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255 个结果
  • 简介:用限制性内切酶XbaⅠ和SacⅠ从克隆载体pUCm-ACO上切下约1.2kb香蕉ACO基因,将其定向连接在经相同酶切质粒载体pBI-121上,构建成植物表达载体pBI-aACO。在此基础上用EcoRⅠ和HindⅢ从在pBI-aACO上切下大小约2.3kb目的基因35Sp-aACO-NOSt,将其连接在质粒载体pCAMBI-A2301载体上,构建成香蕉ACO反义基因植物表达载体pCB-aACO。采用直接转化法将pCB-aACO导入根癌农杆菌菌株EHA105,采用该菌株转化普通烟草。在Kanamycin选择压力下获得烟草转化不定芽和完整植株,经过GUS组织化学法检测、以及PCR和RT-PCR方法鉴定,验证了该植物表达载体报告基因,选择基因和目的基因都得到了表达,证明该植物表达载体构建成功。此项研究为下一阶段用该反义基因转化香蕉品种以改良香蕉果实耐贮运性打下基础。

  • 标签: 香蕉 ACO 植物表达载体 遗传转化
  • 简介:为了研究M9矮化砧和八棱海棠砧YUCCA10a基因结构特征及其嫁接树体表达特征,从M9矮化砧和八棱海棠砧中克隆了YUCCA10a基因,并对该基因进行了序列分析以及不同时期2种砧木嫁接“烟富3”定量表达分析。通过分析表明,该基因编码序列为1149bp,推导编码382个氨基酸,预测蛋白质分子量为94285.29Da,理论等电点为5.08。实时荧光定量PCR结果表明,5月和10月份M9矮化砧嫁接“烟富3”中YUCCA10a基因相对表达量明显低于八棱海棠砧,2种砧木嫁接“烟富3”中YUCCA10a基因在10月份相对表达量略高于5月份。本试验结果为研究M9矮化砧和八棱海棠砧YUCCA10a基因结构特征和砧木对嫁接“烟富3”影响机理方面提供理论依据。

  • 标签: YUCCA10a 苹果砧木 克隆 定量表达
  • 简介:自交不亲和性是一种普遍存在于显花植物中生殖隔离现象,可以抑制近亲繁殖而促成异交。由S-核酸酶介导植物配子体自交不亲和机制类型花柱S决定子基因编码S-核酸酶进入花粉管,异花授粉下则会被花粉SCF复合体所标记泛素后被26S蛋白酶体分解,从而发生异交亲和;然而自花授粉过程中,自我花粉SCF复合体不会泛素标记花柱S基因编码S-RNase,从而拥有活力,分解花粉管中RNA导致花粉管生长发生障碍,进而蛋白质合成受阻,引起自交不亲和。Cullin1是SCF复合体中一个基因,在SCF复合体SKPl-Cullin1-Rbx1-F-box晶体结构当中充当重要角色,该综述将主要介绍并讨论基于S-核酸酶自交不亲和Cullin1基因研究进展。

  • 标签: 自交不亲和性 SCF复合体 Cullin1基因 泛素
  • 简介:腐霉根腐病严重影响着大豆种子发芽和植株生长,谷胱甘肽转移酶是植物与生物胁迫和非生物胁迫相互作用主要酶,在失活有毒化合物,保护植物细胞免受氧化损伤等方面扮演着十分重要角色。本研究从腐霉菌侵染抗病大豆灰不支黑豆中分离出GmGST26基因,采用生物信息学方法对大豆GmGST26序列特征、结构、大豆GmGST家族基因进化关系及表达数据进行分析;利用荧光定量PCR技术和DGE表达谱数据分别对GmGST26基因在不同抗病品种中表达特点及在抗病大豆互作过程中表达模式进行分析。研究结果表明,腐霉菌侵染大豆后GmGST26基因上调表达,GmGST26编码225个氨基酸,等电点为6.92,具有明显GSTs蛋白典型结构域,属于GSTs家族中Tau亚家族,与GmGST7相似性为98.22%,属旁系同源基因。组织特异性表达分析,主要在根部表达,其次为花,该基因在腐霉菌、疫霉菌与大豆互作过程中表达模式为应激反应上调基因,且防卫反应负调控。

