红背叶质量标准的研究——属于广东省“十二五”规划中药材标准研究科研任务

杨晶琦,邱姗姗

一、概述

红背叶又称红背娘、红灵丹、红罗裙、红帽顶【1】【2】，为大戟科山麻杆属红背山麻杆Alchornea trewioides（Benth.）Muell. Arg.以根、叶入药。《全国中草药汇编》（下册）收载，《中药大辞典》（上册）收载，《中华本草》收载，《广东中药志》（第二卷）收载。历届《中国药典》均未收载，《广东省中药材标准》（第一、二册）均未收载。本文参考相关文献[3]，对大戟科山麻杆属红背山麻杆Alchornea trewioides（Benth.）Muell. Arg.的叶从药材的“性状”、“粉末显微”、“薄层色谱”、“水分”、“总灰分”和“浸出物”共6方面进行研究，建立了质量标准。结果重现性好，能为该品种的质量管理提供技术依据。

二、方法与结果

【性状】对收集到的样品5批进行性状鉴定，均为红背叶，性状按实际样品进行描述，描述特征见正文。  

【化学成分】叶中含黄酮苷、酚类、氨基酸、有机酸、醣类等。[4]

【鉴别】

拟定了本品的粉末显微鉴别和薄层色谱鉴别。

1、粉末显微特征：

本品粉末灰绿色。主要显微特征如下：

                   

图1、非腺毛（×40）                         图2、草酸钙簇晶（×40）

图3、表皮细胞、气孔（×40）                   图4、栅栏细胞（×40）

图5、晶纤维（×40）                             图6、纤维（×40）

图7、螺纹导管（×40）                    图8、具缘纹孔导管（×40）

2．薄层色谱鉴别

红背叶中只知道含黄酮苷、酚类、氨基酸、有机酸、醣类，目前还不知道具体的单体成分。因此，只能建立以红背叶对照药材为对照的相应的薄层色谱鉴别方法。

（1）仪器与材料

仪器： WFH—201BJ紫外可见透射反射仪（上海精科实业有限公司）

试剂： 高效硅胶G预制板（青岛海洋化工厂分厂，批号：20150708，规格：10×20cm）；普通硅胶G预制板（默克化工技术(上海)有限公司，批号：HC41642056，规格：10×20cm）；硅胶G自制板（硅胶G，青岛海洋化工有限公司分厂，批号：0131016；玻璃板：10×20cm，涂布厚度：50mm）；甲酸乙酯，环已烷，甲酸，磷钼酸，乙醇，甲醇，石油醚（30～60℃）均为分析纯。

供试品：红背叶（批号20141010，20141016，20141023，20141029，20141103），

   红背叶对照药材：广东药科大学刘基柱副教授鉴定，鉴定编号2015006。

（2）方法与结果

供试品溶液制备：取本品粉末1g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用石油醚（30～60℃）洗涤2次，每次20ml浸泡洗涤3分钟，静置，弃去石油醚液，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

对照药材溶液制备：取红背叶对照药材1g，同法制成对照药材溶液。

薄层板：手工自制硅胶G，高效硅胶G预制板，普通硅胶G预制板。

点样：供试品溶液与对照药材溶液分别点样5μl

色谱条件选择：曾以环已烷—乙酸乙酯—甲酸（10：8：0.5）为展开剂，硅胶G板为薄层板，，效果不够理想，最后以环已烷—甲酸乙酸—甲酸（10：8:0.3）为展开剂，硅胶G板为薄层板效果最好。

展开剂：环已烷—甲酸乙酯—甲酸（10：8：0.3）

展开方式：上行展开

显色剂：5%磷钼酸乙醇溶液，90℃加热至斑点清晰。

检视：日光下检视

结果：供试品色谱中，在与红背叶对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。见图16。

 

1   2   3   4   5  6 

                           图16、红背叶薄层色谱图

点样顺序：1、样品1（批号20141010）

                          2、样品2（批号20141016）

                          3、样品3（批号20141023）

                          4、样品4（批号20141029）

                          5、样品5（批号20141103）

             6、红背叶对照药材（广东药学院刘基柱教授鉴定，鉴定编号2015006）

（3）方法学考察

不同薄层板的比较：选取不同品牌的高效硅胶G预制薄层板、普通硅胶G预缺勤薄层板和自制硅胶G薄层板（以0.5%羧甲基纤维素钠为黏合剂），分别按拟定的试验方法试验。结果表明，三种薄层板均能达到鉴别要求，其中默克硅胶G预制薄层板斑点相对更集中，分离度较好，色谱效果更佳。见图17～20。

