简介：目的：采用一种简单易行的纯化方法获得高纯度α-半乳糖苷酶单克隆抗体。方法：使用重组A蛋白偶联的琼脂糖凝胶捕获和纯化小鼠腹水中的α-半乳糖苷酶单克隆抗体。结果：获得了高纯度、高效价的α-半乳糖苷酶单克隆抗体。结论：应用重组A蛋白偶联的琼脂糖凝胶纯化α-半乳糖苷酶单克隆抗体是一种简单、有效的方法。

简介：将个体DNA提取出来后,按一定方式进行混合,构成混合DNA样品池。这种混合DNA样品可用于病因未明的遗传性及遗传易感性疾病的研究。在研究常染色体隐性遗传性耳聋致病基因时,发现与染色体9q的D9S922和D9S301位点有相关性。此方法比通常的连锁分析法省时省力。在肿瘤相关基因或责任基因的研究、法医学的个体认定、基因突变的检测等方面均显示出实用性,值得推广

简介：位点特异性重组技术是现代生命科学中研究基因敲除与靶向整合的工具.它的应用实现了外源基因可预测、可重复的高效表达;对于利用模型动物进行基因分析更是具有划时代的意义;在转基因植物中的运用价值同样不可忽视.

简介：测定我国小型猪来源的猪内源性反转录病毒(PERV)3"LTR，以便于PERV全基因的克隆和分析。用cDNA末端快速扩增(RACE)技术，从五指山猪外周血淋巴细胞mRNA中扩增到PERV-3"LTR，并克隆入pGEM-Teasy载体，将阳性克隆进行序列测定和同源性分析。测序结果显示该克隆3’端的尾部有一个由12个A组成的poly(A)信号；其R区与PERV-MSL的R区(约64bp)基本一致，同源性分析表明其与PERV-MSL的3"LTR具有81％的序列同源性。说明成功扩增了我国五指山猪来源的PERV-3’LTR，将有利于PERV全基因的克隆。

简介：在真核生物细胞中,许多具有生物活性的多肽和蛋白是在其分泌过程中由前体蛋白经内切蛋白酶切割后激活形成的.弗林蛋白酶(Furin)就是这个内切蛋白酶家族重要成员之一,它可以识别剪切多种蛋白质,如生长医子、血清蛋白、基质金属蛋白酶、受体、病毒囊膜蛋白和细菌外毒素等.近年来Furin得到了迅速而广泛的研究,本文简介了它的表达与加工运输、生物学功能、与病毒侵染的关系,以及它的抑制剂.

简介：目的：克隆并分析抗β淀粉样肽单克隆抗体轻链与重链可变区基因。方法：从分泌抗β淀粉样肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株A8中提取总RNA，根据恒定区序列设计基因特异性引物，通过5’RACE法扩增抗体的轻链和重链可变区基因，测定并分析可变区基因序列，并克隆入pMD18-T载体。结果：重链可变区基因序列全长450bp，编码150个氨基酸残基；轻链可变区基因序列全长429bp，编码143个氨基酸残基。在GeneBank中对氨基酸序列进行比对分析，二者均符合小鼠IgG可变区基因的特征。根据Kabat法则对A8抗体轻链和重链可变区氨基酸序列基因进行分析并确定了3个抗原互补决定区（CDR）、4个框架区（FR）和信号肽。结论：通过5’RACE法得到了抗β淀粉样肽单克隆抗体轻链与重链可变区基因，为进一步研究抗体三维结构，以及对该抗体进行人源化改造奠定了基础。

简介：目的：拼接DNA片段并克隆。方法：用T4DNA连接酶将DNA片段以平末端随机连接,随后用限制性内切酶切割,琼脂糖电泳分离酶切产物,挑选特定片段纯化回收,与线性化的载体质粒连接,转化大肠杆菌感受态细胞。结果：通过以上步骤,成功拼接了不同DNA片段,构建了含有目的拼接片段的重组质粒。结论：该方法简便、易行、可靠,可作为拼接、克隆DNA的备选方案,在分子生物学研究和基因工程中应用。

