荧光免疫层析快速定量法检测黄曲霉毒素含量在粮油食品质量控制中的应用

陈秋军

摘要：黄曲霉毒素是粮油谷物食品中重点关注的食品安全指标，通过高效液相色谱仪检测10种不同黄曲霉毒素B1含量的花生油，同时用荧光免疫层析快速定量法检测黄曲霉毒素B1含量，进行结果对比。目的:实现黄曲霉毒素B1含量快速检测，提高检验效率。

关键词：黄曲霉毒素 快速 定量检测

随着国家、消费者对食品安全指标的关注程度越来越高，粮油谷物食品中黄曲霉毒素含量是否超标也受到越来越多的重视。黄曲霉毒素主要是由黄曲霉 和寄生曲霉产生的次生代谢产物，在粮油谷物食品中出现黄曲霉毒素的机率较高。它们存在于土壤、动植物、各种坚果中，特别是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麦等粮油产品，是霉菌毒素中毒性最大、对人类健康危害极为突出的一类霉菌毒素。因黄曲霉毒素的危害性较大，在粮油谷物食品质量控制中属于重点控制的食品安全指标。

目前黄曲霉毒素检测方法有：薄膜层析法(TLC)、液相色谱法（HPLC）、免疫化学分析方法、酶联免疫吸附法（ELISA）是目前国内绝大多数检测机构都在使用的方法。由于其检测周期长，程序复杂所需试剂繁多、消耗免疫亲和柱费用较高等缺点已远远不能满足现代检测要求。

随着现代科学技术的不断发展，特别是免疫学生物化学，分子生物学的不断发展人们已创建了不少快速，简便特异，敏感低耗且适用的黄曲霉毒素检测方法。本文的荧光快速检测法，所涉及的仪器和试剂少，步骤简单，是一种先进、快捷、灵敏、准确、高效的方法。

1 材料和试剂

1.1主要仪器和试剂

分析天平、荧光快速测定仪、孵化器、移液枪、检测卡、离心管、振荡器、甲醇

2 检测原理与方法

2.1 检测原理

利用荧光免疫层析快速检测技术，当将待测样品滴加在检测卡加样区时，样品中的黄曲霉毒素B1 与结合垫中荧光微球标记的黄曲霉毒素B1 抗体结合并通过毛细作用向前层析，到达检测区后，检测线T1 和T2 上固定的黄曲霉毒素B1 抗原与剩余未结合的荧光微球标记黄曲霉毒素B1 抗体结合。反应结束后，使用荧光定量快速检测仪读取T1、T2 和C 线的荧光强度并计算(T1+T2)/C 值，通过仪器内置的标准曲线即可计算出样品中黄曲霉毒素B1 的含量并根据参考值判断阴阳性。

2.2 样品提取

准确称取5.0±0.05g 混合均匀的样品（或离心后的上层液体）于50mL 离心管中，加入25mL 8:2甲醇水提取，振荡提取5min。提取结束后，4000rpm 离心2min（如未配置离心机，可静置3-5min 待分层明显），取100μL 上清液，加入到600μL 样品稀释液中，混匀备用。

2.3 样品检测

从包装袋中取出黄曲霉毒素B1荧光定量快速检测卡，水平置于检测卡恒温孵育器上，打开包装后请立即使用；用移液枪吸取稀释后的待测液100μL 加到检测卡上的加样孔中，开始计时孵育8 min（盖上孵育器盖）；孵育结束后，点击荧光定量快速检测仪屏幕上“标准曲线”，选择样品类型所对应的标准曲线后，将检测卡插入荧光定量快速检测仪中，按读数键或者触摸屏幕读数即可。

2.4 结果对比

为验证其检验结果的准确性，艾地盟将同一样品进行两种方法检测结果进行了对比分析，具体如下表所示：

样品	HPLC法（ug/kg）	荧光免疫层析快速定量法检出（ug/kg）
序号	(检出限0.1ug/kg)	(检出限1.0ug/kg)
1	1.35	1.39
2	2.56	2.51
3	3.50	3.62
4	4.36	4.43
5	5.00	5.16
6	8.71	8.83
7	10.23	10.59
8	12.81	13.03
9	15.69	15.93
10	22.31	23.19

2.5 结论

通过以上结果比对分析，荧光免疫层析快速定量法结果与液相定量结果基本一致，可用于粮油食品中黄曲霉毒素B1检测的控制。此法通过实际应用，快速定量检测可在15min内完成，与HPLC法相比可节约成本80%。可以通过快速定量检测、HPLC法定期验证相结合，有效解决了植物油黄曲霉毒素B1检测工作耗时长、成本高的问题，有助于提高日常检测效率。

参考文献

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[2]王晶，等.免疫亲和层析净化高效液相色谱法测定酱油醋中黄曲霉毒素B1仪器与运用，2003，96-100.

[3]潘崴,庞广昌,张昀.黄曲霉毒素与食品安全[J].食品研究与开发,2004,(6).