HBsAg酶免四种试剂性能情况比较分析

王荣

摘要:目的  通过对质控品和血清盘的平行检测，评估四种HBsAg酶联免疫吸附（ELISA)试剂的各项性能情况。方法  采用四种HBsAg酶联免疫吸附（ELISA)试剂同时检测HBsAg质控品（浓度为0.2IU/mL)和乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）血清盘，将实验室近三次室间质评HBsAg有反应样本再次用四种试剂进行比对。结果 1)检测血清盘的结果中四种试剂检测结果的一致性较好，准确率均较高，但在检测样本编号为40，参考浓度为：0.5IU/ML时，试剂三未检出。2）试剂一的批内精密度CV为7.70%-7.71%，批间精密度CV为10.32%-12.21%；试剂二的批内精密度CV为5.52%-5.56%，批间精密度CV为11.76%-11.78%；试剂三的批内精密度CV为5.05%-5.08%，批间精密度CV为18.90%-18.92%；试剂四的批内精密度CV为8.99%-9.02%，批间精密度CV为14.42%-16.42%。3）试剂二和试剂三是实验室用的试剂，较上报结果无较大差异，试剂一和试剂四在阳性较强的样本中没有太大区别，阳性偏弱的结果相对比较低。结论 试剂二各方面性能指标稳定，其他试剂需加强验证 。

 关键词：乙型肝炎表面抗原（HBsAg）；酶联免疫吸附试验（ELISA)；性能指标

   乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV)是引起肝脏炎症性反应的主要病原体之一，其主要传播途径是血液传播（输血和血制品）、母婴传播和性传播。HBV呈世界性流行，据世界卫生组织（WHO)报道,全球约20亿人正在感染HBV或曾经感染过HBV，2.57亿人是乙肝慢性携带者，乙肝在我国传染率较高，我国慢性乙肝感染者约为9000万人，占全球慢性感染者总数的30%。使用酶联免疫吸附试验（ELISA)检测乙型肝炎病毒表面抗原HBsAg是血液筛查实验室有效检出乙肝病毒（HBV）感染的重要方法之一。尽管至2015年，我国血站实验室已全面开展核酸检测（NAT），大大提高了HBV检出的灵敏度，但是由于我国乙肝感染人群的复杂性和流行性，仍有一定比例的乙肝感染者表现为HBsAg阳性而HBV DNA为阴性；因此HBsAg的酶联检测质量仍然是保障临床用血安全的重要一环。为预防HBV的经血传播，保证输血安全，《血站技术操作规程2019版》规定我国各血站应进行血液中HBsAg和HBV DNA的检测，在实施核酸检测试剂批签发之前，HBsAg应采用2遍血清学检测和1遍核酸检测，血清学检测应采用2个不同生产厂家的试剂。由于各血站实验室对于HBsAg ELISA试剂的选择不尽相同，检测策略存在一定差异，加之实验室人员、设备、环境等因素的影响，各血站实验室HBsAg的检测情况存在差异。本次研究选用四个厂家试剂进行检测性能比对，计算每种试剂的符合率、批间、批内精密度、灵敏性和特异性以及血清盘等指标，为血站实验室抗-HBV筛查试剂的选择提供选择依据。现将结果报告如下：

1  材料与方法

1.1 标本来源   来自北京康彻斯坦生物技术有限公司的HBsAg质控品（浓度为0.2IU/mL，批号202003003)和乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）血清盘，室间质

评HBsAg有反应标本9个（2031,2032,2034,2035,202011,202013,202014，

EQASBS2054,EQASBS2055)

1.2  试剂与仪器   全自动酶联免疫分析系统（Microlab FAME24/20,瑞士Hamilton)；HBsAgELISA检测试剂盒：试剂一（北京吉比爱，批号20200102，以试剂一表示）、试剂二（北京万泰，批号B20200205，以试剂二表示）、试剂三（英科新创，批号2019125137，以试剂三表示）、试剂四（珠海丽珠，批号2019112002，以试剂四表示），所有试剂均为批批检试剂并在有效期内使用。

1.3 检测方法  

1.3.1   批内精密度：在相同条件下，对质控品连续检测20次，计算其平均值、标准差、变异系数，来比较四种试剂的批内精密度。

1.3.2   批间精密度：用质控品连续检测10批，每天平行检测双孔，计算其平

均值、标准差、变异系数，来比较四种试剂的批间精密度。

1.3.3   准确度（对转化血清盘的能力）：用四种试剂分别对整盘血清盘进行检

测，比较四种试剂的结果。

1.3.4   用四种试剂分别对室间质评HBsAg有反应标本进行检测，比较四种试剂的结果。

2   结果

2.1.1四种试剂批内精密度的平均值、标准差和变异系数的比较（表1）

表1	试剂一		试剂二		试剂三		试剂四
平均值	0.22445	3.562	0.29265	2.7875	0.20025	1.9075	0.20375	2.0785
标准差	0.017313217	0.274200656	0.016279665	0.153781501	0.010118671	0.096895562	0.018368111	0.18690305
变异系数	7.71%	7.70%	5.56%	5.52%	5.05%	5.08%	9.02%	8.99%

2.1.2四种试剂批间精密度的平均值、标准差和变异系数的比较（表2）

表2	试剂一		试剂二		试剂三		试剂四
平均数	0.21075	3.1995	0.26755	2.5485	0.22205	2.115	0.22575	2.288
标准差	0.021762066	0.390966431	0.031517416	0.29967107	0.041970793	0.400081242	0.037064639	0.327560681
变异系数	10.32%	12.21%	11.78%	11.76%	18.90%	18.92%	16.42%	14.32%

2.1.3 通过乙型肝炎表面抗原（HBsAg）血清盘的阴性样本，以及不同背景下的阳性样本，分析灵敏度样本以及精密度样本可以更客观的比较出四种试剂的灵敏度、特异性以及准确度。

3   讨论

在本验证过程中，首先用阴性和阳性标本进行了四种试剂的重复性检测，

均符合要求，结果一致。准确度、符合率、灵敏度和特异性以及漏检率都是诊断试剂的评价指标。血站的血液筛查是以尽可能不漏检为目的，因此对诊断试剂的灵敏度要求较高。与此同时试剂还需要有较好的特异性，如果特异性太低，可能出现较多假阳性结果，使血液报废或献血资源流失。符合率是正确标本数与评估标本数之比，综合了灵敏度和特异性两个指标。

     通过四种试剂对血清盘的转化能力比较发现，强阳性和阴性标本并无区

别，在不同浓度的比较中，试剂二的准确度高，试剂三出现了漏检.这样在平常实验室做献血者标本时会发现单试剂有反应性样本比较多，但目前国内采供血机构一般不对血液筛查ELISA不合格结果进行确证，虽然《血站技术操作规程（2019版）》开始实施归队政策，但也会导致很大一部分献血者流失。

参考文献

[1]王新梅，臧亮，邓雪莲等.化学发光和酶联免疫2种检测系统检测HBsAg 情

况分析.中国输血杂志，2020,33（3）：222-226.

[2]陈剑锋，李英莲，常乐等.两家化学发光系统用于血液筛查HIV的性能评价.

中国输血杂志，2018，31（8）：846-850.

[3]魏兰，王露楠，尹丹等.5种ELISA试剂检测-HCV结果的差异分析.中国输血

杂志，2018,31（2）：113-116.