年龄休克指数、血清miR-130a与肝硬化急性上消化道出血病情程度及预后的相关分析

王敏

摘要

目的： 分析肝硬化上消化道出血患者年龄休克指数、血清 miR-130a 表达情况及与病情严重程度和预后的相关性。方法：128例肝硬化患者根据是否合并上消化道出血分为出血组与无出血组各64例，并选择同期健康体检的志愿者60例为对照组，比较三组入院时年龄休克指数、血清miR-130a相对表达量情况。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析年龄休克指数、血清 miR-130a 表达对肝硬化患者上消化道出血的评估价值。Spearman 相关分析肝硬化上消化道出血患者血清 miR-130a 表达与肝功能分级、出血严重程度的关系，Cox 回归模型分析影响患者预后的独立危险因素。结果：出血组病程、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（FIB）、肝功能 Child 分级评分、终末期肝病模型评分、血清 miR-130a 表达水平高于无出血组，白蛋白（ALB）低于无出血组（P<0. 05）。出血组和无出血组凝血酶原时间、APTT、凝血酶时间、FIB、国际标准化比值、血清 miR-130a表达水平高于对照组，ALB、血小板低于对照组（P<0. 05）。肝硬化上消化道出血患者血清 miR-130a 表达与肝功能分级及出血严重程度均呈正相关性（P<0. 05）。年龄休克指数>1.5及血清 miR-130a 表达水平是影响肝硬化上消化道出血患者预后的独立危险因素（P<0. 05）。结论： 肝硬化上消化道出血患者血清 miR130a 表达水平显著升高，并与肝功能分级及出血严重程度呈正相关性，与休克指数.1.5均是影响患者预后的独立危险因素。

[关键词] 肝硬化；上消化道出血；miR-130a；休克指数；预后；ROC 曲线；Cox 比例风险回归模型

肝硬化是一种或多种病因引起的慢性进行性肝病，主要以肝功能损伤及门静脉高压为特点，晚期常引起上消化道出血等并发症，严重影响患者的生存质量和生命安全。肝硬化患者肝功能显著下降，加之上消化道出血及腹腔积液刺激，使免疫功能明显降低。miR-130a是一种内源性非编码小分子单链RNA，可通过选择性结合靶基因上的信使RNA，起到抑制基因表达的作用。休克指数（SI）是经典的用来判断患者是否合并休克及休克严重程度的指标，其可以间接判断患者液体复苏效果，且简单易得。目前关于年龄休克指数、血清miR-130a表达情况对肝硬化急性上消化道出血患者病情严重程度和预后的相关性研究报道较少。本项目旨在探究年龄休克指数、血清miR-130a表达情况对肝硬化急性上消化道出血患者病情严重程度和预后的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2022年07月-2023年12月诊治的肝硬化患者128例作为研究对象，根据是否合并急性上消化道出血分为出血组与无出血组，并选择同期健康体检的志愿者60例为对照组，比较三组入院时年龄休克指数、血清miR-130a相对表达量情况。采用受试者工作特征ROC）曲线分析年龄休克指数、血清miR-130a表达对肝硬化患者上消化道出血的评估价值。pearman相关分析肝硬化急性上消化道出血患者年龄休克指数、血清miR-130a表达与肝功能分级、出血严重程度的关系，Cox回归模型分析影响患者预后的独立危险因素。以期为临床肝硬化急性上消化道出血的发病机制及预后改善研究提供参考依据。

1.2 方法

1.2.1资料收集

记录肝硬化患者入院时及对照组体检当天的一般资料，对所有肝硬化患者进行6个月的出院随访，并记录死亡情况。一般资料包括姓名、性别、病程、病因等，实验室检测血液相关指标包括血小板（PLT）、白蛋白（ALB）、凝血功能[凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）、纤维蛋白原（FIB）、国际标准化比值（INR） ]等，终末期肝病模型（MELD）评分应用公式计算，MELD =9.6 × In（肌酐mg/dl） +3. 8 × In（胆红素mg/dl） +11.2 × In（INR） +6.4×病因，公式中病因为胆汁淤积或酒精性肝炎均记0分，其他病因记1分，得分越高，表示其风险越大。

