光果甘草地上部分中光果甘草定的含量测定

徐建军1     ,代友彪1, ,  ,刘文君2  ,晁泽阳2     ,来海中3

【摘要】目的：建立测定光果甘草地上部分中光甘草定含量的测定方法。方法∶采用高效液相色谱法进行测定。结果∶地上部分光甘草定含量在0.08402-0.4201mg/ml范围内,峰面积值与浓度有良好的线性关系（r=0.998）。结论∶该方法简单、结果准确，适用于光果甘草地上部分光甘草定的含量测定。

【关键词】光果甘草地上部分 光甘草定 含量测定

光果甘草(Glycyrrhiza.glabra L.)为豆科 (Leguminosae)甘草属(Glycyrrhiza L.)多年生植物[1]。在我国主要分布在新疆。其地下部分为一种传统中药，是提供甘草甜素和甘草酸的主要原料植物之一，光甘草定(Glabridin)是光果甘草中的主要异黄酮类成分之一，也是研究最多的甘草黄酮之一；因其具有美白和高效抗氧化的能力，在国际上被用于高档美白化妆品中，素有“美白黄金”之称[2-4]。与光甘草定生物活性最相关的研究主要为其抗炎、抗动脉粥样硬化、雌激素类似作用和能量代谢调控[5-8]，而这一切活性主要源于其能下调细胞内活性氧水平、与抗氧化效应物结合、作用于雌激素受体并可能作为一种植物来源的选择性雌激素受体调节剂。有文献比较了光果甘草叶和根乙

醇-水溶液提取物的总黄酮含量、抗氧化性、和酪氨酸酶抑制活性，结果发现光果甘草叶在物质含量和生物活性两方面均表现出一定的优势[5]，为后续研究甘草叶成分奠定基础。但总体而言，地上部分资源的开发和利用研究相对要少，尤其是尚没有文献报导关于其地上部分光果甘草定提取和含量测定的报导。本文仅对光果甘草的地上部分的光果甘草定的含量进行了测定分析，为进一步开发光果甘草地上部分资源提供参考依据。

1. 材料、仪器和试剂

1.1材料及处理

来自麦盖提引种种植的三年生光果甘草8月份采的地上部分，阴干。高速粉碎机分别粉碎，过 40 目筛，装于密封样品袋中室温下储存于干燥器中待用。

1.2 仪器设备

UV-2350型紫外可见分光光度计（尤尼柯（上海）仪器有限公司）；日本岛津液相色谱仪：配SPD-20A紫外检测器、Cosmosil C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱、CTO-20A柱温箱、LC-20AD泵、SIL-20A自动进样器；

 RE-5205旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；

 ME104T电子天平（梅特勒-托利多国际贸易（上海）有限公司）；高速中药粉碎机（瑞安市永历制药机械有限公司）；

40目标准药典筛（上虞市仪器设备厂）；

SHZ-III型循环水真空泵（上海亚荣生化仪器厂）；DZF型真空干燥箱（北京市永光明医疗仪器有限公司）；索式提取器。

1.3试剂

水为纯水，乙腈、甲醇为色谱纯；光甘草定对照品( 纯度: 95% ，美国) ，其他试剂为分析纯。

2.实验方法

2.1样品的处理

取1.1中处理好的光果甘草地上部分60℃干燥过夜的样品100g，加 8 倍量乙酸乙酯回流提取 2次，每次提取1小时；滤过后合并滤液，减压浓缩至干。用甲醇溶解并定容至100ml；取5ml过0.22μm 微孔滤膜，滤液作为样品溶液。

2.2 对照品溶液的制备

称取光甘草定对照品约5 mg，精密称定。置10ml容量瓶中色谱甲醇溶解并定容，再精密吸取1ml于10ml 容量瓶中，用色谱甲醇稀释定容，摇匀即得浓度0.04201 mg/ml 光甘草定对照品，低温保存备用。

2.3 色谱条件

色谱柱为Cosmosil C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱，柱温30℃，流动相为乙腈;2%冰醋酸水溶液（pH3）（体积比54∶46）;检测波长 280nm;流速1.0mL/min;进样体积10μL。在此洗脱条件，光果甘草定完全出峰，峰形对称，与其他物质的良好分总。按照此色谱条件，光甘草定保留时为6.5min左右。

光果甘草定标准品的高效液相色谱图谱

3实验结果

3.1标准曲线旳绘制

分别移取不同浓度的光甘草定标准溶液量于分析瓶，过微滤膜，按色谱条件进样，绘制标准线。以进样量为横坐标，光甘草定的峰面积为纵坐标绘制标准曲线得回归方程;Y=80003X-148811（r=0.998，n=5），结果表明,光甘草定在0.08402~0.4201mg/ml范围内,峰面积值与浓度有良好的线性关系.

3.2 精密度实验 将浓度为0.0420mg/ ml的对照品溶液按"2.3"色谱条件进样，连续进样6 次测定峰面积，光甘草定对照品的相对标淮偏差 RSD% 为0.93%。

3.2 样品含量测定 将2.1中处理好的样品溶液，按2.3项下平行制备3份样品溶液，按2.3色谱条件进样测定样品峰面积，计算得到3 份样品中光甘草定含量分别为0.05112mg/ml、0.05121mg/ml、0.05115mg/ml，平均值为 0. 0512mg/ml，RSD%为1.39%，表明，重复性良好。


经计算，样品中光果甘草定的含量为：5.12mg/100g。

4讨论

4.1 样品的采收 兴果甘草地上部分在7、8月份最为茂盛，因而选取这个时间进行采集；因是人工种植品种，因而其生长也受栽培条件影响，相关物质的含量也会有所变化。

4.2  通过提取方法和分析方法的建立，对光果甘草地上部分光果甘草定含量的测定，为光果甘草地上部分的开发利用提供了一定的参考价值。

参考文献

[1]国家药典委员会，中国药典2020年版一部[M]，北京，中国医药科技出版社，88-89.

[2] Vaya J, Belinky PA, Aviram M. Antioxidant constituents from licorice roots: isolation, structure elucidation and antioxidative capacity toward LDL oxidation[J]. Free Radic Biol Med,1997,23(2):302-313

[3] Chin WY, Jung HA, Liu Y, et al. Antioxidant Constituents of the Roots and Stolons of Licorice(Glycyrrhizaglabra)[J].J Agric Food Chem,2007,55(12):4691-4697

[4] Belinky PA, Aviram M, Fuhrman B, et al. The antioxidative effects of the isoflavan glabridin on endogenous constituents of LDL during its oxidation [J].Atherosclerosis, 1998,137(1):49-61

[5]木合布力·阿布力孜，热娜·卡斯木，马淑燕等.甘草中光甘草定的提取和抗氧化活性研究[J].天然产物研究与开发，2007, 19(4): 675-682

作者简介：徐建军，男，1972年，博士，研究方向，天然产物开发

通讯作者：来海中，男，1969年，博士，研究方向，民族药新药研发及产业化

项目资助：新疆维吾尔自治区重点研发专项（项目编号：2017B03013-3）。