简介：目的探讨选择性雌激素受体调节剂（selectiveestrogenreceptormodulator,SERM）雷洛昔芬对3T3-E1细胞增殖分化的作用及其机制.方法用不同浓度的雷洛昔芬（10^-9mol/L、10^-8mol/L、10^-7mol/L）处理培养3T3-E1细胞,另设空白对照组,24h后检测各指标.CCK8法检测细胞增殖,使用碱性磷酸酶测定试剂盒测定碱性磷酸酶（alkalinephosphatase,ALP）活力,实时荧光定量聚合酶链式反应（realtimequantitativepolymerasechainreaction,qRT-PCR）检测细胞内IRE-1、ATF6、eIF2α的表达.结果雷洛昔芬与对照组相比较可促进3T3-E1细胞增殖（P〈0.05）,随着雷洛昔芬浓度的增高,细胞增殖程度升高（P〈0.05）,高浓度的雷洛昔芬（10^-7mol/L）促增殖能力最强;雷洛昔芬不同浓度处理后各组ALP活力增加（P〈0.05）,而且高浓度雷洛昔芬（10^-7mol/L）升高ALP活力较明显;IRE-1、ATF6及eIF2α的表达均升高（P〈0.05）.结论雷洛昔芬可能通过上调IRE-1、ATF6及eIF2α的表达促进3T3-E1细胞的增殖分化.

简介：目的：探讨毒胡萝卜紊诱导大鼠皮层神经元内质网应激凋亡的机制及丹红注射液的干预作用。方法：体外培养SD乳鼠皮层神经元，免疫组织化学、免疫荧光染色鉴定神经元纯度。流式细胞术AnnexinV、PI双标检测凋亡率及活性caspase-3、caspase-8、caspase-7、caspase-9表达，WesternNoting免疫印迹分析caspase-12、GRP78、Bcl-2、细胞色素C蛋白表达，Fura-2／AM法荧光分光光度计检测细胞内钙浓度（[Ca^2＋]i）。结果：SD乳鼠皮层神经元可纯化体外培养。2μmol／L毒胡萝卜素作用神经元24、48h细胞凋亡率分别是17.88％、21.38％，丹红治疗组分别是6．30％、6．11％，两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。毒胡萝卜素诱导神经元GRP78表达上调，剪切活化caspase-3、caspase-8、caspase-9、caspase-12，使细胞色素C表达增加，Bcl-2表达减少。丹红注射液促进细胞Bcl-2表达，抑制细胞色素C释放，减少活化的caspase-3、caspase-8、caspase-9含量，稳定游离钙浓度。结论：毒胡萝卜素诱导神经元内质网应激反应性凋亡。丹红注射液能抑制体外培养神经元内质网应激所致凋亡。

简介：摘要目的探讨右美托咪定（dexmedetomidine, Dex）预处理对大鼠心肌缺血／再灌注损伤（myocardial ischemia/reperfusion injury, MI/RI）时心肌组织内质网应激（endoplasmic reticulum stress, ERS）的影响。方法雄性SD大鼠45只，230~270 g，按随机数字表法分为3组（每组15只）：假手术组（S组）、缺血／再灌注组（I/R组）、右美托咪定＋缺血／再灌注组（D+I/R组）。采用结扎左冠状动脉前降支（left anterior descending coronary artery, LAD ）30 min后松结再灌注6 h的方法构建MI/RI模型。Dex经右侧颈内静脉泵注，先以1.0 μg‧kg-1‧h-1泵注10 min，再以0.7 μg‧kg-1‧h-1泵注15 min。通过伊文蓝和2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑（2, 3, 5-triphenyl tetrazolium chloride, TTC）双染色法检测心肌缺血面积及心肌梗死面积，实时荧光定量PCR （real-time quantitative PCR, RT-qPCR）检测心肌组织ERS相关分子葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78, GRP78）、C/EBP同源蛋白（C/EBP homologous protein, CHOP）及炎症因子IL-1β、IL-6 mRNA的表达水平，Western blot检测心肌组织GRP78、CHOP、cleaved caspase-3蛋白相对表达量。结果与S组比较，I/R组和D+I/R组心肌梗死面积和心肌缺血面积增加（P<0.05），GRP78、CHOP、IL-1β、IL-6 mRNA水平升高（P<0.05），GRP78、CHOP、cleaved caspase-3蛋白相对表达量升高（P<0.05）。与I/R组比较，D+I/R组心肌梗死面积减少（P<0.05），GRP78、CHOP、IL-1β、IL-6 mRNA水平降低（P<0.05），GRP78、CHOP、cleaved caspase-3蛋白相对表达量降低（P<0.05）。结论Dex预处理可以有效抑制大鼠MI/RI时的ERS，减轻心肌细胞凋亡和炎症反应。

