简介：目的：探索ISSR分子标记技术对玉竹的主要栽培品种、野生种及易混淆品黄精进行鉴定的新方法。方法：采用优化的ISSR-PCR体系，筛选出能扩增明显多态性条带的引物对样品进行扩增和凝胶电泳分析，并依遗传距离构建分子聚类图。结果：10个引物共扩增出125个DNA片段，其中116个片段呈现多态性，多态带百分率为92．9％。玉竹品种间存在较大的遗传多样性，栽培品种与野生种及易混淆品黄精易于区分。结论：本实验所建立的ISSR分子标记方法可用于玉竹的品种鉴定和良种选育研究。

简介：通过正交试验建立芦笋ISSR优化反应体系,并对其反应程序进行优化。实验结果表明,优化的扩增体系：25μL的反应体系中含150ng的模板DNA、0.3μmol/L引物、15μL2×Mastermix;优化的反应程序：94℃预变性5min;94℃变性45s,设定温度退火60s,72℃延伸45s,循环30次;然后72℃延伸10min,4℃保存;筛选到了21条引物并确定其最优退火温度。实验结果为芦笋资源遗传多样性评价的研究奠定基础。

简介：菜薹原产中国,是华南地区重要的特产蔬菜之一。目前,分子标记技术已广泛应用于多种作物研究,但在菜薹上的应用研究刚刚起步。ISSR主要是由单一引物且以重复序列为主要引物序列的PCR标记,其反应条件受模板DNA、TaqDNA聚合酶、Mg2+、dNTP和引物等因素的影响。正交试验设计能明确各因素间的互作效应,建立最优化的反应体系。本研究利用正交试验设计,从TaqDNA聚合酶、dNTP、引物、Mg2+4种因素3个水平对菜薹ISSR反应体系进行了优化,确立了适合菜薹的ISSR反应体系并在7个菜薹品种中进行了验证。在20μl反应体系中,含TaqDNA聚合酶1U、dNTP250μmol/L、引物0.25μmol/L、1×PCRbuffer、Mg2+2.5mmol/L、模板DNA30ng。通过梯度PCR测验,确定了适宜的退火温度。这一体系的建立为今后利用ISSR技术进行菜薹种质资源分类、遗传图谱构建和基因定位奠定了技术基础。

简介：对珍稀濒危物种都支杜鹃的ISSR扩增体系中的Mg^2＋浓度、dNTP浓度、Taq酶含量和底物含量进行优化，并在优化后的基础上筛选出8条效果较好的引物，在梯度PCR仪中设置温度梯度，找到这些引物的最佳退火温度。优化结果表明，至少在一定的范围内底物浓度和Taq酶含量对PCR反应结果影响不大，相对而言，dNTP浓度和Mg2＋浓度对反应结果的影响更加显著。优化后的15ulPCR反应体系中包括20ng模板DNA、0.3μM引物、1.5ulBuffer（Mg^2＋free），0.5UTaq酶、1.5mMMgCl2和0.1mMdNTP。

简介：节Strobus的12种类的基因关系与ISSRmarkers被分析。117loci与12份ISSR教材被检测。多态的乐队(PPB)的百分比从5.93%～19.92%变化了。P。pumila有基因区别和P的高水平。flexilishad最低。在节Strobus的12种类的全部的基因差异(H_T)是26.21%，基因差异(H_S)是的whichintraspecific7.66%，并且种间的基因差异(D_(圣))was18.55%，和遗传变异在内部种类说明了70.78%全部的基因差异。根据遗传距离的簇结果，12种类被分类进二个组。第一个组包括了P。griffithii，P。armandi，P。fenzeliana，P。kwangtungensis，P。strobus，P。monticola和P。wangii。第二个组包括了P。albicaulis，P。pumila，P.flexilis，P。sibirica和P。koraiensis。

