GSTP1在胃癌组织中表达及临床病理学意义

付强1闫海2

1辽宁省盘锦市第一人民医院普外科124010;

2辽宁省沈阳市中国医科大学附属第一医院普外四科110001

【中图分类号】R735.2【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）41-0024-03

【摘要】目的探讨胃腺癌及癌旁组织中谷胱甘肽S-转移酶P1(glutathioneS-transferaseP1,GSTP1)表达水平及临床病理学意义。方法应用免疫组织化学方法检测75例原发性胃腺癌、38例癌旁正常组织石蜡标本中GSTP1蛋白表达水平，观察其与胃癌病人临床病理学参数的关系。结果GSTP1在75例胃腺癌组织中有46例呈高表达；明显高于癌旁正常组织表达水平（x2=4.852，P=0.028），GSTP1表达与胃腺癌患者年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度、分化程度及淋巴结转移均无明显相关性（P>0.05），但与患者预后相关(χ2=3.899,P=0.048)。结论GSTP1在胃腺癌中表达上调，并与胃腺癌患者预后相关。

【关键词】胃腺癌及癌旁组织谷胱甘肽S-转移酶

胃癌是全世界最常见的恶性消化道肿瘤之一,并在癌症死亡病因中名列第二位[1]。胃癌的发生是癌基因的激活、抑癌基因的失活,以及细胞周期调节因子失控等多因素、多途径共同作用的结果。谷胱甘肽S-转移酶(glutathioneS-transferase,GST)是一组分布广泛的多功能同工酶,谷胱甘肽S-转移酶P1(glutathioneS-transferaseP1,GSTP1)是谷胱甘肽转移酶超基因家族中的重要成员，与肿瘤的关系甚为密切[2]。研究发现，GSTP1广泛存在于多种恶性肿瘤组织中，如喉癌、乳腺癌、消化道肿瘤、前列腺癌等[3-9]。但其在胃腺癌中研究鲜有报道，本文应用免疫组化技术检测GSTP1在胃腺癌及癌旁组织中表达，并探讨其临床病理学意义。

一.材料和方法

1.材料

收集2001年1月至2011年12月我院具有完整临床资料的原发性胃腺癌手术切除标本75例，癌旁正常组织38例，其中50例有完整随访资料。GSTP1羊抗鼠单克隆抗体购自美国SantaCruz公司（sc-66000）。SP法免疫组织化学试剂盒、DAB显色液购自福州迈新公司。

2.方法

免疫组织化学采用SP法：所有组织标本均经10%福尔马林固定,常规石蜡包埋，4μm厚连续切片,以二甲苯脱蜡、梯度乙醇水化。3%过氧化氢室温15min去除内源性过氧化酶。pH7.4的PBS清洗后，置于pH6.0的柠檬酸缓冲液121℃高压热抗原修复2min，自然冷却后，PBS清洗。滴加山羊血清，室温封闭20min。滴加一抗GSTP11：200，PBS代替一抗作为阴性对照。4℃孵育过夜。次日室温放置30min后，PBS清洗，滴加鼠二抗，37℃10min。PBS清洗，滴加链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶，37℃10min。DAB显色，苏木素复染，盐酸酒精分化后常规脱水、透明，封片后于光学显微镜下观察结果。

二.阳性结果判定

每张切片随机选取5个高倍视野,计数100个细胞中的阳性细胞数,按阳性细胞所占比例:<10%计0分,10%-50%计1分,51%-74%计2分,75%计3分。染色强度：无着色0分；浅黄色1分；黄或深黄色2分；褐或棕褐色3分，取两项评分相加,<3分为低表达，﹥3分为高表达。

三.统计学处理

采用SPSS13.0统计软件，配对的癌与癌旁组织蛋白表达差异比较采用配对t检验。GSTP1蛋白表达水平与患者临床病理学参数的关系采用卡方检验。Kaplan-Meier计算累积生存率，Log-Rank进行生存时间差异检验；P<0.05差异有统计学意义。

四.结果

1.GSTP1蛋白在胃腺癌组织中表达

GSTP1在胃癌旁组织中表达弱或者缺失（图1AB），在腺癌组织中呈强表达（图1CD），表达部位位于胞核及胞浆（图1A-D）。GSTP1在75例胃腺癌组织中有46例呈高表达；在38例癌旁组织仅15例呈高表达，两者比较有明显统计学差异（x2=4.852，P=0.028）。

图1.GSTP1蛋白在胃癌旁正常组织呈弱表达或表达缺失A（x200）、B（x400）；在胃腺癌中呈强表达C（x200）、D（x400）。

2.GSTP1蛋白表达与胃腺癌患者临床病理学参数的关系

通过卡方检验，GSTP1蛋白表达与胃腺癌患者年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度、分化程度及淋巴结转移均无明显相关性(P>0.05,表1)。

表1:GSTP1在胃腺癌组织表达与患者临床病理学参数关系

3.GSTP1蛋白表达与胃腺癌患者术后生存关系:GSTP1高表达的胃腺癌患者术后中位生存时间（55月）明显低于GSTP1低表达患者（75月）(χ2=3.899,P=0.048)（图2）。