简介：摘要目的本研究旨在探讨LncRNA HCG18调控miR-185-5p/AGER轴对糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）内质网应激和自噬的影响。方法收集DN患者肾脏组织，建立高糖（high glucose，HG）诱导的足细胞损伤模型。检测DN患者肾组织与DN细胞模型中HCG18的表达。确定HCG18在细胞中的定位表达。证实HCG18与miR-185-5p、miR-185-5p与晚期糖基化终产物特异性受体（advanced glycosylation end-product specific receptor,AGER）的调控关系。qRT-PCR和western blot检测内质网应激相关因子（CHOP、XBP1）及自噬相关因子（Beclin-1、p62）的表达。结果相对于非DN患者，DN患者肾组织中HCG18高表达（P<0.05）。相对于正常糖（normal glucose，NG）组，HG模型中内质网应激相关因子（CHOP、XBP1）的mRNA和蛋白表达增加而自噬相关因子Beclin-1的mRNA和蛋白表达被抑制，p62的mRNA和蛋白表达增强（均P<0.05）。HCG18通过调控miR-185-5p/AGER轴发挥生物学作用。敲低HCG18能减轻内质网应激，激活自噬并减少足细胞损伤，该作用被miR-185-5p抑制剂部分逆转。结论HCG18调控miR-185-5p/AGER信号轴并通过调控内质网应激和自噬促进DN的发生。

简介：目的：在研究内质网应激介导的细胞凋亡过程中,我们发现Ringfingerprotein13（RNF13）具有促进细胞凋亡的功能。我们拟研究沉默RNF13后细胞对Tunicamycin等引起的细胞凋亡的影响,以及RNF13对活性形式的caspase3,XBP1（X-boxbindingprotein1）的剪切以及IRE1（Endoplasmicreticulumtonucleussignaling1）磷酸化的影响以有助于了解RNF13促进细胞凋亡的信号通路的研究。方法：基因沉默RNF13,利用MTT方法研究RNF13沉默后对细胞增殖的影响,RNF13基因沉默后对XBP1剪切的影响,免疫印迹观察RNF13对IRE1磷酸化的影响。结果：RNF13基因沉默效率在80%以上。RNF13基因沉默后明显抑制细胞凋亡;敲低RNF13的细胞可抵抗衣霉素以及毒胡萝卜素的诱导的细胞凋亡。Caspase-3是细胞凋亡的关键蛋白。敲低RNF13后caspase-3的活性形式明显降低（降低70%,P〈0.001）。在加入衣霉素引起内质网应激的情况下,敲除RNF13的细胞XBP1的切割活性明显降低。敲除RNF13的细胞中IREl的磷酸化明显降低（降低90%,P〈0.001）。结论：RNF13通过IRE1-XBP1信号通路调节细胞凋亡。

简介：摘要目的以内质网应激(ERS)为切入点，深入研究全反式维甲酸(ATRA)调控FLT3-ITD突变蛋白表达下降，导致FLT3-ITD突变阳性白血病细胞凋亡的分子机制。方法ATRA处理FLT3-ITD突变阳性白血病细胞株(MV4-11和MOLM13)，流式细胞术检测细胞凋亡，实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测细胞ERS相关和(或)自噬相关基因及蛋白的表达。结果低剂量ATRA可提高FLT3-ITD突变阳性白血病细胞的ERS水平；ATRA作用于ERS相关的PERK/eif2ɑ信号通路，使FLT3-ITD突变阳性细胞的ERS水平持续升高，CHOP基因表达上调；FLT3-ITD突变阳性细胞经ATRA处理后，FLT3-ITD蛋白表达水平降低；细胞内与ERS有关的并且主要的两个蛋白降解途径中，与内质网关联降解(ERAD)相关的蛋白ATF6表达无明显变化，而与内质网激活自噬(ERAA)相关的自噬相关蛋白Atg5和Atg7表达明显升高。结论ATRA通过激活PERK/eif2ɑ信号通路持续上调FLT3-ITD突变阳性细胞的ERS水平，通过ERAA途径自噬降解FLT3-ITD蛋白，促进白血病细胞凋亡。研究结果为临床应用ATRA治疗难治性FLT3-ITD突变阳性白血病提供了初步实验依据。