简介：人表皮生长因子又称尿抑胃素,是存在于人体内的一种重要的多肽生长因子。它是在1975年由Cohen等和Gregory各自独立地从人尿液中分离得到的,并被分别命名为“人表皮生长因子(HumanEpidermalGrowthFactor,hEGF)”和“尿抑胃素(Urogastrone,UG)”。后来的研究证明两者实为同一物质,遂将其名称统一为“人表皮生长因子”。

简介：本文评述了工程抗体酶的研究现状和抗体酶在防化医学研究中的应用。抗体库技术的出现使抗体酶的研究呈现了新的生机。不仅使不具备细胞工程实验条件的实验室能够制备抗体酶,而且实验周期大大缩短,比杂交瘤技术提供多20倍的结合性抗体作为潜在的抗体酶,使抗体酶更易获得。抗体库技术能够容易地评价编码抗体酶的基因,因而可以在分子水平上认识和改造抗体酶。噬菌体抗体库可以不经免疫即可制备抗体的特点,使通过人源性噬菌体抗体库生产的抗体酶能够直接用于临床治疗。随着工程抗体酶研究的不断深入,新颖实用的抗体酶将会被应用于包括军事医学在内的多种领域中。

简介：2005年以来，二代测序平台和测序技术越来越普及，被广泛用于新病毒和未知病原体的发现，从未经培养的复杂样本中筛查病毒类病原体需要更多的前期处理措施。我们围绕高通量测序所涉及到的测序样本预处理方法和扩增方法做简要总结：样品类型分为无菌样本和开放样本；病原体类型包括病毒、细菌、真菌等；背景核酸去除的常用方法包括物理分离、核酸酶消化和几种rRNA去除的方法；常用的微量样本非特异性扩增方法包括随机引物PCR、SISPA技术、锚定随机引物PCR、RCA技术、MDA技术和NASBA技术。

简介：肿瘤是人类死亡的首位病因,研制疫苗防治肿瘤是当前研究的热点领域之一。麻疹病毒的减毒株是一种新型疫苗载体,它可以表达多种肿瘤蛋白,这些肿瘤包括多形性胶质母细胞瘤、多发性骨髓瘤、前列腺癌、肾细胞癌、肝胚细胞瘤、卵巢癌、宫颈癌和乳腺癌等。

简介：考察了不同条件下重组人表皮生长因子(rhEGF)的稳定性.结果表明,不同的保存条件(物理状态、温度、pH、浓度等)对rhEGF的稳定性有显著影响,使用适当的添加剂(保护剂、抗氧剂、抑菌等)可以提高rhEGF的稳定性.上述结果为rhEGF的制剂学研究提供了依据.

简介：目的：在大肠杆菌中表达大鼠脊髓损伤与修复蛋白39（SCIRR39）的C端抗原表位，并制备其多克隆抗体。方法：从大鼠脊髓全横断损伤脊髓cDNA中扩增1386bp的Scirr39基因编码框，亚克隆该基因编码蛋白C端359～461位氨基酸残基的DNA片段，插入表达载体，转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达，SDS-PAGE分析表达情况，切胶纯化目的蛋白；利用多克隆抗体制备技术，制备重组SCIRR39蛋白的多克隆抗体；用ELISA方法检测抗体效价，Western印迹检测抗体的特异性。结果：SCIRR39蛋白C端抗原表位与GST的融合蛋白在大肠杆菌中以可溶形式高表达，相对分子质量为37．9×103；获得抗SCIRR39蛋白C端抗原表位的兔抗血清，其效价达到1：104；Western印迹显示多克隆抗体能特异识别重组SCIRR39蛋白的C端抗原表位。结论：在原核系统中表达纯化了重组SCIRR39抗原表位蛋白，制备的重组蛋白多克隆抗体将用于检测SCIRR39在脊髓损伤过程中的表达变化。

简介：白细胞介素4(IL-4)是一种由TH2细胞分泌的具有多种生物学活性的细胞因子,是机体免疫系统的重要成员,在参与机体免疫调节方面有重要作用。据文献报道,IL-4在临床上与过敏性哮喘、皮炎等疾病有关,美国Genzyme公司已研制开发ELISA试剂盒检测IL-4水平,但价格昂贵。本实验制备rhIL-4抗血清以应用于IL-4的生物学活性研究及临床检测IL-4水平等方面。