1.2.2血清 miR430a 检测

采用定量逆转录聚合酶链反应（qRTPCR）检测血清miRH30a相对表达量，具体步骤如下：①血清样本提取：采集空腹静脉血10 ml，置于无菌采血管，离心后取上清液-80 C超低温冷冻保存；②总RNA提取：取180 μl血清样本，加入1 ml总RNA提取试剂Trizol 液(Invtrogen，Grand Island，NY) ，振荡器混匀，室温下静置5 min；加入0.2 ml三氯甲烷，振荡器混匀15 s室温下静置10 min；4 ℃条件下12 000 r/min 离心15 min；吸取上层水相液体至新的1.5 ml EP管，加入1 ml异丙醇，振荡器混匀，室温下静置10min；4℃条件下12 000 r/min离心10 min，弃去上清液，加入75%乙醇1 ml，轻轻摇动；4 ℃条件下离心5 min，弃去上清液，在室温下干燥或真空干燥5 min，加入焦碳酸二乙酯30 μl，待其溶解后置于-80 ℃低温冰箱中保存。③RNA质量检测：使用NanoDrop 8000 紫外-可见光分光光度计进行RNA浓度检测，比值为1.8~2.0。④qRTPCR分析：参考GenBank数据获取待测基因序列，应用Primer5.0软件分析，引物浓度0.4 μmol/L， RNA模板0.6 μl，93 ℃预变性5min，93C变性40s、58C退火30s、72C延伸60 s，共40个循环；每个待测样本设置3个平行样本，以β-actin作为内参基因，根据目标基因设计合成相应上下游引物进行qRTPCR扩增，采用2－ΔΔCt进行miRH30a基因相对表达量的计算。

1.3 观察指标

比较所有研究对象的临床资料，比较三组入院时年龄休克指数、血清miR-130a相对表达量情况。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析年龄休克指数、血清mi R-130a表达对肝硬化患者上消化道出血的评估价值。Spearman相关分析肝硬化急性上消化道出血患者年龄休克指数、血清mi R-130a表达与肝功能分级、出血严重程度的关系。以肝硬化急性上消化道出血患者住院期间或出院6个月内死亡作为预后终点，评估影响患者预后的独立危险因素。

1.4 统计学方法

运用SPSS22.0统计软件包对各实验数据进行统计分析，计量数据以均数±标准差(±s)表示，组间差异比较，应采用独立样本t检验；计数资料用n(%)的形式表示，组间采用χ2检验。评估价值采用受试者工作特征（ROC）曲线分析，相关性采用Spearman相关分析，危险因素采用Cox回归模型分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

    出血组病程、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（FIB）、肝功能 Child 分级评分、终末期肝病模型评分、血清 miR-130a 表达水平高于无出血组，白蛋白（ALB）低于无出血组（P<0. 05）。出血组和无出血组凝血酶原时间、APTT、凝血酶时间、FIB、国际标准化比值、血清 miR-130a表达水平高于对照组，ALB、血小板低于对照组（P<0. 05）。肝硬化上消化道出血患者血清 miR-130a 表达与肝功能分级及出血严重程度均呈正相关性（P<0. 05）。年龄休克指数>1.5及血清 miR-130a 表达水平是影响肝硬化上消化道出血患者预后的独立危险因素（P<0. 05）。