简介：以番茄叶霉病菌（Passalorafulva）基因组DNA为模板,采用单因素试验和正交设计试验对该菌ISSR-PCR体系中的一些重要参数（Mg2＋、dNTPs、引物、模板DNA、TaqDNA聚合酶、缓冲液、循环次数）和引物进行筛选和优化,并对退火温度进行了梯度优化,建立了番茄叶霉病菌ISSR-PCR的最佳反应体系（20μL）：Mg^2＋1.5mmol/L,dNTPs0.4mmol/L,引物1.5μmol/L,模板DNA45ng,TaqDNA聚合酶1.0U,1倍的PCR缓冲液,循环40次,退火温度50℃。

简介：采用正交试验设计的方法,对黑木耳ISSR-PCR(简单重复序列区间-多聚酶链反应)反应体系中的5种主要因素(Taq聚合酶,Mg2+,模板DNA,dNTP及引物)4个水平进行优化筛选,确立了适合黑木耳ISSR分析的优化反应体系(20μL),通过梯度PCR试验筛选得到相应引物的最佳退火温度.

简介：以CTAB法提取的马蹄金叶片DNA为模板，应用L16（4^5）正交表系统分析了DNA、Mg^2＋、dNTP、Taq酶、引物5种ISSR反应成分浓度变化对扩增结果的影响。量化分析结果表明：Taq酶、dNTP不同水平对PCR反应结果有显著影响，正交设计可以应用于ISSR-PCR反应体系的建立，用这种方法建立的马蹄金ISSR优化反应体系为：1×buffer，25ng模板DNA，1．75mmol／LMg^2＋，225μmol／LdNTP，0．91μmol／L引物，1．25U7TaqDNA聚合酶，总体积20μl。这一优化系统的建立为今后利用ISSR标记技术，研究马蹄金的地理变异提供一个标准化程序。

简介：采用ISSR分子标记方法对24份爱玉品种的遗传多样性进行分析。从100条ISSR引物中筛选出17条扩增清晰、重复性高、多态性好的引物,选取其中4条多态性强的引物进行聚类分析。结果表明：4条引物共检测到43个多态性位点,多态性百分率为89。6％。这4条引物可以将24份爱玉种质之间的遗传差异完全区分。利用聚类分析,可以将24份爱玉种质聚分为4大类,24份爱玉种质的遗传相似系数变化范围在0。69-0。92之间。

简介：为获得南瓜ISSR最优扩增体系,为后续南瓜的遗传多样性分析和亲缘关系鉴定奠定基础,本研究以‘密本’南瓜为筛选体系材料,采用单因素试验,对ISSR反应体系的Mg2＋、dNTP、Taq酶、引物和DNA浓度等5个因素进行优化。研究结果表明,南瓜ISSR25μL最佳反应体系为：2.5μL10×Buffer,2.0mmol/LMg2＋,0.3mmol/LdNTP,1UTaq酶,0.48mmol/L引物,75ng的DNA。在此基础上,对筛选出的12条引物进行退火温度的优化,最终确定每条引物的最佳退火温度。利用该反应体系,选用引物891对85个南瓜品种进行所确立扩增体系的验证,结果显示扩增产物条带清晰明亮、多态性丰富,且特异性强、重复性好,表明本研究所确定的反应体系适用于南瓜的ISSR分子标记。

简介：目的：建立党参的ISSR-PCR反应体系,为今后利用ISSR标记技术进行党参鉴定及种质遗传多样性分析提供一个标准化程序.方法：采用试剂盒法提取党参基因组DNA为模板,通过单因素实验分析了ISSR-PCR反应体系中MgCl2、dNTPs、引物浓度、TaqDNA聚合酶、模板DNA用量及退火温度对ISSR-PCR扩增的影响.结果：建立了重复性好,分辨率高的ISSR-PCR反应体系,即在25μL反应体系中,含有10×PCRBuffer缓冲液2.5μL,MgCl22.0mmol·L-1,dNTPs0.5mmol·L-1,引物0.4μmol·L-1,TaqDNA聚合酶1.0U,模板DNA为30ng;扩增程序为：94℃预变性5min,然后94℃变性30s,51.7℃退火1min,72℃延伸1.5min,共计35个循环,循环结束后在72℃延伸7min,4℃保存.结论：建立了适用于党参的ISSR-PCR反应体系,为应用ISSR技术鉴定党参种质资源、分子标记辅助选择育种及其遗传多样性研究奠定了基础.

