高效液相色谱法测定注射用多西他赛的含量

杨耀 张圆圆

摘要：目的：采用高效液相色谱法测定注射用多西他赛中多西他赛的含量。方法：色谱柱为Hypersil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-水(60∶40)为流动相，检测波长232nm，流速1.0 mL/min，柱温为30℃。结果：多西他赛含量为标示量的97.2％，平均加样回收率为98.9％，RSD为0.9%。多西他赛保留时间7.8min左右，在6.0～60.0 mg/L范围内，多西他赛浓度与峰面积的线性关系良好(r＝0.9999)。结论：采用高效液相色谱法测定注射用多西他赛中多西他赛的含量，操作简单，灵敏，重复性好，结果准确可靠，适用于注射用多西他赛的质量控制。

关键词：高效液相色谱法；注射用；多西他赛；含量测定

多西他赛 (docetaxel)是一种从紫杉针叶中提取并经半合成的紫杉醇衍生物，其化学结构与紫杉醇相似，近年来用于治疗多种恶性肿瘤，被认为是迄今疗效最显著的抗癌药物之一。 其抗肿瘤机制与紫杉醇相同，都是通过促进细胞微管聚合，阻止微管正常的生理解聚，影响细胞有丝分裂过程，使微管蛋白结构稳定，抑制癌细胞的有丝分裂和增殖，对多种肿瘤细胞，均有良好的生长抑制和诱导凋亡的作用。多西他赛作为一种紫杉醇类抗肿瘤药物，体外抗癌活性可达紫杉醇的10倍 ，主要用于乳腺癌、非小细胞肺癌和卵巢癌等的治疗，并取得了较好疗效。由于多西他赛价格相对较贵，为保证临床用药安全和合理用药，本研究建立了高效液相色谱法测定注射用多西他赛的含量，从而对多西他赛的质量进行监督与控制。

1仪器与试药

1.1 仪器 岛津LC-2010A高效液相色谱仪；岛津SPD检测器；METTLER TOLEDO AG135十万分之一电子天平。

1.2 试药 多西他赛（齐鲁制药有限公司生产，规格：1mL，20mg），多西他赛对照品（中国药品生物制品检定所提供），水为重蒸馏水，甲醇、乙醇为分析醇，乙腈为色谱醇。

2.多西他赛的含量测定

2.1 色谱条件选择

2.1.1检测波长的选择 取多西他赛原料、注射液适量，分别加流动相溶解并稀释，制成10μg/mL的供试液A和供试液B，在波长190～400 nm范围内测定紫外特征吸收，供试液A和供试液B的紫外特征吸收光谱见图1和图2.

由图1和图2可以看出，供试液A和供试液B的紫外特征吸收光谱均在192和232 nm波长处均有最大吸收，为避免溶剂的末端吸收，因此选择232 nm为本法的检测波长。

 2.1.2流动相的选择 观察不同比例的甲醇-水、乙腈-水系统作为流动相时色谱峰的状况，结果显示乙腈-水系统下，峰形较好，理论塔板数较高，流动相乙腈-水（v/v＝3：2）时达峰时间适当，因此以此为依据。

 2.1.3柱温的选择         对柱温的选择方面，分别测定了在15、20、25、30、35℃柱温时的色谱图，通过比较各种柱温下的色谱图，发现在30℃的柱温下峰形和半峰宽相对都比较好，因此选择30℃。

因此，色谱柱为Hypersil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm),，检测波长232nm，流速1.0mL/min，柱温30℃，流动相乙腈：水（v/v＝3：2），进样量10μL。

2.2 标准曲线绘制 精密称取干燥至恒重的多西他赛对照品2.00mg，置10mL容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀。分别进样5、10、20、30、50μL。以峰 面积为横坐标，进样量（μg）为纵坐标，得回归方程Y＝0.020547＋ 4.05424 x 10^6X（r ＝0.9999）。结果表明多西他赛的进样量在1~8μg 与峰面积呈良好的线性关系。

2.3 供试品溶液的制备 精密量取多西他赛样品100μL，置10mL容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀。经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液2ml，进样10μL，测得峰面积，计算多西他赛含量。多西他赛含量为标示量的97.2％。

2.4 精密度 吸取多西他赛对照品液10μL进样，连续5次，测量峰面积，RSD=0.92％。

2.5 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于0、1、2、4、6、8h进样测定，计算得尺RSD=1.29％，供试品溶液在8h内稳定。

