简介：目的探讨周期性应力下大鼠髓核细胞中Sre蛋白的磷酸化水平及其意义。方法体外培养SI）大鼠髓核细胞，取第2代细胞按1x105／mL的密度接种于玻片上。将玻片随机分成4组（n=8）：对照组、加压0．5h组、加压1．0h组、加压2．0h组。加压0．5h组、加压1．0h组、加压2．0h组细胞以0—200kPa的压力、0．1Hz的频率分别加压0．5、1．0、2．0h，对照组在无压力环境下培养。应刖Westernblot检测各组磷酸化Src（pSrc）蛋白的表达。应用PP2[4-氨基-5-（4。氯苯）-7．（t-丁基）吡畔啉酮（3，4-d）嘧啶]抑制Src蛋白，另取细胞玻片，随机分为3组（n=8）：对照组、加压6h组、PP2＋加压6h组。使用荧光实时定量多聚酶链式反应（RT-PCR）检测3组细胞中Ⅱ型胶原和蛋白多糖的基因表达。结果对照组、加压0．5h组、加压1．0h组及加压2．0h组pSrc／磷酸片油醛脱氧酶灰度比值平均分别为0．244±0．013、0．477±0．044、0．530±0．014、0．700±0．063，4组之问比较差异有统计学意义（P〈0．05），除加压0．5h组与加压1．0h组之问外，其余组别之间两两比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。荧光RT．PCR检测3组Ⅱ型胶原和蛋白多糖的基因表达结果显示：对照组表达量最低（1．00l±0．039、1．004±0．104），加压6h组最高（5．404±0．219、2．127±0．028），PP2＋加压6h组居中（3．038±0．237、1．678±0．125），3组之间两两比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论周期性压力能促进髓核细胞Ⅱ型胶原和蛋rI多糖的分泌，Src蛋白磷酸化在压力传导中起信号传递作用。

简介：背景:骨髓瘤骨病因骨骼疼痛、溶骨性破坏导致患者可能懒动而导致骨质丢失增加、骨病加重。目的:探讨运用液体流动装置模拟人机械运动时产生的流体剪切力在骨髓瘤环境下,瘤细胞(U266细胞)对骨细胞(Y4细胞)、破骨细胞的作用,及其对骨细胞分泌的RANKL表达的影响。方法:①建立液体流动装置,实验组为U266细胞培养液,对照组为Y4标准培养液,每组均设流动和不流动模式;体外细胞传代培养骨髓瘤细胞系U266细胞和小鼠骨细胞系Y4细胞;②再取新的Y4细胞,按实验分组再培养48h,显微镜下观察骨细胞、破骨细胞的形态并计数;③ELISA定量检测RANKL的水平;WesternBlotting检测RANKL蛋白;④建立RANKL+实验样品+标准培养液的体系,取RAW264.7细胞体外培养,用RANKL干预诱导,TRAP染色观察RAW264.7细胞株分化的破骨细胞数量及状态。结果与结论:①与对照组相比,U266细胞培养上清下的Y4细胞计数显著下降,形态变化明显;TRAP阳性细胞数增加和RANKL蛋白表达显著升高(P均<0.05);②动模式较非流量模式,Y4细胞数量明显增多,TRAP阳性细胞数明显减少,骨细胞表达的RANKL蛋白降低(P均<0.05);③结果说明,骨髓瘤细胞可以抑制正常骨细胞的生长和促进RANKL蛋白和破骨细胞的增殖。与静态相比,流体切应力可促进骨细胞的增殖,RANKL蛋白表达受抑制和抑制破骨细胞的增殖。因此,推测机械运动可以防止骨髓瘤骨病进展。