简介：摘要：目的 研究脑出血小鼠IRAK2-Smurf1表达与内质网应激对脑出血炎症损伤的调节作用。方法 成年雄性小鼠随机分组，进行脑出血造模，检测血肿周围组织IRAK2-Smurf1的表达，巨噬细胞内质网应激程度，评价神经功能缺损评分，检测血肿周围脑组织病理改变、细胞炎症水平。 结果 脑出血组的血肿周围组织IRAK2表达增加，Smurf1表达减少，巨噬细胞内质网应激程度增加，细胞炎症水平增加，脑出血小鼠神经功能缺损加重。结论 IRAK2通过抑制Smurf的表达，增加内质网应激诱发的脑出血小鼠的细胞炎症水平和神经功能损伤。

简介：摘要目的探究二甲双胍联合间歇性禁食对小鼠脑缺血再灌注损伤后内质网应激的影响。方法10周龄SPF级健康KM小鼠，体重25~28 g，采用随机数字表法将100只小鼠分为5组：假手术组、局灶性脑缺血组（I/R组）、间歇性禁食组（IF组）、二甲双胍组（Met组）、二甲双胍+间歇性禁食组（Met+IF组），每组20只。IF组：每日8∶00至16∶00时间段随意进食，其余时间禁食；Met组：腹腔注射二甲双胍（10 mg/kg）；Met+IF组：进食方式同IF组，注射二甲双胍方式同Met组；假手术组、I/R组和IF组腹腔注射等体积生理盐水，所有组小鼠均不限制饮水。预处理期间监测小鼠随机血糖和体重变化，14 d后建造局灶性脑缺血再灌注模型，缺血1 h，再灌注24 h后进行脑梗死体积检测，取小鼠脑组织行免疫印迹（Western blot）检测内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、C/EBP同源蛋白（CHOP蛋白）和凋亡蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase-3）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3剪切体（Cleaved-caspase-3）的蛋白含量。结果不同干预处理后，假手术组、I/R组、IF组和Met组四组间小鼠血糖变化无统计学意义（均P<0.05），Met+IF联合组小鼠随机血糖水平低于假手术组、I/R组、IF组和Met组（均P<0.05）；假手术组、I/R组、IF组、Met组、IF+Met组中GRP78/β-actin分别为0.48±0.05、1.35±0.10、0.94±0.05、0.70±0.14、0.41±0.37，CHOP/β-actin分别为0.27±0.04、1.03±0.03、0.72±0.04、0.63±0.04、0.44±0.01，Caspase-3/β-actin分别为0.51±0.04、1.04±0.04、0.83±0.03、0.76±0.03、0.63±0.05，Cleaved-Caspase-3/β-actin分别为0.17±0.06、1.01±0.20、0.75±0.06、0.51±0.12、0.29±0.08，差异均有统计学意义（均P<0.001）。假手术组、I/R组、IF组、Met组、IF+Met组海马区免疫组化中GRP78阳性细胞计数分别为53±5、192±11、162±12、140±10、114±13，CHOP阳性细胞计数分别为35±4、177±12、120±12、100±7、69±10，差异均有统计学意义（均P<0.001）；假手术组、I/R组、IF组、Met组、IF+Met组脑梗死相对体积分别为0、0.333±0.046、0.258±0.023、0.116±0.039、0.111±0.039，差异有统计学意义（均P<0.001）。结论二甲双胍联合间歇性禁食可以减轻小鼠脑缺血再灌注后内质网应激，联合组效果更好。