图2.GSTP1表达与胃腺癌患者预后关系

五.讨论

GSTP1的表达与肿瘤发生的关系尚存在争议，一方面，GSTP1在喉癌、卵巢癌及非小细胞癌中呈高表达[3,10，11]，但另外一些研究表明，GSTP1低表达或缺失能够促进肿瘤的发生[7,9]。此外，GSTP1可增强癌细胞对抗肿瘤药物的代谢与转运能力，使细胞产生抗药性。提示GSTP1与肿瘤中发生、发展及化疗耐药密切相关[12]。本研究通过免疫组化发现，GSTP1在胃腺癌中呈高表达（46/75，61.3%），并且在胃腺癌中表达明显高于癌旁正常组织。GSTP1作为抑癌基因，在癌变组织内的高表达可能是一种诱导表达的结果,即其在肿瘤恶性转变过程中被诱导激活而获得较高的表达量，GSTP1基因的转录激活是化学致癌早期或启动阶段的重要分子事件,很可能是一个启动信号或标志[13]。

GSTP1在胃腺癌中表达上调，但与胃腺癌患者临床病理学参数均没有明显相关性。华东[14]等研究GSTP1mRNA在66例胃癌中表达同样发现，GSTP1表达与胃癌临床病理学参数也没有明显相关性，提示单纯检测GTP1表达可能不能作为判断肿瘤侵袭等生物学行为的预测指标。

最后，本研究发现GSTP1高表达胃腺癌患者较低表达患者预后不良，两者比较有显著统计学差异。华东[14]等通过检测胃癌中GSTP1mRNA同样发现，高表达组无复发生存率和总生存率均显著低于低表达组(P<0.05)。在其他肿瘤如卵巢癌中，COX比例风险模型发现，GSTP1高表达患者无病生存率及总生存率明显降低(log-rankP=0.047andP=0.033)[15]。提示GSTP1表达强弱能够评估肿瘤患者的预后。我们后期将通过增加样本量，完善随访进一步明确GSTP1与胃腺癌患者预后的关系。

综上所述，GSTP1在胃腺癌中表达上调，并与胃腺癌患者预后相关。目前，GSTP1基因多态性以及甲基化研究成为热点。由于CpG岛的甲基化,前列腺癌中GSTP1表达要较正常前列腺细胞明显减少[16]。而GSTP1基因的多态性可以调节肿瘤的易感性,基因的突变使患癌的几率增加,故GSTP1基因多态性的研究对筛选和保护疾病易感人群,并采取有效的干预措施具有重要的意义。GSTP1在胃癌中甲基化及胃癌人群多态性情况正是我们下一步研究方向。

参考文献

[1]ParkinDM,BrayF,FerlayJ,etal.Globalcancerstatistics,2002.CACancerJClin.2005;55(2):74-108.

[2]HayesPC,BouchierIA,BeckettGJ.GlutathioneS-transferaseinhumansinhealthanddisease[J].Gut,1991,32(7):813-818.

[3]UsarekE,KlonieckiM,Osuch-WojcikiewiczE,etal.Expressionofglutathione-S-transferaseisoenzymesinlarynxcancer[J].OtolaryngolPol,2004,58(5):895-898.

[4]ArunBK,GranvilleLA,YinG,etal.Glutathione-s-transferase-piexpressioninearlybreastcancer:associationwithoutcomeandresponsetochemotherapy[J].CancerInvest,2010,28(5):554-559.

[5]俞鹏飞，郭剑民，徐琦.耐药基因相关蛋白在胃癌术后辅助化疗及预后评价中的意义[J].中华胃肠外科杂志，2010,13(4):289-293.

[6]KimSH,KwonHC,OhSY,etal.PrognosticvalueofERCC1,thymidylatesynthase,andglutathione-S-transferasepifor5-FU/oxaliplatinchemotherapyinadvancedcolorectalcancer[J].AmJClinOncol,2009,32(1):38-43.

[7]RitchieKJ,WalshS,SansomOJ,etal.MarkedlyenhancedcolontumorigenesisinApcMinmicelackingglutathioneS-transferasePi[J].ProcNatlAcadSciUSA,2009,106(49):20859-20864.

[8]NelsonWG,DeMarzoAM,DeweeseTL,etal.Preneoplasticprostatelesions:anopportunityforprostatecancerprevention[J].AnnNYAcadSci,2001,952:135-144.

[9]OkinoST,PookotD,MajidS,etal.ChromatinchangesontheGSTP1promoterassociatedwithitsinactivationinprostatecancer[J].MolCarcinog,2007,46(10):839-846.

[10]KolfschotenGM,HulscherTM,PinedoHM,etal.DrugresistancefeaturesandS-phasefractionaspossibledeterminantsfordrugresponseinapanelofhumanovariancancerxengrafts[J].BrJCancer,2000,83(7):921-927.

[11]OguztuzunS,AydinM,DemiragF,etal.TheexpressionofGSTisoenzymesandP53innon-smallcelllungcancer[J].FoliaHistochemCytobiol,2010,48(1):122-127.

[12]RuzzaP,RosatoA,RossiCR,etal.Glutathionetransferasesastargetsforcancertherapy[J].AnticancerAgentsMedChem,2009,9(7):763-777.

[13]王琳,吴逸.GSTP1与肿瘤关系的研究进展.国外医学卫生学分册,2006,33(5):300-304.

[14]华东,黄朝晖,邓建忠.GSTP1、MRPmRNA表达与胃癌辅助化疗预后的关系.肿瘤学杂志,2008,14(5):397-399.

[15]KolwijckE,ZusterzeelPL,RoelofsHM,etal.GSTP1-1inovariancystfluidanddiseaseoutcomeofpatientswithovariancancer.CancerEpidemiolBiomarkersPrev.2009Aug;18(8):2176-81.

[16]KangGH,LeeS,LeeHJ,etal.AberrantCpGislandhypermethylationofmultiplegenesinprostatecancerandprostaticintraepithelialneoplasia1[J].Pathol,2004,202(2):233-240.