简介：端粒酶在细胞中的主要生物学功能是通过其逆转录酶活性复制和延长端粒DNA来稳定染色体端粒DNA的长度.近年有关端粒酶与肿瘤关系的研究进展表明,在肿瘤细胞中端粒酶还参与了对肿瘤细胞的凋亡和基因组稳定的调控过程.与端粒酶的多重生物学活性相对应,肿瘤细胞中也存在复杂的端粒酶调控网络.通过蛋白质-蛋白质相互作用在翻译后水平对端粒酶活性及功能进行调控,则是目前研究端粒酶调控机制的热点之一.

简介：端粒是真核细胞染色体末端的特有结构，是由端粒结合蛋白和一段重复序列的端粒DNA组成的一个高度精密的复合体，在维持染色体末端稳定性，避免染色体被核酸酶降解等方面起着重要的作用。端粒的长度、结构及组织形式受多种端粒结合因子的调控。由于端粒的重要性，在哺乳动物细胞里，端粒的长度或端粒结构变化与癌症发生及细胞衰老有密切的关系。由于末端复制问题的存在，随着细胞分裂次数的增加，端粒不断缩短，细胞不可避免的走向衰老或凋亡。由于在细胞分裂过程中端粒长度的不断缩短与细胞分裂代数增加具有相关性，即端粒长度反应了细胞的分裂次数，因此有人将端粒形象的比喻为生物时钟。在90％的癌细胞中，端粒酶被重新激活，以此来维持端粒的长度，使细胞走向永生化。简要综述了端粒、端粒酶及端粒酶结合蛋白的最新研究进展。

简介：蜘蛛丝是一类天然蛋白质纤维,具有独特的机械性能（高强度、高弹性和高断裂功等）和卓著的生物学特性（生物可降解性和与生物组织的相容性等）,在生物医学、材料、纺织和军事等领域都有着很高的潜在应用价值。综述了不同蜘蛛丝蛋白的模块结构特征及与其功能的关系,扼要介绍了目前利用各种基因工程方法表达重组蜘蛛丝蛋白的研究进展。

简介：目的：在FUS-50L生物反应器中利用补料分批培养技术培养表达含重组质粒pET28a（＋）-GNLY的大肠杆菌BL21（DE3）pLysS株，生产重组颗粒溶素（GNLY）。方法：选取含pET28a（＋）-GNLY的BL21（DE3）pLysS菌株单个克隆分级培养，将制备的二级种子液接种于发酵罐中。在发酵过程中，控制溶氧为30%～50%，温度为37℃；在基础培养基内生长4h后，补加以甘油为碳源的补料，继续生长到11h；加入葡萄糖至终浓度为1%，30℃诱导表达6h；收集菌体，纯化制备目的蛋白。利用Western印迹检测重组蛋白的抗原性，用CFU方法检测其生物学活性。结果：发酵液中最终菌体密度达80g/L；纯化所得重组蛋白约占菌体总蛋白的5%，含量为60mg/L；经鉴定所获重组颗粒溶素有较好的免疫学活性和生物学活性。结论：用含重组质粒pET28a（＋）-GNLY的大肠杆菌BL21（DE3）pLysS表达系统，可得到具有生物活性的重组颗粒溶素，为大批量生产提供了条件。

简介：蔗糖磷酸合成酶（sucrosephosphatesynthase，SPS）是高等植物体内控制蔗糖合成的关键酶之一，它主要通过异构调节和磷酸化修饰在酶水平调节蔗糖合成。本文简要介绍SPS家族的成员、SPS蛋白上的3个磷酸化位点，以及SPS的生物学功能、SPS与磷酸蔗糖磷酸酶的关系等。

简介：yapsin蛋白酶是一类糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚定的天冬氨酸蛋白酶,能特异性地切割底物中的单或双碱性氨基酸残基位点,起着加工前肽的作用。近年来研究发现,工程菌表达某些外源蛋白时发生的降解现象与yapsin蛋白酶有紧密的关系。概述了yapsin蛋白酶家族的命名、结构、定位、酶原激活、基因表达及底物特异性和功能。