HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈癌中的研究进展

陈亚行 

摘要：宫颈癌是全球女性最常见的恶性肿瘤之一，其致病因子之一是人乳头瘤病毒（HPV）的高风险型感染。HPV E6和E7基因的活化对于宫颈癌的发展起着重要的作用，因此，检测HPV E6/E7 mRNA的表达水平在宫颈癌中的诊断和治疗中具有重要的意义。本文将详细介绍HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈癌中的研究进展，包括其原理、检测方法、临床应用。

关键词：宫颈癌，人乳头瘤病毒，E6/E7 mRNA，检测方法，临床应用

Abstract: Cervical cancer is one of the most common malignant tumors in women worldwide, and one of its pathogenic factors is the high-risk infection of human papillomavirus (HPV). The activation of HPV E6 and E7 genes plays an important role in the development of cervical cancer. Therefore, detecting the expression level of HPV E6/E7 mRNA is of great significance in the diagnosis and treatment of cervical cancer. This article will introduce the research progress of HPV E6/E7 mRNA detection in cervical cancer in detail, including its principle, detection method and clinical application.

Keywords: Cervical cancer, human papillomavirus, E6/E7 mRNA, detection method, clinical application
    宫颈癌是威胁女性健康的一种恶性肿瘤，其中高风险型人乳头瘤病毒（HPV）的感染是宫颈上皮细胞增生和恶性转化的主要诱发因素。HPV感染后，病毒的早期基因E6和E7基因的异常表达被广泛认为是宫颈癌发展的关键步骤。因此，研究并利用HPV E6/E7 mRNA的表达水平来预测宫颈癌的诊断和治疗具有重要的意义。
一、HPVE6/E7mRNA的生物学意义
    人乳头瘤病毒是宫颈癌的主要致病病毒，感染宫颈上皮细胞后，HPV的基因组含有两个关键的早期基因E6和E7，这两个基因编码E6和E7蛋白，它们在细胞转化为宫颈癌过程中起着重要作用。E6和E7蛋白通过与宿主细胞蛋白相互作用，改变细胞的生长和分化机制，促进宫颈上皮细胞的转化为恶性细胞【1】。具体来说，E6蛋白与宿主细胞的肿瘤抑制蛋白p53结合并导致其降解，从而避免细胞自噬和凋亡，而E7蛋白与宿主细胞的细胞周期调节蛋白Retinoblastoma蛋白（pRb）结合并使其失活，从而促进细胞增殖和转化。总结来说，HPV E6/E7 mRNA检测利用分子生物学技术检测宫颈细胞中E6和E7基因的mRNA表达水平，以判断细胞是否受到高风险的人乳头瘤病毒感染并潜在地发生转化。这种检测方法在宫颈癌的早期筛查和诊断中具有重要的临床意义，可以提供更准确的宫颈癌诊断和个体化治疗选择。

二、HPVE6/E7mRNA检测的方法
（一）荧光定量PCR（qPCR）方法：根据特定引物设计qPCR试剂盒，用于扩增E6和E7基因的mRNA；通过PCR反应在实时荧光检测器中监测PCR产生的荧光信号；根据荧光信号的强度和阈值循环数（Ct值），定量E6和E7 mRNA表达水平。
（二）碱基扩增循环测序（BEAMing）方法：使用特定引物扩增E6和E7基因的mRNA；在PCR反应过程中，引物上带有特定的标签（例如序列标签结构区域，specific sequence tag area，STA）；STA允许引物在PCR扩增过程中引入一个特定的序列标签；扩增产物经过序列特异性的电泳分离和测序，通过分子计数来定量E6和E7 mRNA的表达水平【2】。
（三）原位杂交方法（in situ hybridization）：制备特异性探针，用于检测E6和E7基因的mRNA表达位置；组织切片或细胞制备后，与探针进行杂交反应；利用特定的检测系统（如荧光标记或酶标记）对与探针结合的mRNA进行可视化和定量分析。
    这些方法在HPV E6/E7 mRNA检测中的应用有各自的优缺点：qPCR方法快速、灵敏，并且可以定量测定mRNA的表达水平；BEAMing方法具有高分辨率和高灵敏性，可以对单个分子进行检测和计数；原位杂交方法可以提供mRNA的空间表达信息，适用于组织样本中病变的定位和评估【3】。需要注意的是，在进行HPV E6/E7 mRNA检测前，需要先提取样本中的总RNA，并进行逆转录转化为cDNA，以便于后续的PCR扩增和检测。

三、HPVE6/E7mRNA检测在宫颈癌中的临床应用
（一）早期筛查和诊断：HPV E6/E7 mRNA检测可以在宫颈癌的早期筛查和诊断中发挥重要作用。与传统的HPV DNA检测相比，HPV E6/E7 mRNA检测可以确定病毒是否活跃感染和发生细胞转化，从而提供更准确的宫颈癌风险评估。研究表明，HPV E6/E7 mRNA阳性的女性患者具有高度宫颈上皮内瘤变（CIN）和宫颈癌的风险，可以提供更早的治疗机会【4】。
（二）宫颈癌风险评估：HPV E6/E7 mRNA检测可用于评估患者宫颈癌的风险级别。由于HPV E6和E7基因在HPV相关的宫颈癌发展中起到关键作用，因此检测其mRNA表达水平可以提供更准确的风险评估，高水平的HPV E6/E7 mRNA表达意味着患者可能处于更高的宫颈癌风险，需要更密切的随访和治疗。
（三）监测治疗效果：对于已经被确诊为宫颈癌的患者，HPV E6/E7 mRNA检测还可以用于监测治疗效果，治疗后，HPV E6和E7的mRNA表达水平应该显著下降，如果HPV E6/E7 mRNA仍然高表达，可能意味着患者可能存在复发或治疗失败的风险【5】。这种监测方法可以帮助医生及时调整治疗方案，提高治疗效果。
（四）预后评估：HPV E6/E7 mRNA检测可以用于宫颈癌患者的预后评估。研究发现，HPV E6/E7 mRNA高表达与更差的预后相关，包括肿瘤复发、转移和预测生存率，因此，HPV E6/E7 mRNA检测可以帮助医生对患者进行个体化治疗和随访管理。
结束语
HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈癌的早期筛查、诊断和预后评估中具有重要的应用价值。它是一种敏感、特异性较高的非侵入性诊断方法。随着技术的不断进步和研究的深入，HPV E6/E7 mRNA检测有望在宫颈癌的个体化治疗中发挥更大的作用。未来的研究需要进一步验证其准确性和可行性，为宫颈癌的早期发现和治疗提供更好的支持。

参考文献

[1] 廖秦平.宫颈癌病因学研究新进展[J].中国妇产科临床,2003(4):243-245.

[2]迂丽丽.女性HPV持续感染在宫颈癌前病变及宫颈癌筛查中的临床分析[J].中外女性健康研究,2019(7):37+67.

[3]陈金环.宫颈液基细胞学检查与高危型HPV检测早期筛查宫颈癌前病变的比较研究[J].中外女性健康研究,2019(1):23-24.

[4] Bosch F X,Lorincz A,Muñoz N,et al.The causal relation between human papillomavirus and cervical cancer[J].Journal of Clinical Pathology,2002,55(4):244-265.DOI:10.1136/jcp.55.4.244.

[5] de Sanjosé S,Brotons M,Pavón M A.The natural history of human papillomavirus infection[J].Best Practice & Research Clinical Obstetrics & Gynaecology,2018,47:2-13.DOI:10.1016/j.bpobgyn.2017.08.015.

黑龙江省卫生健康委科技计划（20210505010139）