3 讨论

肝硬化是临床上常见的慢性、进展性、肝脏呈弥漫性损害的疾病。肝硬化的病因有肝炎病毒、乙醇、药物与毒物、自身免疫性疾病等，在我国主要为病毒性肝炎，国外以酒精性肝硬化为主。由于一种或多种病因长期慢性刺激肝脏，肝细胞广泛变性坏死，肝脏纤维组织弥漫性增生，长期进展下来，形成再生结节和假小叶，正常的肝小叶结构被破坏，从而形成门脉高压，引起食管胃底静脉的曲张[1-2]。食管胃底静脉破裂出血引起上消化道出血，是肝硬化临床常见并发症。文献[3]报道终末期肝硬化患者中约60%会发生食管胃底静脉曲张，其中30%的此阶段患者会发生出血，出血一般凶险，短时间内可造成失血性休克。文献[4]指出，食管静脉曲张破裂出血的医院内死亡率20%~40%。在肝硬化合并上消化道出血患者，细菌感染很常见，且死亡率增加5倍。这是由于肝硬化患者免疫系统异常，网状内皮系统严重损失，细菌移位、肠道细菌大量增殖都使机体容易发生感染。上消化道出血以后，免疫因子丢失，肠腔内pH值发生变化，微环境的改变促使了肠道内细菌生长，细菌大量增殖，引起细菌移位，造成相应部位的感染。肝硬化消化道出血患者在诊治过程中需要侵入性操作，如三腔两囊管、内镜检查及治疗等，使患者皮肤黏膜屏障受到不同.程度损坏，细菌通过破损的黏膜进入血液弓起感染[5]。肝硬化上消化道出血患者容易并发各种感染，而感染的出现预示着控制出血的失败，出现再出血，两者相互影响，使病情加重，危及患者生命。因此，积极寻找疾病诊断及预后评估的相关指标是制定个体化治疗方案，降低病死率的关键。

目前，临床有关肝硬化患者并发上消化道出血的危险因素研究较多，但因样本纳入标准及分析方法不同，国内外研究结果亦存在争议。李伟坚[6]研究认为，肝硬化患者发生上消化道出血是由于肝功能降低引起的凝血功能障碍及腹腔积液等出血刺激因素；同时由于患者免疫系统紊乱，极易导致院内感染率升高。miR-130a是具有调节基因表达功能的关键因子，能在机体抗感染过程中起到重要作用。大量研究[7-8]已证实，miR-130a与急性冠状动脉综合征、颅脑损伤等疾病具有明显的相关性。卢翔[9]研究发现，乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭患者血清miR-130a表达水平较健康体检者异常升高，考虑可能与诱导免疫细胞因子的释放有关。动物及细胞学研究[10]证明，miR-130a可参与多种病因导致的肝衰竭发病过程，且能反映肝功能的损伤程度。肝硬化患者升高的miR-130a表达水平与丙氨酸转氨酶等互相影响，从而加重病情发展。有研究[11]表明，miR-130a在人类获得性免疫及固有免疫中均具有至关重要的作用，主要通过靶基因蛋白对自身免疫系统产生作用。

休克指数（SI）为经典的无创血流动力学指标，为心率（heart rate, HR）/收缩压（systolic blood pressuree，SBP），在急诊领域使用较多。一般成人正常值为0.5-0.7，急性血容量减少及左心功能不全时升高。SI最初用于评估出血性血容量减少的程度，并用于感染性休克严重程度的分级；随后的实验及临床研究[12]证明，其与心脏指数、每搏量、左室每搏功、平均动脉压等生理参数呈负相关。SI现在除了用于评估患者血流动力学状况及失血程度，还普遍应用于评价危重患者的严重程度，如严重脓毒症、创伤、肺栓塞、重症肺炎等，以及患者对治疗的获益程度，并确定是否需要重症监护，优于单独使用SBP，舒张压（diastolic blood pressure, DBP）和HR等参数，甚至优于一些危险评分工具

[13]。

本研究结果证实，肝硬化上消化道出血患者血清 miR130a 表达水平显著升高，并与肝功能分级及出血严重程度呈正相关性，与休克指数1.5均是影响患者预后的独立危险因素。

参考文献

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基金项目：重庆市黔江区科技计划项目（黔科技2022084）