  • 标签: 大豆 谷胱甘肽转移酶 分子特征 表达模式
  • 简介:通过正交试验建立芦笋ISSR优化反应体系,并对其反应程序进行优化。实验结果表明,优化扩增体系:25μL反应体系中含150ng模板DNA、0.3μmol/L引物、15μL2×Mastermix;优化反应程序:94℃预变性5min;94℃变性45s,设定温度退火60s,72℃延伸45s,循环30次;然后72℃延伸10min,4℃保存;筛选到了21条引物并确定其最优退火温度。实验结果为芦笋资源遗传多样性评价研究奠定基础。

  • 标签: 芦笋 ISSR 体系优化
  • 简介:本文主要介绍在非生物胁迫下,植物体内形成适应分子机制:一是代谢调整,植物抗氧化系统建立:二是植物细胞体内平衡体系重建,包括渗透保护剂合成,离子、水分平衡体系构建。

  • 标签: 非生物胁迫 分子机制 抗氧化系统 平衡体系
  • 简介:由植物病毒侵染而引起作物减产是农业生产中一个持久性问题,为了最大限度地减少病毒造成损害,确保农业可持续发展,探寻快速而精准检测方法对控制这些植物病毒至关重要。随着贸易全球化发展,加剧了病毒及其宿主和载体转移,这使得植物病毒检测技术变得更加重要。近年来,植物病毒检测技术发展很快,多种多样。本研究主要综述了一些植物病毒检测方法原理和特点,以及在植物病毒检测和诊断中应用,包括生物学方法、血清学方法、电镜观察方法以及分子生物学方法中核酸分子杂交技术、双链RNA电泳技术、聚合酶链式反应技术(PCR,RT-PCR,实时荧光定量PCR,多重PCR,巢式PCR)、核酸序列扩增技术、环介导等温扩增技术等。

  • 标签: 植物病毒 检测技术 核酸 方法
  • 简介:本文以草莓为研究试材,对草莓原生质体分离过程中若干影响因子如分离材料、酶液组成、酶解方式及时间、纯化时离心力及离心时间进行了比较分析,以探讨草莓原生体分离最佳条件,为草莓原生质体培养和融合等研究提供大量优质原生质体。结果表明:继代5d草莓悬浮细胞系是原生质体分离最佳材料,其次是愈伤组织,而从组培苗叶片分离原生质体产量和活力最低。以悬浮细胞系为分离材料酶液组成为CPW13%甘露醇+0.5%PVP+0.1%MES+0.5%~1.0%CellulaseOnozukaR-10+0.5%MacerozymeR-10+0.05%PectolyaseY-23;以组培苗叶片及胚性愈伤组织为分离材料酶液组成为CPW13%甘露醇+0.5%PVP+0.1%MES+1.0%CellulaseOnozukaR-10+1.0%MacerozymeR-10+0.1%Pec-tolyaseY-23。分离草莓悬浮细胞系原生质体宜采用低速(30r/min)恒温(27±1)℃摇床振荡酶解,时间为12h。纯化时,适当提高离心力短时间离心有利于原生质体纯化过程中产量和活力保持,以80×g离心6~8min,效果为好。

  • 标签: 草莓 悬浮细胞系 原生质体 原生质体分离
  • 简介:本研究建立了农杆菌介导玉米合子转化方法。用农杆菌介导合子转化方法,以含有bar基因标准双元载体PTF102和含有bar基因和双价抗虫基因Cry1A(a)或Cry1A(c)、PTA(半夏凝集素)载体p3300-Bt-pta转化玉米自交系吉8902、丹340、吉4112、吉853、铁7922及PA91,直接从受体植株得到转化种子,用除草剂PPT筛选和PCR鉴定,获得转基因植株及后代。实验分析了2002年、2003年和2004年3批转化操作结实率、转化率及转基因遗传情况:经农杆菌侵染雌穗平均结实率为39%,合子转化频率达1%以上,转基因可以遗传下去。农杆菌介导玉米合子转化方法可以重复获得成功,表明我们成功建立起一个新不依赖组织培养玉米转基因技术体系。

