简介:以分离筛选、鉴定的假单胞菌为研究材料,提取假单胞菌的基因组为模板基因.设计引物进行PCR扩增。扩增的条件为94℃预变性4min,98℃变性10S,58℃退火1min,72℃延伸2min,35个循环,72℃复性10min。用试剂盒回收PCR产物,以PGEM—TEasyVector为载体。产生重组质粒,转化到大肠杆菌(E’coli)JM109细胞中,于LB平板上进行蓝白筛选阳性克隆。提取阳性克隆的质粒,电泳筛选滞后质粒,EcoRⅠ酶切验证后进行测序,检测弹性蛋白酶基因在JM109Ecoli细胞中的表达。结果表明:PCR扩增出1,67kh的基因片段。并成功克隆在EcoliJM109细胞中:挑取白斑提取的质粒,检测有滞后质粒,EcoRⅠ酶切检测到3.0kh的载体和1,67kb的基因片段;以滞后质粒为模板再次进行PCR扩增,扩增出1.67kb基因片段。证明该质粒为重组质粒,经上海博亚生物技术公司测序为1.67kh的基因片段。并在EcoliJM109细胞中表达。
简介:目的用单克隆抗体检测类风湿关节炎(RA)和强直性脊柱炎(AS)患者滑液和血浆中基质金属蛋白酶-8(MMP-8)的表达.方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定正常人、RA和AS滑液和血浆中MMP-8的表达.结果①正常人、RA和AS血浆中MMP-8的浓度均为1~23μg/L;②正常人和AS滑液中MMP-8的浓度为10~20μg/L;③RA滑液中MMP-8的浓度为90~2800μg/L.结论①RA患者与正常人和AS患者血浆中MMP-8的浓度差异无显著性.②MMP-8在关节滑液的浓度,RA患者远高于正常人和AS患者.
简介:细胞外基质在肿瘤的浸润与转移中起了关键性的作用。而基质金属蛋白酶和基质金属蛋白酶组织抑制刺与细胞外基质动态平衡的调节有着密切关系。通过测定泌尿系肿瘤中的基质金属蛋白酶和金属蛋白酶组织抑制刑可以对肿瘤的预后有比较客观的评价,同时也为泌尿系肿瘤的治疗提供了新的方法。
简介:摘要半胱氨酸蛋白酶抑制剂C是由有核细胞产生的蛋白酶抑制剂,随着医学上对血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C的深入研究,发现其不仅在肾脏疾病方面有临床价值,而且在肝脏疾病、糖尿病、肿瘤等方面也具有一定的价值.本文旨在研究血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C的测定方法及临床应用。
简介:摘要目的观察耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)脓毒症患者外周血自然杀伤(NK)细胞亚群和功能,探讨基质金属蛋白酶(MMP)对MRSA脓毒症患者NK细胞功能的影响。方法选择2017年1月至2018年6月本科收治的MRSA脓毒症患者21例和健康对照者(NC)11例,分离外周血单个核细胞(PBMC),流式细胞术检测NK细胞亚群比例。通过检测PBMC与靶细胞共培养体系中CD107a、CD69、CD16的表达评估NK细胞功能。分选NK细胞,实时定量PCR法检测MMP mRNA,使用MMP抑制剂刺激NK细胞,检测共培养体系中CD107a变化。组间比较采用成组t检验或配对t检验。结果总NK细胞比例在NC和MRSA脓毒症患者之间的差异无统计学意义(P>0.05),MRSA脓毒症患者CD56brightCD16-NK细胞[(5.36±1.02)% vs (4.30±0.89)%]和CD56-CD16+NK细胞[(24.04±2.92)% vs (9.70±1.54)%]升高(P<0.05),CD56dimCD16+NK细胞(71.22±13.03)% vs (87.64±7.05%)]降低(P<0.01)。