 

 

 

1   2   3   4   5   6                        1  2   3   4   5   6

图17、海洋硅胶G高效预制板                    图18、默克硅胶G普通预制板

（注：1-5为样品，6、红背叶对照药材）

1    2    3    4    5    6     

  图19、手工自制硅胶G板                

（注：1-5为样品，6、红背叶对照药材）

不同温度的比较：取点样后的薄层板，分别在低温4℃和常温25℃的温度环境下进行展开。结果表明该方法对不同温度的适应性较好，详见图20、图21。

 

1   2    3   4   5   6                      1    2    3   4   5   6

图20、低温（4℃）展开效果                   图21、常温（25℃）展开效果

（注：1-5为样品，6、红背叶对照药材）

不同湿度的比较：取点样后的薄层板，分别在18%和75%的湿度中展开。结果表明该方法对不同湿度环境适应性较好，详见图22、图23。

 

 

1    2   3    4   5   6                       1   2   3   4   5   6

图22、低湿（18%）展开效果                    图23、高湿（75%）展开效果

（注：1-5为样品，6、红背叶对照药材）

【检查】

1、水分

照水分测定法（《中国药典》2010年版一部附录Ⅸ H第一法）测定。实测样品5批，结果为9.9%～10.3%,平均值10.1%。以平均值的120%为限，规定本品水分不得过13.0%。

2、总灰分

照灰分测定法（《中国药典》2010年版一部附录Ⅸ K）测定。实测样品5批，结果为7.4%～8.2%,平均值7.7%.以平均值的120%,规定本品总灰分不得过9.0%.

【浸出物】

分别以乙醇、稀乙醇和水为溶剂，分别照醇溶性浸出物和水溶性浸出物项下的热浸法（中国药典2010年版一部附录Ⅹ A）测定1批样品的浸出物含量，结果三种溶剂测得的浸出物分别为20.1%、24.3%和28.3%，采用水为溶剂的浸出物最高。故选用水为测定本品浸出物的溶剂，并以水测定结果平均值的80%为限，规定本品浸出物不得少于23.0%。

结果   鉴于上述研究结果，拟定本品的质量标准如下：

【性状】本品叶皱缩，边缘多内卷，表面黄绿色或棕绿色，背面灰绿色。完整叶片展平后呈阔卵形，长8～18cm，宽7～15cm，顶端渐尖，基部浅心形或近平截，边缘有不规则的细锯齿，上面近无毛，下面被柔毛，基出脉3条，叶脉于背面隆起；叶基表面与叶柄相连处具2枚线状附属物，叶基背面与叶柄相连处具4个斑状腺体。叶柄长6～16cm，表面黄色或紫红色，质脆。气微香，味甘。

【鉴别】

（1）本品粉末灰绿色。单细胞非腺毛众多，长115～275μm，直径10～35μm， 表面具微细疣状突起。草酸钙簇晶众多，存在于薄壁细胞或散在，常数个排列成行，直径10～60μm，棱角大多锐尖。表皮细胞形状不规则，垂周壁深波状弯曲。气孔平轴式，直径20～28μm，副卫细胞2个。栅栏细胞1列，长20～45μM。纤维较少，直径5～10μM，壁较厚，有的纤维周围薄壁细胞含草酸钙簇晶，形成晶纤维。导管主为螺纹，直径10～28μm，偶有具缘纹孔导管。

（2）取本品粉末1g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用石油醚（30～60℃）洗涤2次，每次20ml浸泡洗涤3分钟，静置，弃去石油醚液，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取红背叶对照药材1g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板，以环已烷—甲酸乙酯—甲酸（10：8：0.3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%磷钼酸乙醇溶液，在90℃加热至斑点清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，应显相同颜色的斑点。

【检查】水分  不得过13.0%（《中国药典》2010年版一部附录Ⅸ H第一法）

     总灰分   不得过9.0%(《中国药典》2010年版一部附录Ⅸ  K)

【浸出物】照水溶性浸出物测定法项下的热浸法（《中国药典》2010年版一部附录Ⅹ A）测定，不得少于23.0%。

参巧文献

[1]《全国中草药汇编》编写组 ，《全国中草药汇编》（下册），北京：人民卫生出版社，1978：276

[2]《广东中药志》编委会，《广东中药志》（第二卷），广州：广东科技出版社，1996：365

[3]《国家药典委员会》，《中国药典》2015年版四部，北京：中国医药科技出版社，2015：30

[4]《江苏新医学院》，《中药大辞典》（上册），上海：上海科技出版社，1986：1005

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