  • 标签: 玉米 合子 农杆菌介导法 基因转化
  • 简介:近年来,人们对蔬菜、水果和农作物品质要求不断提高,而品质性状多为多基因或寡基因控制数量性状或数量-质量性状,其表型易受到环境影响。一些品质基因常表现隐性且品质检测操作复杂,制约了品质育种发展。随着分子标记技术发展,寻找与优良品质性状紧密连锁分子标记,并用以进行标记辅助选择育种,将大大提高品质性状选择效率和遗传改良速度,分子标记、分子标记辅助育种和转基因技术将为改善作物品质提供有效手段。总体来说,作物品质在分子水平上研究尚处于起步阶段,但取得了一些令人鼓舞成果,本文对小麦、水稻、黄瓜、番茄、西瓜等作物外观品质、营养品质和风味品质在分子水平上研究进展进行了综述,并探讨转基因技术和分子标记辅助育种在改善作物品质性状方面的前景。

  • 标签: 作物 品质性状 遗传改良
  • 简介:普通洋葱(AlliumcepaL.)是一种开放授粉重要蔬菜作物,在洋葱品种纯度鉴定中因其亲本保有一定程度异质性,所以杂交种纯度百分率难以确定。为了有效地控制杂交种纯度质量,本研究从收集于各文献89对引物中筛选出了12对具有多态性引物,利用筛选出12对SSR引物对39份洋葱种质进行分析,检测到47条多态性带,平均有效等位基因数为7.25。可变类平均法(Flexiblegrouplinkage)聚类分析表明,SSR标记可将39份洋葱划分为三大类,聚类分析结果与洋葱自然属性是相符合。同时发现这些标记在常规品种、亲本自交系内,甚至在杂种一代中都显示出很高遗传异质性。为了促进和提升繁育品种质量鉴定准确性,本研究所提出SSR分子标记辅助育种方案,可通过选定SSR位点纯和原种田,制出杂交种。该方案能在选育几个SSR位点检测出准确杂交率,还可以有效地监测洋葱F1代杂交种纯度质量,并且这个方案可以用于任何表现出严重近交衰退异花授粉作物SSR标记分子纯度鉴定,为促进和提升繁育品种质量鉴定准确性提供帮助。

  • 标签: 洋葱 SSR标记 遗传多样性 种内异质性 纯度鉴定
  • 简介:本研究采用福林-酚法测定7种油茶饼提取物中总多酚含量,并用高效液相色谱法(HPLC)对其多酚类物质成分进行鉴定和定量分析,同时应用DPPH自由基清除法、ABTS自由基清除法、羟基自由基(OH·)清除法和FRAP法测定油茶饼提取物抗氧化能力。结果表明,7种油茶饼中海南(炒)(6.10mg/g)总多酚含量显著高于江西(蒸)(2.66mg/g),且在所有样品中共鉴定出6个多酚组分,分别为没食子酸、儿茶素、表儿茶素、槲皮素、3,4-二羟基苯乙酸和山茶甙,其中海南(炒)油茶饼山茶甙含量为18.444mg/g,是广西(蒸)中山茶甙含量18倍,是广西(炒)15倍;此外,海南(炒)中槲皮素含量是江西(蒸)中槲皮素含量50倍,差异十分显著。7种油茶饼提取物均具有明显抗氧化活性,且在一定范围内呈量效关系。因此,油茶饼有望作为一种潜在天然抗氧化剂应用于食品、保健品、医药品及化妆品中,具有较高开发利用价值。