NK细胞通过不同受体介导相应靶细胞杀伤后,MRSA脓毒症患者NK细胞中CD107a[(33.55±3.84)% vs (25.34±6.20%)]和CD69[(14.96±1.47%) vs (18.80±1.49)%]比例低于NC(P<0.01),CD16 MFI[(247.1±50.31) vs (189.4±57.54)]高于NC(P<0.01)。MMP-1/2/3/9 mRNA在MRSA脓毒症患者NK细胞中的相对表达量升高(P<0.01)。抑制MRSA脓毒症患者NK细胞MMP使CD107a比例升高[(33.67±8.03%) vs (25.87±6.23)%,P=0.018]。结论MRSA脓毒症患者存在NK细胞亚群失衡和功能衰竭,这可能与MMP诱导的抗体依赖细胞介导的毒性作用降低有关。
简介:基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)是一组依赖锌离子,具有相同功能、结构高度同源的内肽酶的总称,主要功能是降解细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)和基底膜。基质金属蛋白酶抑制剂(tissueinhibitorsofmetalloproteinuses,TIMPs)为MMPs的天然抑制剂,能特异性地与MMPs催化活性中心的锌离子结合,封闭MMPs的活性,进而影响MMPs对细胞外基质和基底膜的降解。大量研究表明,肺部炎症性疾病时MMPs的活性常明显增加。本文就MMPs和TIMPs与肺部炎症性疾病的关系综述如下。
简介:摘要α-1抗胰蛋白酶缺乏症是一种常染色体共显性遗传性疾病,以血液中低水平的α-1抗胰蛋白酶为标志,临床上主要表现为年轻患者的肺气肿和急/慢性肝损伤甚至肝癌等,治疗方法包括对症治疗和α-1抗胰蛋白酶的补充,但无法阻止肝脏纤维化的进展。目前国内已有10余例该疾病的报道,但是对该疾病的认识仍然不足,生物治疗药物空白。现就肝细胞移植治疗该疾病的研究进展进行介绍。
简介:目的观察138例心血管疾病包括:冠心病、急性心肌梗塞、陈旧性心肌梗塞、急性冠状动脉综合征的血清MMP-9测定,并与同年龄的正常人做比较,旨在探讨基质金属蛋白酶-9在心血管疾病中的诊断价值。方法经冠状动脉造影术诊断为冠心病者46例。依据临床表现、心电图、彩色超声多普勒诊断为急性心肌梗塞31例,陈旧性心肌梗塞19例,急性冠状动脉综合征42例,对照组为同期门诊经病史、体检、心电图检查均正常的中老年人,共32例。用ELISA法测定各组血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平,探讨MMP-9在心血管疾病中的诊断价值。结果冠心病组血清MMP-9水平高于正常对照组(P<0.01),急性心肌梗塞组血清MMP-9浓度值明显高于正常对照组(P<0.01)。陈旧性心肌梗塞组与正常对照组差异无显著性(P>0.05)。急性冠状动脉综合征组血清MMP-9浓度值略高于正常对照组(P<0.05)。结论血清MMP-9在冠心病、急性心肌梗塞、急性冠状动脉综合征中异常升高。
简介:研究了木瓜蛋白酶对马肉(半腱肌)pH、色泽、保水性、感官评价等食用品质和MFI值、剪切力、胶原蛋白等理化指标的影响;通过添加不等量的木瓜蛋白酶,马肉的pH下降速度更快;木瓜蛋白酶会使L值和a值降低,对b值的影响不显著(P〉0.05);木瓜蛋白酶对马肉的系水力和蒸煮损失率影响极显著(P〈0.01),当木瓜蛋白酶的添加量在15U/g左右时,系水力较大,蒸煮损失率较小;剪切力值会随着木瓜蛋白酶添加量的不断增加而显著下降(P〈0.01),MFI值会明显升高(P〈0.01);总胶原蛋白含量的变化不显著(P〉0.05),不溶性胶原蛋白含量显著下降(P〈0.01).木瓜蛋白酶对嫩度和咀嚼性的影响极显著(P〈0.01),木瓜蛋白酶的添加量越大,马肉的嫩度和咀嚼性评分值越高,风味的变化不明显,消费者更喜欢嫩度好、易咀嚼的马肉。这说明添加木瓜蛋白酶可以提高马肉的食用品质。