简介：摘要目的探讨内质网应激通过ATG5介导的自噬通路调控结直肠癌细胞增殖及其潜在机制。方法通过生物信息学方法分析PERK、ATF6和ATG5在结直肠癌组织和癌旁组织中的表达及PERK和ATG5表达的相关性。使用qRT-PCR法检测PERK在结直肠癌细胞中的表达水平，CCK-8法检测细胞增殖，Transwell法检测细胞侵袭能力，Western blot法检测蛋白表达水平，透射电镜检测细胞自噬。结果PERK和ATF6在结直肠癌组织高表达，且PERK在结直肠癌细胞中高表达，结直肠癌细胞株HCT116、SW480、HT29、LoVo和正常结肠FHC细胞株中PERK的表达水平分别为（1.51±0.04）、（3.12±0.05）、（2.19±0.04）、（2.38±0.06）和（0.98±0.04）（P<0.001）。过表达PERK促进结直肠癌细胞增殖和侵袭。PERK和ATG5表达呈正相关（r=0.52，P<0.001），过表达PERK促进ATG5蛋白表达（1.00±0.04）、（3.53±0.07）（t=74.62，P<0.001）。ATG5在结直肠癌组织中高表达，过表达ATG5可促进结直肠癌细胞增殖，侵袭和细胞自噬[空白对照组、阴性对照组、ATG5过表达组中自噬小体数量分别为（4.33±1.53）、（4.00±1.00）、（9.67±2.52）（t=3.14、3.62，P=0.035、0.022）]，且ATG5通过自噬通路促进结直肠癌细胞增殖和侵袭。结论内质网应激的结直肠癌细胞可通过ATG5介导的自噬通路促进结直肠癌细胞增殖和侵袭。

简介：摘要目的评价血红素氧合酶-1(HO-1)在LPS致大鼠肺泡巨噬细胞凋亡中的内源性保护作用及其与内质网应激的关系。方法大鼠肺泡巨噬细胞NR8383，采用随机数字表法分为4组(n＝32)：对照组(C组)、LPS组(L组)、Con siRNA组和HO-1 siRNA组。C组常规培养，余3组向培养基加入10 μg/ml LPS。Con siRNA组和HO-1 siRNA组于LPS加入前48 h时分别行Con siRNA和HO-1 siRNA转染。LPS处理24 h时采用MTT法测定细胞活力，流式细胞术测定细胞凋亡率，Western blot法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、激酶受体样内质网激酶(p-PERK)、增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、磷酸化的Ⅰ型内质网跨膜蛋白激酶(p-IRE-1)、磷酸化的应激活化蛋白激酶(p-JNK)和半胱氨酸天冬氨酸-12(caspase-12)表达。结果与C组比较，余3组细胞活力降低，细胞凋亡率升高，HO-1、GRP78、CHOP、p-PERK、p-IRE-1、p-JNK和caspase-12表达上调(P<0.05)；与L组比较，HO-1 siRNA组细胞活力降低，细胞凋亡率升高，HO-1表达下调，GRP78、CHOP、p-PERK、p-IRE-1、p-JNK和caspase-12表达上调(P<0.05)，Con siRNA组各指标差异无统计学意义(P>0.05)；与Con siRNA组比较，HO-1 siRNA组细胞活力降低，细胞凋亡率升高，HO-1表达下调，GRP78、CHOP、p-PERK、p-IRE-1、p-JNK和caspase-12表达上调(P<0.05)。结论HO-1产生内源性保护作用的机制与抑制内质网应激，减轻LPS诱导大鼠肺泡巨噬细胞凋亡有关。

简介：目的：观察吡格列酮（Pioglitazone）对趋化素诱导成骨细胞代谢过程的影响，探讨吡格列酮改善成骨细胞凋亡的信号转导机制。方法将成骨细胞随机分组，选取适宜浓度的趋化素（Chemerin）进行诱导后，加入吡格列酮，观察成骨细胞活力变化。ELISA法检测细胞趋化蛋白1（MCP-1）、E选择素（E-selection）的影响，采用Westernblot法检测成骨细胞黏附分子1（ICAM=1）、需肌醇跨膜激酶／核酸内切酶1（inositol-requiringtransmembranekinase／endonuclease1，IRE1）、葡萄糖调节蛋白78（Glucose-regulatedprotein78，GRP78）的表达变化，探究内质网应激反应在此过程中作用。结果MTT法检测提示加入Pioglitazone后对成骨细胞活力未见明显影响；与对照组相比，成骨细胞ICAM-1、MCP-1、E-selection、IRE1、GRP78、在Chemerin组的指标较高（P＜0.05），而Pioglitazone呈浓度依赖性地抑制Chemerin所诱导的上述效应，差异具有统计学意义（P＜0005），当吡格列酮浓度为20μmol／L时效果最显著。结论内质网应激可能参与趋化素诱导成骨细胞代谢中的细胞凋亡过程，吡格列酮可抑制趋化素的作用，对成骨细胞具有保护功能，其机制可能与抑制内质网应激反应相关。