  • 标签: 油茶饼 福林-酚法 高效液相色谱法 总多酚 抗氧化活性
  • 简介:基于转基因作物安全性考虑,在用于转化表达载体上除了含有目的基因以及控制该目的基因表达启动子和终止子外,最好不存在其它有可能存在安全性争议DNA序列,由此培育转基因植物可能将更易于被消费者所接受。本研究以pCAMBIA1300载体为基础,基因操作去除pCAMBIA1300质粒上潮霉素抗性基因和花椰菜花叶病毒35S启动子序列,构建了两种只含有水稻蜡质基因启动子引导蜡质基因反义片段表达载体,p13AWY-1和p13AWY-2。其中p13AWY-1表达载体含有一个由水稻蜡质基因启动子、第一内含子、反义蜡质基因(Waxypro+intron1+anti-Waxy)融合基因单元;而p13AWY-2表达载体含有两个正向排列Waxypro+intron1+anti-Waxy融合基因单元。我们通过构建水稻反义蜡质基因安全性表达载体,试图为植物安全性表达载体构建提供一种思路,为今后大规模商业化采用转基因技术改良农作物遗传特性提供安全转基因方法。

  • 标签: 转基因植物 植物表达载体 生物安全性 35S启动子 抗生素标记 水稻
  • 简介:以MS为基本培养基,通过调整激素种类与浓度等培养条件,按正交试验设计原则,建立了百脉根高频再生体系。结果表明MS+2,4-D2.0mg/L+KT2.0mg/L培养基可高效诱导愈伤组织形成,MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L培养基可高效诱导芽分化,MS+NAA0.1mg/L培养基可快速诱导根生成,形成再生植株。通过构建植物表达载体VP60-pBI121,研究了根癌农杆菌介导兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60基因对百脉根遗传转化影响因素,建立了百脉根快速高效遗传转化体系,结果表明,以农杆菌LBA4404为介导菌株、以下胚轴为外植体,预培养3d,在OD600为0.6菌夜中浸染20min,共培养3d,以及300mg/L羧苄青霉素脱菌浓度和50mg/L卡那霉素筛选浓度为最佳转化条件。为利用百脉根生产动物口服型疫苗建立了技术基础。

  • 标签: 百脉根(Lotus comiculatus Linn) 高频再生体系 兔出血症病毒(RHDV) 转化
  • 简介:以阿蒂擎天凤梨乙烯处理和不处理植株为材料建立抑制性差减杂交文库中,筛选到一个被乙烯诱导并与已知植物谷胱甘肽-S-转移酶(GST)同源cDNA片段,通过RACE技术得到该基因全长eDNA序列。序列分析表明,该基因可能属于thioredoxin-1ikesuperfamily和GSTC_familysuperfamily两个超家族中成员。利用半定量RT—PCR检测该基因表达量在乙烯处理后先会在1h显著升高,然后随时间逐步降低,说明乙烯作为一种逆境胁迫相关激素,可在短时间内诱导凤梨中GST表达。推测其在受到外源乙烯信号诱导后,一方面可能参与了植物体内解毒作用,另一方面可能参与了花青素合成调控和运输。本实验中GST作为观赏凤梨中一个新发现GSTs家族成员,对于研究热带花卉中GSTs家族特点和提高其抗逆性和品质具有重要理论意义和实用价值。

  • 标签: 谷胱甘肽-S-转移酶 阿蒂擎天凤梨 乙烯 表达分析
  • 简介:本研究借助近红外光谱分析技术对100个南方花生区试品种粗脂肪、蛋白质、脂肪酸和氨基酸含量等21个品质性状进行测定,结果表明,供试品种粗脂肪含量平均为51.37%,蛋白质为26.31%,总氨基酸为22.611%,油酸为44.84%,亚油酸为34.05%。主成分分析表明,21个品质性状可综合成3个主成分,分别为蛋白质和氨基酸因子、不饱和脂肪酸因子和粗脂肪因子,反映了原始数据信息量74.47%。聚类分析表明,100个花生品种可划分为4大类,各类别间品质存在不同差异。利用主成分分析和聚类分析进行花生品质综合评价,可避免单一指标的片面性和不稳定性,为花生亲本利用和品质育种提供重要科学依据。