2.6 加样回收率 取“2.3”项下处理的多西他赛样品6份，分别加入多西他赛对照品液1mL，计算得平均回收率98.9％，见表1。

表1.加样回收率试验数据

序号	样品（μL）	加入对照品（mg）	测得量（mg）	回收率(%)	平均回收率(%)	RSD(%)
1	100	0.20	0.199	99.5		0.9
2	100	0.20	0.197	98.5	98.9
3	100	0.20	0.196	98
4	100	0.20	0.198	99
5	100	0.20	0.200	100
6	100	0.20	0.197	98.5

3.结果

多西他赛保留时间7.8min左右，在6.0～60.0 mg/L范围内，多西他赛浓度与峰面积的线性关系良好(r＝0.9999)，多西他赛含量为标示量的97.2％。平均加样回收率为98.9％，RSD为0.9%。

4.讨论

多西他赛作为为一种紫杉烷类抗肿瘤药物，其抗肿瘤效果和毒副作用明显优于紫杉醇, 近年来其在抗肿瘤领域的研究与应用越来越广，广泛用于乳腺癌、肺癌、前列腺癌等多种肿瘤的治疗。但由于多西他赛是脂溶性物质，水溶性很差，市售的注射用多西他赛中的增溶剂 Tween 80 和 13%乙醇易引起过敏反应，传统的多西他赛制剂存在毒性大等问题，限制了其临床应用。

多西他赛是由浆果紫杉的针叶中提取的前体物，再经半合成所得的一种紫杉烷类抗肿瘤药物，被称为紫杉醇的第二代产品，其抗癌活性比紫杉醇稍高，对于紫杉醇耐药的细胞，其活性至少要比紫杉醇高5倍。其作用机制，是通过干扰细胞有丝分裂及分裂间期细胞功能所必需的微管网络而起到抗肿瘤作用，具体来讲是通过与构成细胞骨架主要成分的β微管蛋白N 末端的31个氨基酸残基，及中段的217～231 氨基酸残基结合，增加微管微丝间的相互作用，显著稳定微管蛋白构象，致使细胞不能通过有丝分裂检查点，停止在有丝分裂G2/M 期结合点，形成稳定的非功能性微管束，达到破坏肿瘤细胞的有丝分裂和增殖。它是现有药物中治疗转移性乳腺癌（MBC）和非小细胞肺癌（NSCLC）最有效的单剂化疗药物。

目前多西他赛上市剂型仅为注射液，为黄色或棕黄色粘稠液体，规格有20mg，80mg。每瓶20mg注射液为将无水多西他赛20mg溶于Tween 80 0.5ml中制成，国内的产品规格是每ml含20mg多西他赛；每瓶80mg注射液为将无水多西他赛80mg溶于Tween 80 2ml中制成。溶剂为13% w/w的注射用乙醇水溶液。现有的注射液尚存在不能随取随用的问题，从冰箱取出后，需要在室温下放置5 min，加入溶剂振摇混合15秒后，还需要放置5 min消除产生的泡沫，稀释后的注射液应在4 h 内使用。

多西他赛属于一种化疗注射液，是紫杉醇类抗微管化疗药物，它可以加强微管蛋白聚合作用和抑制微管解聚，导致形成稳定的非功能性微管束，因而能破坏肿瘤细胞的有丝分裂。多西他赛化疗最可怕的是副作用，面部潮红、皮疹、瘙痒等不良反应严重、迅速，并危及生命，发生过多西他赛过敏性休克并抢救成功的案例。作为一种紫杉醇类新型抗微管化疗药物，多西他赛注射液的主要不良反应为骨髓抑制、胃肠道反应、过敏反应等。大多发生在输液开始后的最初几分钟里，患者就会因多西他赛产生过敏反应，通常表现为面部潮红、瘙痒、皮疹、背疼、胸部压迫感、低血压、弥漫性荨麻疹、支气管痉挛和血管神经性水肿等。

由于单纯化疗副作用很大，常会引起呕吐，脱发，厌食，白细胞降低，免疫力下降等症状，而且对正常细胞也有损伤，大部分病人化疗后副反应明显，恢复慢，生活质量下降且非常容易再次出现复发转移，建议服用红豆杉中草药来弥补化疗的不足，红豆杉中草药是最前沿的抗癌药物。因此，对于肿瘤的治疗，建议联合抗癌中医药进行综合治疗，不但可以抑瘤消瘤，而且可以减轻副作用，提高患者身体免疫力，从而提高治疗的效果。

参考文献：

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[3] 林丹霞；邱希辉；江艺；陈志明；杨钰贤；林慧；多西他赛联合顺铂治疗晚期食管癌的临床观察[J]；中国医院用药评价与分析；2012年02期

通讯作者：杨耀，通讯邮箱：[e-mail]