简介：摘要目的探讨内质网应激通过抑制JNK-c-Jun通路诱导人乳腺癌细胞自噬和凋亡的机制。方法将不同浓度衣霉素不同时间作用于人乳腺癌细胞，确定最佳作用浓度。细胞分组为内质网激活组、内质网激活＋SP600125(JNK抑制剂)组、对照组(未做任何处理的常规培养细胞)。使用四甲基偶氮唑蓝法、单丹磺酰尸胺法和流式细胞术分别检测细胞存活、自噬、凋亡；用Western blot分析内质网应激相关蛋白GRP78、CHOP，JNK-c-Jun信号通路相关蛋白JNK、c-Jun，自噬相关蛋白Beclin1，及凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3、Caspase-12的表达水平。结果衣霉素对人乳腺癌细胞的最佳作用浓度为100 ng/ml，作用时间为72 h。在此作用条件下，内质网激活相关因子GRP78和CHOP的表达水平较处理前增加(P均<0.05)。与内质网激活＋SP600125组和对照组比较，内质网激活组JNK和c-Jun表达水平均上升(P均<0.05)。对照组与内质网激活＋SP600125组比较，内质网激活组细胞生长活性明显受到抑制，MDC荧光强度值及细胞凋亡率均增加(P均<0.05)。同时，与内质网激活＋SP600125组和对照组比较，内质网激活组中凋亡关键因子Bax、Caspase-3、Caspase-12被激活表达水平均升高(P均<0.05)。结论内质网应激可能通过激活JNK-c-Jun信号通路，降低乳腺癌细胞存活率，进而诱导乳腺癌细胞自噬并促进细胞凋亡。

简介：摘要目的探讨6-甲酰基吲哚并[3，2-b]咔唑（FICZ）对脂多糖（LPS）诱导小鼠急性肺损伤（ALI）的作用及机制。方法采用简单随机抽样方法将8～12周龄雄性C57BL/6J小鼠分为4组，每组8只。以腹腔注射LPS 5 mg/kg制备脓毒症致ALI小鼠模型（LPS组）；磷酸盐缓冲液（PBS）对照组（PBS组）注射等体积PBS。LPS+FICZ组制模后1 h腹腔注射FICZ 1 μg进行干预，而FICZ对照组（FICZ组）腹腔注射PBS后1 h给予等量FICZ。制模后24 h取血清及肺组织，经苏木素-伊红（HE）染色、肺组织湿/干重（W/D）比值分析肺组织病理改变；用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清及肺组织中炎性因子表达；实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测内质网应激信号通路相关分子的表达水平。结果与PBS组比较，LPS组肺组织炎性细胞浸润增加，可见肺泡萎陷及明显的肺泡内渗出性病变，肺组织W/D比值显著升高，血清白细胞介素-6（IL-6）水平、肺组织IL-6 mRNA表达和内质网应激信号通路葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的mRNA表达以及肺组织GRP78、PERK、活化转录因子6（ATF6）、CHOP的蛋白表达水平均明显升高；而FICZ组各指标则不受影响。与LPS组比较，LPS+FICZ组肺组织炎性细胞浸润较少，肺泡结构相对完整，肺组织W/D比值显著下降（5.38±0.10比6.60±0.30，P<0.01），血清IL-6水平（ng/L：15.55±3.77比32.22±3.84）和肺组织IL-6 mRNA表达（2-ΔΔCt：0.79±0.21比6.89±0.92）显著降低（均P<0.01），内质网应激信号通路GRP78、PERK、CHOP的mRNA表达显著降低〔GRP78 mRNA（2-ΔΔCt）：1.90±0.16比7.55±1.29，PERK mRNA（2-ΔΔCt）：1.68±0.20比4.54±0.89，CHOP mRNA（2-ΔΔCt）：1.13±0.24比4.44±1.13，均P<0.05〕，GRP78、PERK、ATF6、CHOP的蛋白表达水平也显著降低（GRP78/GAPDH：0.59±0.02比0.77±0.01，PERK/GAPDH：0.48±0.03比1.04±0.05，ATF6/GAPDH：0.51±0.03比0.65±0.01，CHOP/GAPDH：0.91±0.05比1.11±0.07，均P<0.05）。结论FICZ对LPS诱导的小鼠ALI具有保护作用，其机制与抑制内质网应激、下调血清和肺组织IL-6水平有关。