  • 标签: 花生 品质性状 主成分分析 聚类分析
  • 简介:以欧报春(Primulavularis)种子上下胚轴为外植体,通过外植体消毒、丛生芽诱导和增殖、生根、炼苗和移栽等技术研究,筛选出各阶段最佳培养基配方,从而建立欧报春再生体系。结果表明:欧报春种子上胚轴能诱导出不定芽,但下胚轴不能。欧报春上胚轴不定芽诱导最佳培养基为MS+NAA0.4mg/L+6-BA0.6mg/L,诱导率达21.67%;丛生芽增殖最佳培养基为MS+NAA0.6mg/L+6-BA0.5mg/L,诱导率达62.96%;生根最佳培养基为MS培养基,诱导率达95.59%;最佳移栽基质为草炭:珍珠岩=3:1(体积比)混合基质,移栽成活率可达96.67%。

  • 标签: 欧报春 上胚轴 下胚轴 丛生芽 植株再生
  • 简介:鉴于泛素与植物受高温等环境胁迫下产生一些诱导型蛋白降解有关,本研究根据擎天凤梨Ostara早期花器全长cDNA文库,经大规模随机测序及重叠群(contigs)内EST序列拼接,获得了擎天凤梨多聚泛素基因全长cDNA序列(GenBank登录号:GQ890686),序列长1896bp,开放阅读框长1323bp,编码441个蛋白氨基酸残基,蛋白质分子质量为49.3kD,等电点pI为6.59。蛋白二级结构预测显示,该蛋白主要由随机卷曲、延伸链、α螺旋和β-转角组成;系统进化树分析表明与拟南芥推定多聚泛素UBQ10(gi|23397122|gb|AAN31845.1|)亲缘关系最近;经推断它是由5个单体泛素组成多聚泛素。本研究有助于进一步探讨该基因在低温胁迫下反应机理以及如何采用分子调控手段增强擎天凤梨耐低温能力。

  • 标签: 擎天凤梨 泛素 克隆 序列分析
  • 简介:随着全球生物技术快速发展及其在花卉中广泛应用,有关运用转基因技术进行花卉育种报道也越来越多,但是投放到市场上进行商品化生产转基因花卉品种却为数不多。本文在国内外转基因花卉研究综述基础上,对转基因花卉在市场化过程中所遇到问题,如重要商品花卉转化体系不够成熟、外源基因检测比较复杂以及生物安全性等问题进行了论述。为了促进中国转基因花卉产业快速健康地发展,本文认为充分利用中国丰富种质资源,分子育种与传统育种相结合,加强学科沟通和国际交流是中国转基因花卉未来发展方向。

  • 标签: 观赏植物 基因检测 生物安全性 种质资源
  • 简介:本实验在形态学分析基础上,采用5对中国传统菊花芽变品种和2组形态相似品种,运用随机扩增DNA多态性(randomamplifiedpolymorphicDNA,RAPD)分子标记方法对其进行了品种鉴定。通过反复试验,建立了稳定RAPD反应体系;从22个20碱基随机引物中筛选出4个高效引物,扩增出13条带,扩增多态性片段多在501~1000bp之间,其中有2个引物(ch1.21和ch1.25)能将试验中7组材料全部清楚地区分开。研究结果表明:4个高效引物RAPD分析能够有效地将选定样本区分开。因此作者提出RAPD分析方法可以应用到菊花芽变及相似品种鉴定中。这就为进一步开发更多RAPD随机引物,开展菊花品种鉴定和保护工作提供了参考资料。

  • 标签: 菊花 芽变 相似品种 RAPD