高效液相色谱法测定水产品中阿维菌素的残留量

甄江锋

摘要：目的：分析高效液相色谱法在测定水产品中阿维菌素的残留量上的效果，为水产品检测体系奠定良好的基础。方法：利用乙腈提取样品，利用碱性氧化铝SPE柱进行净化，在乙腈溶液衍生化后，利用高效液相色谱法检测得到衍生物，展开数据分析。结果：在高效液相色谱测定水产品检测结果来看，能够看出民享的线性关系，相对标准偏差、检出限、定量限也处于合理范围内。结论：高效液相色谱法在测定水产品中阿维菌素的残留量上的效果较优，灵敏度、重复性均满足药物残留量检测需求，值得大范围推广使用。

关键词：高效液相色谱法；水产品；阿维菌素；残留量

引言：阿维菌素是农业、畜牧业种常见的抗生素类型，在杀菌、杀螨上效果左右能突出，但是接触到各种水体后，会对水体造成污染，还会影响到区域内的水生生物，进而引发食品安全隐患。因此，加强对高效液相色谱法测定水产品中阿维菌素的残留量的研究具有至关重要的价值和意义。尤其是在食品市场日益完善的今天，人们对食品的安全意识也随之提高，相应的检测技术也得到落实。阿维菌素作为水产品检测中的重点指标，需要得到落实。

1.水产品检测的发展现状

目前市面上常用的农业、畜牧业抗生素类型有很多，包括伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素等，因其本身的高效性、安全性、广谱性在水产养殖中也有着广泛的应用。但关于水产品检测中关于阿维菌素方面的研究相对较少，现行的检测方法或多或少存在缺陷，想要打造出高灵敏度、高检测率的检测方法，是现阶段重点。高效液相色谱法在测定水产品中阿维菌素的残留量上效果较优，能够满足水产品阿维菌素的检测需求，其具有的优点包括以下几个方面：第一，样品前期需要进行的处理较为简单；第二，回收率较高；第三，重复性较好。因此，针对高效液相色谱法测定水产品中阿维菌素的残留量展开研究。

2.试验准备

2.1前期准备

在试验过程中需要准备诸多仪器和药品，具体内容包括以下几个方面：

仪器	备注
高效液相色谱仪表 1 试验仪器	Waters 515泵、717自动进样器、2475荧光检测器、Empower色谱工作站
RE-2000旋转蒸发仪
自动高速冷冻离心机	日本HITACHI
20PR-520型
Mettler-TOLEDO	AE-240型精密电子天平
FS-1高速匀浆机
调速混匀器
HGC-12氮吹仪

表 2 试验药品

试剂	参数
阿维菌素标准品	含量96.0%
碱性氧化铝SPE柱	1g、3mL
三氟乙酸酐	含量99%
N－甲基咪唑	含量99%
乙腈、甲醇	色谱纯
无水硫酸钠	分析纯

利用上述试验药品配备出标准储备液和工作液，具体的配备流程如下：

称取出0.010g的阿维菌素标准品，利用乙腈溶解至100mL，就会得到储备液，称取出1.0mL标准贮备液，同样利用乙腈溶解至100mL，就会得到工作液，需要注意的是，两种液体均需要在－20℃的环境中保存，并且保证避光。为了保证对比性分别将三氟乙酸酐、N－甲基咪唑和无水乙腈混合，但体积比不同，前者按照1:2，后者按照等比进行混匀。试验对象包括草鱼、南美白对虾、斑点叉尾鮰三种。为了进一步保证试验结果的准确性，对色谱条件和标准曲线进行了测定，在此基础上，还对样品进行了详细的处理。

2.2样品处理

将所有样品去鳞、去皮、去壳、去头、去附肢，沿着样品背脊取肌肉或者取出可食用肌肉。将取出的肌肉组织绞成糜状，然后放入到小塑料袋中，一般情况下高速匀浆机中5min就可以达到上述效果。同样，存放在－20℃的环境中保存，并且保证避光。在此基础上提取出5.0g的样品，放置在50mL的塑料离心管中，加入15mL的乙腈，经过3min的涡动后，加入5.0g的无水硫酸钠。振荡3min并且保持中速，然后以4000r/min的状态离心10min。残留组织再用15mL的乙腈重复提取，与上清液合并投入到鸡心瓶中。在48℃的环境中减压旋转蒸发成干状。需要注意的是，鸡心瓶中可能含有残留，可以借助6mL的乙腈进行清洗，然后将洗液按照1滴/s的速度经过碱性氧化铝柱，收集相应的过滤液。再一次将过滤液放置在48℃的环境中，利用氮吹仪吹干，配合超声波清洗机将加入0.5mL无水乙腈的过滤液干超声，1min后附着在试管壁上阿维菌素就可以完全地溶解于乙腈溶液。

除了上述操作之外，在对样品进行处理的过程中，还要同时对荧光衍生化进行处理，最为主要的是，这一操作必须要在避光的环境中进行，而且温度要处于室温，确保操作不会被外界因素影响。衍生化试剂A取出0.1mL，装入0.5mL乙腈溶液，混旋30s后，加入衍生化试剂B 0.15mL，盖紧盖子后再次混旋30s，静置15min待其完全反应后加入0.25mL甲醇，再让其反应40min，对其进行过滤，并且进行HPLC-FD测定。

3.试验结果

3.1结果数据

从实际数据结果来看，在标准品浓度10μg/L的状态下，色谱平稳、峰形对称、相对尖锐，保留时长约为7.900min。从标准溶液色谱图来看，在1.0-100.0μg/L的状态下，线性关系较优，可以得到标准曲线为：y=1299.2x+12.363,r=0.9999。按照国家有关规定结合实际测量结果皆可以确定阿维菌素的检测限度。

表 3 检测限

标准限度		实际限度
指标	参数	指标	参数
加标回收率	≥70%	加标回收率	≥78%
信噪比	≥3	信噪比	≥3
相对标准偏差RSD	≤15%	相对标准偏差RSD	≤15%

但需要注意的是，上表中实际限度是在加标量为0.1μg/kg时得到的，因此可以进一步推断出阿维菌素的检测限度。

3.2结果分析

从实际结果可以看出，三种样品中加标回收率均处于80.28%-98.46%范围内，就基本可以证明方法的可靠性，在此基础上，从日间和日内两个变异系数上可以看出该方法的准确度和精密度也得到了基本保证，能够满足残留检测标准。在此基础上对样品展开进一步测定，根据草鱼、南美白对虾、斑点叉尾鮰加标样品色谱图可以进一步展开阿维菌素分析数据明显，可以展开具体的判断。

3.3注意事项

从上述内容来看，在利用高效液相色谱法测定水产品中阿维菌素的残留量进行检测的过程中，标准溶液溶剂的配置非常重要，在实际配置过程中任何细微的环节都会影响到最终的测试结果，需要结合具体情况展开分析，控制温度、控制反应，确保检测可以顺利进行。另外，提取条件、固相萃取柱的选择也非常重要，检出限、回收率以及变异系数也要得到良好的控制，确保数据的准确性。以48℃这一指标为例，如果放置在50℃的环境中，就会导致待测物受到损失。

总结：

综上所述，高效液相色谱法在实际测定的过程中，回收率和精密度等指标满足现行检测技术要求。最为主要的是，其可以在大批量水产品检测中应用。不仅如此，将其和荧光检测器混合使用，能够实现阿维菌素和伊维菌素同时检测使用。根据实际样品检测结果来看，整体效果较优，还需要根据市场发展实际检测需要，对检测内容进行进一步完善。

参考文献：

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