TEB在细胞募集、血管生成和新骨生成方面显著增强，是一种更佳的可用于创伤性骨缺损修复的组织工程骨构建策略。

简介：目的探讨表面脱钙的脱蛋白异体骨与骨髓基质细胞的生物相容性,为骨组织工程提供合适的支架材料.方法用经物理与化学方法处理而制得的脱蛋白骨与骨髓基质细胞(MSCs)复合培养,进行形态学观察、细胞增殖、ALP的活性、骨钙素的分泌与蛋白质含量检测;扫描电镜观察细胞在脱蛋白骨材料上的情况.结果骨髓基质细胞能在脱蛋白骨上贴附、增殖,其生长及功能不受影响.结论本方法所制的脱蛋白骨与MSCs具有良好的生物相容性,可作为MSCs的载体应用于骨组织工程.

简介：摘要目的评价犬肾细胞基质四价流感裂解疫苗(MDCK-Va)配伍不同佐剂后的免疫原性。方法将高、中、低剂量的MDCK-Va和鸡胚基质四价流感裂解疫苗(egg-Va)原液分别肌肉免疫BALB/c小鼠2次，间隔3周，小鼠眼静脉采血，分离血清，血凝抑制(hemagglutination inhibition，HI)试验检测抗体效价。不同剂量的MDCK-Va分别配伍QS21、AddVax、PolyI∶C、CpG ODN 1826以及AddVax/PolyI∶C(Add/Poly)联合佐剂，免疫小鼠，初次免疫21 d后，小鼠眼静脉采血，HI和微量中和(microneutralization，MN)试验检测抗体效价，同等剂量加强免疫21 d后，再次采血检测抗体效价。10 μg MDCK-Va配伍上述佐剂，加强免疫5 d后，取小鼠脾脏检测脾指数和脾细胞分型。结果MDCK-Va诱导的各型别(H1N1、H3N2、B/Victoria和B/Yamagate)的血清效价均非劣效egg-Va诱导的血清效价。QS21/Va、AddVax/Va、PolyI∶C/Va、CpG ODN 1826/Va，以及Add/Poly/Va诱导的小鼠血清HI抗体效价均高于MDCK-Va，尤其是QS21/Va和Add/Poly/Va诱导的保护性效价，其差异具有统计学意义。对于H1N1疫苗，血清HI抗体和MN抗体之间的Pearson相关系数为0.737~0.910；对于H3N2亚型，HI抗体和MN抗体的Pearson相关系数为0.839~0.947。QS21/Va组具有明显的脾指数增高，但淋巴细胞占比降低。QS21/Va和Add/Poly/Va对小鼠脾脏中性粒细胞和CD4/CD8细胞的刺激明显强于其他佐剂。结论Add/Poly/Va组对MDCK-Va具有较强的免疫增强作用，可作为MDCK-Va的候选佐剂。HI和MN试验检测的抗体具有很强的正相关性。

简介：摘要目的自主研发可控温高速软组织匀浆机将人脱细胞脂肪组织基质(DAT)制备成可注射匀浆，探讨其细胞相容性及填充效果。方法2019年3月至2021年3月，于解放军联勤保障部队第九四〇医院对正常脂肪组织进行脱细胞处理后得到DAT，将DAT与生理盐水按照1∶12混匀，用可控温高速软组织匀浆机以803×g匀浆，使制备DAT匀浆可顺利通过27 G针头。扫描电镜观察DAT匀浆并检测其细胞相容性；将脂肪颗粒、DAT匀浆、DAT匀浆+脂肪干细胞(ADSC)分别注射入大鼠背部，比较填充效果、血管生成能力、炎症浸润情况等。结果脂肪组织经脱细胞处理成功获得DAT，经可控温高速软组织匀浆机制备DAT匀浆，粒径(749.91±136.79) nm；细胞与其复合培养后，黏附率(92.16±1.00)%，CCK-8检测显示随时间延长，吸光度(A)值不断升高，细胞生长情况良好，匀浆对细胞无毒性。体内试验显示，DAT匀浆、DAT匀浆+ADSC填充效果明显好于脂肪颗粒组(P<0.01)。脂肪颗粒组有大量脂肪细胞坏死融合形成油囊，而DAT匀浆、DAT匀浆+ADSC未见明显降解，并有部分脂肪细胞生成。CD31染色结果显示，DAT匀浆组及DAT匀浆+ADSC组微血管数量高于脂肪颗粒组(P<0.01)；CD68染色结果显示，DAT匀浆组及DAT匀浆+ADSC组炎症浸润低于脂肪颗粒组(P<0.01)。结论自主研发的可控温高速软组织匀浆机可将DAT制备为能通过27 G针头的DAT匀浆，具有较好的细胞相容性以及填充效果，且注射过程简单，创伤小，可作为填充材料。

简介：摘要在牙周软组织增量手术领域，自体组织移植物替代材料发展迅速，其可避免第二术区、缩短手术时间、减轻术后反应及疼痛，而且不受组织量的限制，可以治疗软组织缺损范围较大的病例。本文介绍可作为自体组织移植物替代材料的脱细胞真皮基质的特点及其组织学相关研究、临床应用及治疗效果，为脱细胞真皮基质的应用提供参考。

简介：【摘要】目的：对脱细胞猪角膜基质治疗真菌性角膜炎护理，做好效果比较。方法：本文通过选取60例患者，对照组、观察组分别采用常规、优质护理模式。结果：对对照组、观察组治疗前、治疗1个月、治疗3个月的视力水平评分比较，观察组病例患者的视力水平高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：对脱细胞猪角膜基质治疗真菌性角膜炎护理，患者情况明显好转，整体效果较优。