简介：背景:椎间盘退变是下腰痛的主要诱因,髓核细胞的凋亡是椎间盘退变的重要危险因素。然而,椎间盘退变引起下腰痛的具体分子机制目前尚不明确。目的:探讨内质网应激是否参与高糖诱导兔髓核细胞凋亡的过程。方法:将第3代兔髓核细胞随机分为空白对照组(正常培养液);高糖组(培养基中葡萄糖浓度为100mmol/L);抑制剂组(培养基中含有Caspase-12抑制剂Z-ATAD-FMK);抑制剂+高糖组(培养基中含有Z-ATAD-FMK及100mmol/L的葡萄糖)。分别处理6h后,检测各组细胞的增殖活性、凋亡率、活性氧自由基、Caspase-12和葡萄糖调节蛋白78的变化情况。结果与结论:①高糖组细胞增殖明显抑制,活性氧自由基、凋亡率、Caspase-12和葡萄糖调节蛋白78表达量较对照组明显增加;②Z-ATAD-FMK可以降低高糖诱导的细胞凋亡率以及Caspase-12和葡萄糖调节蛋白78表达的增加;③结果表明,内质网凋亡通路参与了高糖诱导兔髓核细胞的凋亡过程;高糖诱导的活性氧自由基过量产生及积累是引起内质网应激的主要因素。

简介：摘要目的探讨内质网应激（ERS）在二氧化硅（SiO2）诱导的RAW264.7细胞自噬中的作用及对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）分泌的影响。方法以200 μg/ml SiO2刺激的RAW264.7细胞为体外细胞模型，以SiO2不同处理时间分组，包括0 h组（对照组）、6、12、24和48 h组，通过吖啶橙及单丹（磺）酰戊二胺荧光（MDC）染色检测细胞自噬小体的形成。应用实时聚合酶链反应（实时PCR）检测自噬相关分子Beclin1 mRNA表达，蛋白免疫印迹（western blotting）检测自噬相关蛋白LC3Ⅰ、LC3Ⅱ与Beclin1的表达；应用实时PCR和western blotting检测ERS特异标记分子BiP的表达；酶联免疫吸附法（ELISA）检测RAW 264.7细胞转化生长因子-β1（TGF-β1）和TNF-α的分泌。以ERS抑制剂4-PBA进行干预试验，包括空白对照组、SiO2组、1 μmol/L 4-PBA+SiO2组、10 μmol/L 4-PBA+SiO2组、20 μmol/L 4-PBA+SiO2组，检测各组LC3Ⅰ、LC3Ⅱ与Beclin1蛋白的表达及TGF-β1、TNF-α的分泌变化。结果与对照组比较，SiO2诱导RAW264.7细胞各时间组荧光强度均明显增强，差异均有统计学意义（P<0.05）；与对照组比较，SiO2诱导RAW264.7细胞各时间组的Beclin1 mRNA表达均明显增加，LC3Ⅰ、LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表达均明显增加，差异均有统计学意义（P<0.05）；与对照组比较，SiO2诱导RAW264.7细胞6、12、24 h组BiP mRNA和蛋白表达均明显增加，6 h达高峰，差异均有统计学意义（P<0.05）；与SiO2组比较，随着4-PBA浓度增加，RAW264.7细胞的LC3-II和Beclin 1蛋白水平逐渐下调，差异均有统计学意义（P<0.05）；与SiO2组比较，1、10、20 μmol/L 4-PBA+SiO2组RAW264.7细胞TNF-α分泌水平明显下降，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论SiO2诱导的ERS可能参与了RAW264.7细胞自噬以及TNF-α的分泌过程。