简介：以期建立可用于地龙ISSR－PCR分析的最佳反应体系和扩增程序,模板DNA的量、引物浓度、镁离子浓度和Taq酶的量、引物退火温度等都会影响ISSR扩增,将地龙ISSR-PCR扩增体系中的dNTPs浓度定为0.2mmol·L-1

简介：确定了引物809以柴胡基因组DNA为模板扩增的最佳退火温度为54.5℃（见图2a）,因此选择0.3μmol/L作为柴胡ISSR-PCR反应体系中最佳的引物浓度,本实验在25μlISSR-PCR反应体系中对TaqDNA聚合酶设置了0.5

简介：菰是一种稻族野生资源,水生或沼生,在我国有着广泛的分布。野生菰群体不仅是一种重要的育种基因资源,同时还有着巨大的生态作用。为建立适宜于菰的ISSR反应体系,以菰DNA基因组为模板对ISSR反应体系中的主要影响因子进行优化。采用单因素变量法在12个不同梯度水平上设计正交试验针对体系中dNTPs浓度、Mg^2＋浓度、Taq聚合酶浓度、引物浓度、模板DNA浓度及引物退火温度等6个因子进行优化,确定了在20μLISSR反应体系中各组分的最适因素水平分别为：3.0mmolMg^2＋（10×Buffer）,0.5mmoldNTPs、1.0μmol引物浓度、0.24U/μLTaq聚合酶、1.5ng/μLDNA模板以及55℃退火温度。应用该优化体系对80个菰材料进行扩增,证实了该体系的适用性和稳定性,为菰遗传资源的鉴定、评价与利用提供了技术支撑。

简介：六份ISSR教材被采用显示不同阶段的多型性和红水藻Gracilarialemaneiformis的性，并且他们中的二个，P1和P3，放大不同乐队模式。女配偶体的教材P1放大的ISSR模式与那oftetrasporophyte相同，但是从男配偶体的不同。教材P3生产的乐队，一个人对女配偶体特定。三片词法上类似的复叶能容易用ISSR技术被识别。二个特定的标记，SM1andSF3与男配偶体和女配偶体有关，被克隆并且定序。SM1的相应序列被发现编码假想蛋白质。没有能在GenBank被发现的SF3的相应顺序。

简介：利用ISSR分子标记技术对不同生态类型的39份龙眼种质进行亲缘关系分析。研究结果表明，从100条ISSR引物中筛选出12条重复性好、条带清晰的引物，对39份龙眼种质基因组DNA进行扩增，得到152个位点，其中多态性位点117个，多态性比例为76．97％。供试龙眼种质间遗传相似系数变幅为0．57～0．92，说明ISSR标记能够揭示材料间较高的遗传多样性。UPGMA聚类结果表明，在0．65相似水平可以将39份龙眼种质分为3个类群，类群I均为来自中国的南亚热带生态型龙眼；类群Ⅱ包括石硖和大鸟圆2个南亚热带生态型龙眼品种，以及热带生态型龙眼四季蜜类型的品种和单株；类群Ⅲ包括来自越南和泰国的龙眼种质。不同生态类型对龙眼的亲缘关系影响不大，热带生态型和南亚热带生态型龙眼相互聚在一起，说明两种不同生态类型龙眼具有较多相同的遗传背景。本试验结果将有助于进一步开展龙眼的分类、遗传与进化研究。