简介：目的探讨自体骨髓基质干细胞（BMSC）移植治疗糖尿病下肢血管病变的可行性和临床效果。方法糖尿病致双下肢血管病变的患者30例（60条下肢）,双侧下肢的病变程度接近。以患者自体BMSC对一侧下肢进行治疗,以另一侧下肢为自身对照,对双侧肢体肤色、肢体疼痛、冷感、溃疡、皮温改变、间歇性跛行变化及实验室检查进行比较,观察自体BMSC治疗糖尿病周围血管病变的安全性和有效性。结果治疗侧下肢在肤色、疼痛感、冷感、溃疡、皮温等方面均明显好于对照组,间隙性跛行亦有改善;术后6个月时行数字减影动脉血管造影,治疗组可见丰富的侧支血管形成。结论自体BMSC移植治疗糖尿病下肢血管病变具有可行性,可明显改善症状,效果肯定。

简介：

简介：骨髓基质干细胞具有多种潜能,在一定条件下能分化成多种类型的细胞,包括骨细胞,软骨细胞,脂肪细胞等,同时其易于分离和培养扩增,有望成为治疗人类多种疾病的新型工具.本文就基质干细胞的生物学特性,体外分化及在口腔临床方面的应用作一简要综述.

简介：摘要目的建立有效的细菌性角膜炎体外细胞模型，探讨其对角膜基质细胞的影响。方法采用贴壁法分离培养SD大鼠角膜基质细胞，以1 000细胞·100 μl-1·孔-1接种并使用CCK8测定不同浓度（0.4、2、10、50、250、1 250 mg/L）脂多糖（LPS）对细胞1、2、3、4、5 d内的量效作用曲线，对照组使用PBS（n=3）。根据量效曲线选定建模浓度后，分别设置模型组与对照组（n=3）。光镜观察培养5 d角膜基质细胞形态变化。以5 000细胞·100 μl-1·孔-1接种，使用CCK8测定LPS作用6、12 h对角膜基质细胞短期活性影响。划痕实验检测LPS作用6、12 h角膜基质细胞迁移率；ELISA检测角膜基质细胞炎症因子TNF-α、IL-6分泌水平；免疫荧光染色鉴定胶原分泌水平；免疫印迹检测基质金属蛋白酶9（MMP9）表达变化。结果与对照组比较，自LPS作用1 d开始，相同时间点时10、50、250、1 250 mg/L角膜基质细胞活性均降低（均P<0.05）。为满足细胞炎症诱导的需要，选用出现细胞增殖抑制效应的低药物浓度10 mg/L LPS建立体外炎症细胞模型。细胞体外培养5 d时，与对照组比较，模型组角膜基质细胞形态由梭形变为多边形。调整细胞种植密度后，短期的体外活性检测表明，与对照组比较，模型组角膜基质细胞在LPS作用6 h和12 h后出现细胞活性抑制现象[6 h：0.036±0.006比0.061±0.006，12 h：0.033±0.004比0.053±0.005，均P<0.05]。6 h和12 h时模型组角膜基质细胞的体外迁移速率明显低于对照组[6 h：（6.77±3.22）Pixel/h比（16.52±1.18）Pixel/h，12 h：（8.41±1.45）Pixel/h比（17.09±0.75）Pixel/h，均P<0.05]。LPS作用48 h后，与对照组比较，模型组角膜基质细胞炎症因子分泌水平升高[TNF-α：（446.71±20.59）pg/ml比（289.27±26.44）pg/ml，IL-6：（146.26±17.34）pg/ml比（65.94±10.11）pg/ml，均P<0.05]；MMP9表达量增加[0.884±0.052比0.385±0.036，P<0.05]；Ⅰ、Ⅵ型胶原含量降低[Ⅰ型：（0.46±0.15）×105 Pixel2比（1.21±0.53）×105 Pixel2，Ⅵ型：（2.63±2.07）×106 Pixel2比（7.08±1.52）×106 Pixel2，均P<0.05]，Ⅲ型胶原含量升高[（3.69±0.73）×105 Pixel2比（1.12±0.40）×105 Pixel2，P<0.05]。结论LPS诱导角膜基质细胞可模拟角膜炎中细胞炎症反应及变化，为研究细菌性角膜炎的机制和治疗方法提供有效的体外细胞模型。

简介：摘要目的探讨煅烧骨载体在骨髓基质细胞（BMSC）修复骨缺损中的作用。方法实验动物采用的是山羊，提取2毫升骨髓细胞支撑悬浮液，在体外培养2周。采用手术的方法在羊两侧的桡骨1.5cm处形成骨膜—骨缺损，并将培养过2周的骨髓基质细胞注入到煅烧骨载体并植入骨髓缺陷的地方，在移植后的1、2、3、4周末，需要用钼靶X线检查双侧桡骨的缺损骨情况，并且取4周末的骨痂进行组织检查。结果移植后实验侧的骨痂的形成速度对照侧愈伤组织的速度要快；第4周末，实验侧缺陷处全部为骨痂的连接，对照侧缺损处还没有形成骨痂进行连接。结论煅烧骨载体能够帮助BMSC有效促进骨缺损的修复。

简介：绿色荧光蛋白Greenfluorescenceprotein，GFP）最早被Shimomura等学者于1962年从水母（Jellyfish，AequoreaVictoria）发现。在1971年，Morin和Hastings注意到随着水螅体（Hyroid，Obelia）中发光复合物的分离，发光波长迅速变化：当发光复合物中的荧光蛋白从它的光源一水母发光蛋白中解离下来时，发射光从绿色变为蓝色。这些早期的观察标志着GFP的发现。在天然的发光复合物中，GFP把从水母发光蛋白（本质上是一种荧光素酶类的光蛋白）发射的高能量蓝光转换为低能量的绿光。