细菌L型的分离培养探讨

孙广研

摘要：目的：研究感染人体的细菌L型的分离培养，寻找一种培养细菌L型的最佳办法，以便临床鉴定与研究细菌L型。方法：对在普通血液培养过程中瓶底出现轻微暗紫红、上清液微混或瓶壁有少量颗粒状物生长时，分别用血浆分离针抽取可疑培养物同时转种于普通血液琼脂培养基、L型增菌培养基及L型琼脂培养基中培养，观察其生长情况。结果：在血琼脂固体培养基上最终形成了细菌L型，在液体培养基上形成了细菌型、L型、将可疑培养物再用血浆分离针转种于L型细菌液体培养基上又分离出23例L型细菌，使原来一般血培养阳性率提高。结论：经过对细菌L型的分离培养研究，发现血琼脂固体培养基培养对于培养细菌L型有较好的效果，在临床上可以用于鉴定与研究细菌L型。

关键词：细菌；L型；分离培养

Abstract：Objective：TostudytheisolationandcultureofhumanLinfection，tofindabestwaytocultivatebacteriatypeL，sothattheclinicalidentificationandstudyofbacterialL.Methods：theprocessoftrainingthebottomofthebottleslightlydarkpurpleinthecommonblood，supernatantofmicromixingorabottlewallasmallamountofgranularmaterialgrowth，wereusedtoisolateplasmaneedlesuspectedculturewasextractedandimplantedinthecommonbloodagar，LenrichmentmediumandLagarmedium，thegrowthwasobserved.Results：themediumformedLtypeofbacteriainthebloodagar，Linliquidmediumformthetypeofbacteria，andtheSuspiciousculturewithplasmapheresisimplantedinLtypebacteriainliquidmediumandLtypebacteriawereseparatedfrom23，thegeneralpositiverateofbloodcultureincreased.Conclusion：afterseparationofLtypebacteriaculturestudies，foundthatthebloodagarsolidmediumhasagoodeffectonbacterialtypeL.CanbeusedinthetreatmentofbacterialidentificationandstudyoftheLtype.

Keywords：bacteria；L；isolationandculture

1.资料和方法

1.1临床资料

研究所采取的标本均来自于我院近期收治的细菌感染致病的病人，病症包括慢性支气管炎、肺炎、泌尿系统感染、前列腺炎、肝硬化以及扁桃体炎，提取标本共50例。以上病例常规细菌培养多为1次或数次阴性。

1.2材料

L型培养基（L型增菌液、L型琼脂平板）采用改良Kagan氏培养基。用蒸馏水稀释狡卡青霉素注射剂成20mg/ml，取.0lml浸没10张直径smm滤纸片，制成抗生素纸片。

1.3方法

将采取的标本提取液，采取各种接种方法，初步的将提取接种到准备好的培养基上，将培养基放置于适宜细菌L型的温度下，培养一段时间，血平板观察48小时，L型平板在低倍镜下逐日观察5~7天，如发现“油煎蛋”状（L型）、颗粒状（G型）或丝状（F型）菌落，即转种于普通肉汤、血平板等传代返祖，直至恢复细胞壁。待有菌生长后经细胞缺壁染色及菌落形态观察，证实为L型变异后再行返祖鉴定。还可进一步作支原体的生化特性试验，患者血清支原体抗体的血凝试验。为了观察细菌L型形成的菌落，要采取染色的方法来进行观察。染色的主要方法是采取10%的鞣酸固定染色15分钟后用大量的清水进行冲洗，然后0.5%的结晶紫染液对目标培养基进行充分你的染色，大概染色3~5分钟后，开始用油镜进行观察。用型玻棒将分离出的细菌型均匀涂布于型平板上，用取菌环将分离出的细菌型密集划线于普通平板上，贴上药敏纸片置37℃24小时后测量抑菌环径。支原体（mycoplsma）在人的口腔、呼吸道、泌尿生殖器、尿液或其他部位寄生，至今在人体内寄生的支原体可分为13种之多。由于细菌L型菌落与支原体菌落眼球状或油煎蛋状极为相似，故分离的细菌L型菌落，必须与支原体菌落相鉴别。故而有条件的单位还可进行电镜细菌L型超微结构分析细胞壁成分鉴定、DNAG+LCmol%测定，支原体探针杂交以及支原体聚合酶链反应测定。

2.结果

对比观察液体培养基和血琼脂固体培养基形成的菌落，发现在液体培养基上形成有三种不同的细菌在生长，而血琼脂固体培养基上形成了细菌L型。在检出的57株细菌L型中，41株形成颗粒状菌落，15株形成油煎蛋状菌落，1株形成丝状菌落。

3.讨论

随着抗菌药物的应用与滥用，细菌变异为L型的机会有逐渐增多趋势。在临床标本检验时，除进行常规细菌培养外，还应重视细菌L型的培养，以提高细菌检出率.在目前的各类感染性疾病中，细菌L型是其中一种致病性较高的疾病。临床上为了能够及时准确的诊断出患者感染病原体的种类，最稳妥的办法是提取感染患者的提取液进行细菌L型的培养，对一些应用抗生素治疗后仍持续发热、或一些慢性反复再发的感染患者，在做常规细菌培养的同时，应加做细菌L型的高渗培养，以提高病原菌的检出率.观察最终形成了菌落鉴定其是否是严重的细菌L型致病菌。菌L型的形成及产量可受许多因素的影响，故L型细菌的生长现象比一般细菌弱，即使血液培养基底部出现轻微的暗紫红色或瓶壁有少量颗粒状生长，大多亦仅能维持2d便可消失，如不仔细观察或及时转种即可造成漏检。L型细菌转种在一般固体培养基上不能生长，只有在L型液体培养基上经增菌后再转种于L型固体琼脂培养基上才能出现生长良好的菌落，如培养基的营养、琼脂或盐浓度、CO2浓度、诱导剂的种类及浓度和本文结果所示空气中氧含量也影响细菌L型的形成。所以在诊断过程中有着很大的漏洞，为了能够避免细菌L型漏诊造成的损害，我院进行了细菌L型的分离培养试验，寻求一种鉴别培养细菌L型的最佳办法。经过本次的试验发现，细菌L型一般生长在高渗透性的培养基上，所以在临床上诊断患者的过程中，经过常规的培养基培养后，若L型菌显示为阴性，可以让其在血琼脂培养基上进行培养，观察是否会形成细菌L型的菌落，这样可以一定程度上提高细菌L型的检出率。

经过本次的研究，血琼脂固体培养基对于分离培养细菌L型具有极其明显的效果，在临床的检验中，如果出现疑似细菌L型感染的患者，可以进行血培养或液体培养，一旦出现L型细菌生长，立即进行具体菌种的鉴定工作，这样能够有效的提高细菌L型的诊断与治疗。治疗选用破坏细胞壁的抗生素时，剂量应充分足量，以期彻底破坏细胞壁及其菌体，不使其变为L型.若遇有反复发作、迁延不愈或慢性感染病人，可能是细菌L型感染时，则考虑试用抗菌药物联合治泞。

参考文献：

[1]佘晓玲，王涛，丁文静，吴文娟，潘耀振，汤可立，王丹霓，王和.猪胆囊中沙门菌L型的分离培养与invA基因检测[J].动物医学进展，2015，03：25-28.

[2]孙亮亮，王和.猪胆汁体外诱导培养物和胆囊中鼠伤寒沙门菌L型的检测[J].贵州农业科学，2015，08：181-184.

[3]刘欣.细菌L型的分离培养探讨[J].人人健康，2016，08：210+180.