简介：采用10个ISSR分子标记对地理来源不同的33份绿豆种质资源进行了遗传多样性分析。结果表明,10个引物在33份绿豆种质间共扩增出118个条带,其中多态性条带115条,多态性位点比例为98.18%;供试绿豆种质间的遗传相似系数在0.50~0.98之间,平均0.68。当遗传相似性系数为0.682时,供试种质分为4个ISSR类群（ISSRGroups,IGs）,第Ⅰ类群包括产地为黑龙江、吉林共9份和河北的1份绿豆种质资源,第Ⅱ类群包括河南、山西和陕西的所有和河北的4份绿豆种质资源,第Ⅲ类群为来自泰国的5份绿豆抗虫资源,第Ⅳ类群包括山东和内蒙古各2份绿豆资源;ISSR类群划分与绿豆的地理来源存在一定相关性。

简介：Assessmentofgeneticdiversityisanessentialcomponentingermplasmcharacterizationandconservation.TherearethreewildricespeciesinHainanProvince,includingOryzarufipogonGriff.InordertodetectthegeneticdiversityofdifferentpopulationsofOryzarufipogoninHainan,ISSR(inter-simplesequencerepeat)andSSR(simplesequencerepeat)markerswereusedtoinvestigate180accessionsfromsixlocalitiesinHainan.FourteenISSRprimersamplified185alleleswith171(92.43%)polymorphic,thenumberofallelesrangedfrom8to17,withanaverageof13.14allelesperlocus.Thirty-eightpairsofSSRprimersusedinthisstudyamplified213alleleswith190(89.20%)polymorphic,thenumberofallelesrangedfrom2to14,withanaverageof5.66allelesperlocus.BothISSRandSSRanalysesrevealedahighlevelofgeneticdiversityinthewildpopulations.ThepopulationwiththehighestgeneticdiversityisWanning(WN),andthepopulationwithlowestgeneticdiversityisWenchang(WC).TheresultsofaUPGMAclusterusingtheNTSYSprogramshowedthateachpopulationhasalowdegreeofgeneticdifferentiation.Furthermore,theManteltestrevealedthatthegeneticsimilaritiesdetectedbyISSRandSSRweresignificantlycorrelated(r=0.8634,t=93.67)whendetectinggeneticdiversityatthespecieslevel.ThetwomolecularmarkersystemswereabletodeterminethegeneticdiversityamongOryzarufipogon,andthetwogroupsofindexesobtainedbyusingthetwomarkershaveahighlevelofconsistency.

简介：探讨2种分子标记技术在沉香属药用植物遗传多样性研究中的应用。用ISSR和AFLP分子标记分析了海南、云南、广东、广西等地17份沉香属植物的遗传多样性。14个ISSR引物、8对AFLP引物分别检测到119、919个位点,多态性位点百分率分别为73.95%、86.94%。由于AFLP标记具有较高的多态性位点检测效率,AFLP标记分析的遗传多样性参数高于ISSR。虽然基于Nei＇s遗传距离的聚类分析结果存在着一定的差异,但用Mantel检测对2种方法检测的遗传一致度进行相关性分析表明,二者之间存在着明显的相关性（r=0.7705,P=0.0003）。ISSR标记与AFLP标记均能应用于沉香属植物的遗传多样性研究。2种标记的研究结果均揭示出沉香属植物具有较高的遗传多样水平。

简介：为建立暴马丁香ISSR-PCR最佳反应体系,本研究以暴马丁香基因组DNA为模板,首先通过单因子试验设计筛选出各影响因子比较适宜的浓度范围,再利用正交试验,对暴马丁香ISSR-PCR反应有影响的模板DNA、dNTPs、Mg2＋、TaqDNA聚合酶和引物浓度等5种因素4个水平进行了优化试验。暴马丁香的ISSR-PCR最佳反应体系最终确定为：在25μL的反应体系中,DNA模板是40ng,Mg2＋浓度为2.0mmol/L,引物浓度为0.4μmol/L,TaqDNA聚合酶用量为1.5U,dNTPs浓度为0.2mmol/L。利用该体系从60条ISSR引物中筛选出了扩增条带清晰、多态性好的10条引物。这一体系的建立及多态性引物的筛选为以后利用ISSR分子标记技术进行暴马丁香的有关研究提供了科学依据。