简介：摘要目的观察小檗碱(BBR)对2型糖尿病大鼠局部脑缺血再灌注损伤半影区内质网应激相关炎症通路的影响。方法72只健康雄性Sprague-Dawley大鼠，采用高脂饮食和链尿佐菌素注射建立2型糖尿病大鼠模型，数字抽签随机将糖尿病大鼠分为假手术组(Sham组)、糖尿病大鼠＋BBR治疗组(BBR组)、糖尿病大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型组(MCAO组)、糖尿病大鼠MCAO＋BBR治疗组(MCAO＋BBR组)，纳入研究每组6只。治疗组在术前48 h、24 h和术后6 h经胃灌注给予相应剂量药物。采用线拴法制备大鼠MCAO模型，进行神经缺损评分，酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β的表达；实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测内质网应激标志蛋白葡萄糖调控蛋白78(GRP78)的mRNA表达；蛋白质印迹法(Western blot)检测内质网应激相关炎症通路蛋白GRP78、胰腺内质网激酶(PERK)、磷酸化PERK(p-PERK)、核因子(NF)-κB p65表达情况。结果在脑缺血半影区，缺血2 h再灌注24 h后，MCAO组大鼠神经功能缺损评分(2.83±0.41)分，高于MCAO＋BBR组大鼠(1.67±0.52)分(P<0.05)，促炎因子TNF-α和IL-1β和内质网应激相关炎症通路蛋白GRP78、PERK和NF-κB p65的表达水平亦增高(P<0.05)。BBR治疗亦可降低脑缺血再灌注半影区促炎因子(TNF-α和IL-1β)和内质网应激相关炎症通路蛋白(GRP78、PERK和NF-κB p65)的表达水平。结论BBR可通过抑制内质网应激相关炎症通路降低2型糖尿病大鼠局部脑缺血再灌注损伤的炎症反应，发挥神经保护作用。

简介：摘要目的通过观察脂多糖(LPS)诱导的Toll样受体4(TLR4)对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块内质网应激通路蛋白表达水平的影响，探讨内质网应激对小鼠动脉粥样硬化斑块稳定性的影响。方法2015年10月至2016年2月选择ApoE-/-小鼠24只，高脂喂养10周后数字抽签随机分为对照组、LPS组、TLR4的特异性抑制剂TAK(TAK组)，各8只。干预10周后取眼球血检测总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)。处死小鼠留取颈动脉和主动脉标本。免疫组化法检测颈动脉斑块巨噬细胞(MOMA-2)、平滑肌肌动蛋白(α-actin)、TLR4、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNFα)及κ基因结合核因子(NFκB)的表达。免疫印迹法检测PKR样真核起始因子2α激酶(PERK)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、糖调节蛋白78(GRP78)的水平。结果LPS组小鼠与对照组和TAK组小鼠比较，TC(25.0±2.3)mmol/L比(20.2±1.6)mmol/L、(20.8±2.6)mmol/L、TG(1.3±0.1)mmol/L比(1.3±0.1)mmol/L、(1.0±0.1)mmol/L、ox-LDL(17.4±1.3)mmol/L比(15.8±1.6)mmol/L、(12.1±1.1)mmol/L水平升高(P<0.05)；斑块形态学及病理学比较，LPS组小鼠动脉粥样硬化斑块范围大，巨噬细胞含量增多(P<0.05)，平滑肌细胞含量减少(P<0.05)，斑块TLR4、IL-1β、IL-6、TNFα及NFκB的表达水平较其他两组增加(P<0.05)；PERK、CHOP、GRP78的表达水平增加(P<0.05)。与对照组比较，TAK组PERK、CHOP、GRP78的表达水平减少(P<0.05)。LPS组TLR4，质网应激通路蛋白PERK、CHOP、GRP78的表达水平增加。结论LPS诱导的TLR4可上调内质网应激通路蛋白的表达，且引起内质网应激下游炎性细胞因子分泌增加，加重脂质代谢紊乱，增加动脉硬化斑块的不稳定性。

