天然牛黄和体外培育牛黄中不同胆红素含量及比例的初步探究

麻瑾瑾，陈曼萍

摘要：目的：探究天然牛黄与体外培育的牛黄中的胆红素含量差异和比例。方法：本次研究工作在我单位开展，时间为2020年8月——2021年8月，将天然牛黄与体外培育牛黄进行研究，对比分析其胆红素含量及比例差异。结果：体外培育牛黄的胆红素含量与天然牛黄之间的含量存在显著差异，表示为P<0.05，体外培育牛黄的胆红素含量较低。结论：就天然牛黄和体外培育牛黄，在不同类型的胆红素中其对应的含量和比例均不相同，具有较强的专属性，可为鉴别牛黄种类提供参考。
关键词：天然牛黄；体外培育牛黄；不同胆红素；含量；比例

天然牛黄和体外培育牛黄均是我国药典中的重要产品，前者来自于牛科动物的干燥胆结石，可实现熄风，解毒，开窍，清心等功效，是中成药中应用广泛的君药，包括安宫牛黄丸，牛黄解毒片等。但是在实际发展中天然牛黄数量有限，不断有新的替代产品出现，其中体外培育牛黄是重要内容，通过将与牛黄相同来源的新鲜胆汁作为母液，在其中加入去氧胆酸，胆磷，复合胆红素钙等模拟天然牛黄的生成，结构上与牛黄相近^[1]。但在实际使用过程中，还需要临床对天然牛黄和体外培育牛黄进行鉴定，据相关研究数据显示，两种牛黄的不同胆红素种类对应的含量和比例不同。本研究则在此基础上，在我院展开相关研究，作出如下报告。
1资料分析和方法

1.1一般资料

将高效液相色谱仪进行应用，以美国Agilent公司所生产的仪器为主，型号为1260和1100，其中包括四元泵，自动进样器，紫外-可见分光检测器等，并将电子天平进行应用，以美国梅特勒托利多公司生产的MS140ST型号及美国奥豪斯生产的AR3130型号进行应用，选择昆山市超声仪器有限公司生产的KQ5200DB型数控超声波清洗器、德国IKA集团生产的MS3 basic漩涡混合器，同时应用高速离心机，仪器生产厂家为德国Eppendorf公司，对应的型号为5453。胆红素对照品的批号为100077-201808，牛黄与体外培育牛黄来自原料生产企业和武汉健民大鹏药业有限公司，色谱乙腈，二氯甲烷，浓度为36%的乙酸，草酸，乙二胺四醋酸二钠为分析纯等。

1.2研究方法

对照品溶液的制备，对游离胆红素供试品溶液进行制备，选取适量样本，对其进行研磨，为细分状为止，取10mg，将其放置在具塞锥形瓶中，加入二氯甲烷，剂量为50ml，给予密塞，并进行称重，随后震摇混合，给予冰浴超声处理，时间为40分钟，随后给予离心操作，取出二氯甲烷液体，将其应用微孔滤膜进行过滤处理，随后取续滤液，得到游离的胆红素供试品溶液。

部分胆红素供试品溶液的制备：取适量样品，将其研磨为细粉状，取10mg，给予精密称定，并放置在具塞锥形平中，加入5ml浓度为0.2mol/L的EDTA-2Na溶液，给予密封后，采用旋涡混匀，精密加入水饱和二氯甲烷，剂量为50ml，给予密称，对其重量进行确定，随后混匀，进行超声处理，时间为40分钟，随后放冷，进行再次称重，并用水饱和二氯甲烷，对减失的重量进行弥补，并摇匀，给予离心处理，取出二氯甲烷液，用微孔滤膜过滤，取续滤液，得出部分胆红素供试品溶液。

1.3统计学方法

对数据进行统计，主要将SPSS20.0软件进行应用，其中，对计量资料的计算，结果表示以（ ±s）为主，验证以t值为主，而计数资料的统计，比较结果采用（n，%）进行计数，进行验证，则用²值表示，在结果显示数据比0.05小时，表示此次研究计算存在意义。

2结果

体外培育牛黄的胆红素含量与天然牛黄之间的含量存在显著差异，表示为P<0.05，体外培育牛黄的胆红素含量较低。

3讨论

一般情况下，当天然牛黄或是体外培育牛黄被粉碎后，对其进行单独识别，对应的难度相对较大，但是从各胆红素的比例来看，两者之间则存在较为明显的差异。导致这种差异发生的主要因素为两种牛黄的形成机制存在差异，天然的牛黄在自然的生理下生成，对应的生理周期较长，在解释不断溶解的和沉降的情况下，其结合较为紧密，容易导致胆红素沉积积累，而体外培育牛黄的成长周期则相对较短，且形成共价胆红素手动所用新鲜牛胆汁组成的影响，共价胆红素形成几率降低，导致其所占比例较低^[2]。从本次研究结果来看，体外的培育的牛黄与天然牛黄在质量上是较为相近的，两种牛黄中胆红素的差别主要在结合胆红素和价胆红素所占比例方面，因为牛黄类药物主要被应用在口服中，此药物在进入到人体后，会受到酸性胃液环境的影响，导致两种胆红素均出现逐步解离的情况，其所解离出来的胆红素并不会被马上吸收，而是会通过代谢或是其他物质结合，从而促进作用效果的充分发挥，因此，其所游离出来的胆红素并不会具有毒性。与此同时，共价胆红素和结合胆红素在形成难以上的程度，对其在体内的解离程度具有重要影响，共价胆红素比结合胆红素更难解离，因此认为含共价胆红素比例较高的天然牛黄可能存在一种长效机制，而天外培育的牛黄则起效速度更快，这一结论已经在临床中得到证实，可以为临床上更好的应用含牛黄药物提供帮助

^[3]。

综上所述，就天然牛黄和体外培育牛黄，在不同类型的胆红素中其对应的含量和比例均不相同，具有较强的专属性，可为鉴别牛黄种类提供参考，对临床发展意义显著，可推广。

参考文献：

[1] 刘淑, 徐晨霞, 孟亚飞,等. 牛黄降压胶囊中体外培育牛黄的替代使用研究[J]. 现代药物与临床, 2020(8).

[2] 上官康. 浓缩活心丸中体外培育牛黄含量的检测方法:, CN109187803A[P]. 2019.

[3] 程岁寒, 张双庆, 马灿,等. HPLC法测定含体外培育牛黄的小儿氨酚黄那敏颗粒中马来酸氯苯那敏的含量[J]. 中国药品标准, 2019(1):31-36.