联合采用血清学和核酸检测方法筛查HBV感染

宋红睿

摘要：目的分析乙肝病毒（HBV）感染筛查中酶联免疫吸附试验（ELISA）和核酸扩增技术（NAT）检测情况，进一步提高输血安全。方法采用2种不同生产厂家的ELISA试剂检测无偿献血者血液标本HBsAg，阴性标本采用NAT进行6人份HBVDNA混样检测，混检有反应性标本再进行拆分单检，并对NAT检测阳性标本进行化学发光法补充检测。结果48230份无偿献血者血液标本经ELISA检测，HBsAg阴性47865份；经NAT混检有反应性标本71份，拆分单检HBVDNA阳性标本40份，NAT总有效拆分率为56.34%，NAT检测阳性率为0.084%。HBVDNA阳性标本经化学发光发补充检测，7份标本乙肝5项全阴性，6份标本单纯抗-HBs阳性，6份标本抗-HBs阳性/抗-HBc阳性，4份标本抗-HBs阳性/抗-HBe阳性，7份标本抗-HBe阳性/抗-HBc阳性，10份标本抗-HBc阳性。追踪检测到4份乙肝5项全阴标本血清HBsAg由阴性转为阳性，判定为“窗口期”。结论ELISA检测在HBV感染筛查中存在一定漏检风险，NAT检测可弥补ELISA的不足，有助于降低HBV经输血传播风险。

关键词：联合采用血清学；核酸检测方法；筛查HBV感染

引言

2019年国家卫生计生委疾病预防控制局的统计数据表明，全国乙型病毒性肝炎发病100.2万例，丙型病毒性肝炎发病22.4万例和艾滋病发病7.1万例。这些传染性疾病为患者和国家带来沉重的经济负担。临床上，对传染性病原体进行早期筛查有利于相关疾病的早期诊断与治疗，以防止病原体对机体的进一步侵害。目前，国内外主要通过血清学检测和病毒核酸检测来辅助诊断病原体感染血清学检测方法主要包括ELISA、胶体金和化学发光法。其中化学发光与前两种方法相比具有灵敏度高、能定量分析等优点。它能更好地检出位于窗口期和隐性感染的人群，对临床输血、流行病学研究、动态观察病情和治疗具有非常重要的意义。但是随着化学发光法灵敏度的增高，特异性降低，因而可能会导致很多假阳性结果。检测下限的降低，使一些弱反应性标本在定性的判读上难以把握，从而给临床的分析和解释工作带来了不便。血清学检测结果的判读是根据被测物的吸光度（S）同临界值（CO）的比值（S/CO）来决定，一般S/CO＞1判定为反应阳性；S/CO＜1则判定为阴性。而弱反应性是指处于阳性S/CO判定值附近，临床意义为可疑标本。临床检验人员在实际工作中发现，检测结果呈弱反应性的标本检测重复性差，对这些结果的报告和处理一直困扰着临床检验人员。同时，由于各生产厂家检测试剂存在材料、技术的差异，导致检测结果也存在差异。目前国内各医疗及检验机构对弱反应性范围设定未达成一致，各实验室根据自身检测结果设置合理“灰区”，对弱反应性结果应进行复检或用其他检测方法以确定最终检验结果，以减少假阳性标本的误诊率和假阴性标本的漏诊率。本次研究联合采用血清学和核酸检测方法筛查HBV感染，现报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料

标本来源选取2019年采集的无偿献血者血液标本48230份。

1.2方法

仪器与试剂ELISA（HBsAg）检测试剂盒购；HBVDNA检测采用罗氏核酸检测系统及配套核酸检测试剂盒；化学发光（HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc）检测试剂盒购自日本希森美康。所有试剂经中国药品生物制品检定研究院批检合格，在有效期内使用，操作均严格按试剂盒说明书及仪器设备操作规程执行。

两种酶免试剂平行检测其HBsAg、抗－HCV、HIVAg/Ab和抗－TP，双试剂阴性及单试剂反应性样本使用华益美核酸试剂进行NAT检测，将华益美NAT检测HBV－DNA反应性的样本使用罗氏NAT试剂和化学发光试剂进行确证检测，对最终得到的41份样本结合其免疫学相关指标进行分析。建议针对血清学检测结果为“弱反应性”且不便进行血清学补充试验的患者，进行核酸检测，以明确是否存在病毒感染。血清学无反应性的患者中，仍存在一定的残留风险，建议对特定人群平行进行核酸测。

1.3观察指标

ELISA检测、NAT检测、化学发光补充检测、追踪检测结果。

1.4统计学方法

采用SPSS.0对研究对象采集的数据进行分析处理，计量数据采用( ±s)表示；计数资料采用%表示，使用χ²对数据进行校检；P>0.05为差异无统计学意义。

2结果

2.1ELISA检测

48230份无偿献血者血液标本经ELISA检测HBsAg，双试剂阴性（S/CO＜0.7）47865份，单试剂阳性（1.0≤S/CO≤3.0）25份，双试剂阳性（1.0≤S/CO≤3.0）标本27份，S/CO>3.0标本127份，单试剂灰区（0.7≤S/CO＜1）标本63份，双试剂灰区（0.7≤S/CO＜1）标本123份。

2.2NAT检测

ELISA检测HBsAg阴性标本经NAT检测HBVDNA，混检阳性标本71份，拆分HBVDNA阳性标本40份。NAT总有效拆分率为56.34%（40/71），NAT检测阳性率为0.084%（40/47856）。

2.3化学发光补充检测

HBVDNA阳性标本经化学发光补充检测，7份标本乙肝5项全阴性，6份标本抗-HBs阳性，6份标本抗-HBs阳性/抗-HBc阳性，4份标本抗-HBs阳性/抗-HBe阳性，7份标本抗-HBe阳性/抗-HBc阳性，10份标本抗-HBc阳性。

2.4追踪检测结果

对乙肝5项全阴的7份标本进行追踪检测，成功追踪到4份标本血清HBsAg由阴性转为阳性，判定为“窗口期”；另外3份标本没有追踪到，暂定为疑似“窗口期”。

3讨论

我国是HBV感染的高发区，病毒携带率高、传染性强、流行面广。HBV输血相关感染标志物检查是目前采供血机构判断HBV感染的重要依据。HBV检测的项目主要是HBsAg和HBVDNA，国内多项究已证实酶联免疫吸附试验检测和核酸检测的互补形式可有效降低输血传播病的感染风险。而关于化学发光检测(CLIA)核酸样本的报道相对少见，本研究阐述了CLIA检测相关血清学指标在评价核酸检测反应性样本的具体应用。

结束语

综上所述，针对HBV病毒的复杂性，使用CLIA检测相关免疫学感染性指标发现组合呈现多样化、复杂化状态，并结合国内血站血液筛查项目普遍使用ELISA的现状，当前唯有进一步提高NAT检测方法的灵敏性，最大限度地在ELISA阴性样本中筛查出核酸反应性样本，降低低浓度水平HBV的漏检，才能提高临床输血安全。

参考文献

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