简介：目的:观察温阳通脉方含药血清是否在内质网应激相关通路对心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用,并探究体外培养时最佳给药剂量。方法:以20%含药血清处理,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测得CoCl2烫最佳浓度和各组细胞存活率;比色法检测各组半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)酶活性和上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;Hoechst33342荧光染色观察各组细胞凋亡形态变化;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;WesternBlot法检测各组内质网应激相关蛋白GRP78、Caspase12、CHOP表达以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达情况。结果:与空白对照组血清相比,模型组细胞活性明显降低,Caspase3酶活性和LDH活性明显升高,细胞凋亡数量明显增多,凋亡率明显升高,GRP78、Caspase12、CHOP和Bax表达明显增多,Bcl-2表达明显减少;与模型组相比,3.24、6.48、12.96g/kg组含药血清能够不同程度改善细胞活性,Caspase3酶活性和LDH活性明显减少,凋亡率不同程度降低,GRP78、Caspase12、CHOP和Bax表达明显减少,Bcl-2表达不同程度增多。结论:温阳通脉方能减轻缺氧/复氧后H9C2心肌细胞损伤,其机制可能与温阳通脉方抵抗内质网应激介导的细胞凋亡有关,其抗凋亡程度呈剂量依赖性,以温阳通脉方12.96g/kg组效果最佳。

简介：目的：探讨针刺对STZ糖尿病大鼠胰腺组织内质网应激IRE1-CHOP信号通路及相关凋亡基因的影响。方法：SD大鼠80只，选取10只用普通饲料喂养作为空白对照组，其余70只用高脂高糖饲料喂养和腹腔注射小剂量STZ制作糖尿病模型。造模成功30只，随机分为针刺治疗组模型对照组、和西药组（二甲双胍），每组10只。治疗4周，测大鼠的RBG，胰腺组织CHOP、IRE1、Bax、Bcl-2蛋白和mRNA表达。结果：与治疗前比较，针刺组和西药组RBG均明显降低（P〈0．05），模型组和空白组RBG变化的差异无统计学意义（P〉0．05）；模型组胰腺CHOP、IRE1、Bax蛋白表达显著高于空白组（P〈0．05），针刺组和西药组显著低于模型组（P〈0．05）；模型组胰腺CHOP、IREl、BaxmRNA表达显著高于空白组（P〈0．01），针刺组和西药组显著低于模型组（P〈0．01）；模型组Bcl-2蛋白表达显著低于空白组（P〈O．05），针刺组和西药组显著高于模型组（P〈0．01），针刺组与西药组之间差异无统计学意义（P〉0．05）；模型组Bcl-2mRNA表达显著低于空白组（P〈0．01），针刺组和西药组显著高于模型组（P〈0．01），针刺组与西药组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：STZ糖尿痛大鼠胰腺组织存在内质网应激，IRE1-CHOP信号通路是抑制胰腺内质网应激的主要通路，针刺可以通过IRE1-CHOP信号通路改善胰腺组织内质网应激，抑制凋亡基因，保护胰腺组织。

简介：摘要目的探讨梓醇对非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)治疗及降脂机制。方法高脂饮食喂养ICR小鼠8周以建立NAFLD体内模型，给予低剂量(50 mg/kg)、中剂量(150 mg/kg)、高剂量(300 mg/kg)剂量梓醇干预，分析小鼠体重、肝湿重、肝指数及生化指标。游离脂肪酸诱导人肝细胞LO2建立NAFLD细胞模型。实时荧光定量PCR检测脂肪酸合成相关基因水平。Western印迹法检测内质网应激(ERS)介导的蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)-真核翻译起始因子2α(eIF2α)信号通路蛋白水平。结果与模型小鼠相比，低剂量、中剂量、高剂量梓醇组小鼠体重[(39.43±1.84)g，(34.01±1.83)g，(32.28±1.11)g对(42.17±1.37)g，均P<0.001]、肝湿重[(1.03±0.06)g，(0.79±0.05)g，(0.64±0.04)g对(1.30±0.13)g, P<0.01或P<0.001]、肝指数[(2.60±0.09)%，(2.32±0.09)%，(1.99±0.11)%对(3.07±0.30)%, P<0.05或P<0.001]降低。中、高剂量梓醇组模型小鼠总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、天冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶降低(P<0.01或P<0.001)，高密度脂蛋白胆固醇升高(P<0.01或P<0.001)。细胞模型中，脂肪酸合成基因及PERK-eIF2α通路蛋白水平的升高均被梓醇显著削弱(P<0.05)，且这种削弱作用被信号通路激动剂逆转(P<0.05)。结论中药梓醇可能通过调控ERS介导的PERK-eIF2α信号通路发挥改善NAFLD的作用。