南通市应用实时荧光定量核酸扩增技术检测结核分枝杆菌技术前景分析

陆峰马俊锋(通讯作者）王小平符剑

【中图分类号】R52【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2017）05-0394-02

世界卫生组织发布的《2015年全球结核病报告》中指出，我国是九个结核病高负担国家之一，需要加强实验室检测能力[1]。我市各县级结核病定点医院在开展痰涂片和传统细菌培养的基础上，2013年开始通过全球基金结核病项目提供的设备及试剂盒，开展利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术（XpertMtb/RIF），检测患者是否患有结核病，以及是否对利福平耐药[2]。现结合实际情况，就该项技术在县级结核病实验室应用前景进行分析探讨。

1.检测技术介绍

利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术（XpertMtb/RIF）整合了基于定量PCR分子遗传检测所需的3个步骤（样品准备、扩增、检测），将待检样品放入到（XpertMtb/RIF）反应盒中，系统就会自动按照相应的程序运行，实时监测PCR运行情况，一旦PCR完成，检测系统全自动化的软件就会判断出患者是否患有结核病，以及是否对利福平耐药[3]。

试剂：XpertMtb/RIFKit(Cepheid，USA)，SR(samplereagent)(Cepheid，USA)。

XpertMtb/RIF核酸扩增检测流程：取1ml痰标本置放到有螺旋盖的处理管中，然后加入相当于2倍痰标本体积的SR痰标本处理液，旋紧前处理管，在涡旋振荡器上涡旋振荡15～30s，室温静置15min，使痰标本充分液化。打开反应盒，取2ml处理后样品由加样孔缓慢加入反应盒，然后将反应盒放置到检测模块，仪器开始进行自动化检测。反应结束后，在检测系统窗口下可直接观察测试结果。

2.检测方法及优点

结核病的早期诊断及其耐药性的检测，对于控制结核病疫情具有决定性的意义。随着分子生物学的发展，近年来涌现出很多方法用于Mtb的鉴定及其耐药性检测。GeneXpert核酸扩增检测系统是将样品准备、定量PCR扩增和荧光检测集于一身的核酸扩增检测分析系统。只需要在独立的反应孔中加入待检测的生物样品，2h内便能快速检测出患者是否患有结核病，以及是否对利福平耐药。同时由于使用可以密封的一次性反应盒将样品准备所需的所有试剂都提前装入其中，减少了操作过程中污染及环境因素导致的实验结果不精确的可能性[4]。

XpertMtb/RIF是一种可以快速、直接可靠、高特异地检测出结核病患者及是否对利福平耐药的新诊断技术。该技术被WHO誉为结核病诊断中革命性的突破，是WHO在2011年重点推荐的技术。

3.应用情况及前景分析

我市目前共有7台GeneXpert检测设备，均为全球基金耐多药结核病项目下拨，由7家县级结核病实验室常规开展检测。至2015年底，共对612份涂片阳性标本进行了测试，均报告检测出，并发现单耐利福平49份。检测均在原有的生物安全二级实验室内完成，且患者的痰标本检测报告在1个工作日内完成，提示耐利福平的标本在培养后转送至市级结核病实验室开展药敏检测。

该项检测技术的安全性、便捷性、准确性已得到实验室人员及临床医师的认可，但随着全球基金结核病项目完成在我市的实施工作后，检测试剂的免费供给渠道中断，同时由于检测试剂价格昂贵，导致该项检测在我市一度暂停。为解决这个突出的问题，2016年，在南通市及各县（市、区）卫生计生委的大力支持下，分别通过县级财政补助经费及基本公共卫生服务项目采购试剂，并将免费检测对象由原先的涂阳肺结核患者扩大至所有肺结核患者。作为江苏省唯一继续对患者免费开展该项检测技术的地区，不但为涂阴肺结核患者的诊断增加了诊断依据，减轻了患者的经济负担，并为提高我市的结核病病原学诊断能力提供了有力支撑。

在得到经费支持的基础上，该项技术在早期发现传染源、保护健康人群和控制结核病疫情等方面具有重大意义，且可以在县级结核病实验室开展，因此在基层具有较好的临床应用前景。

【参与文献】

[1]WorldHealthOrganisation.Globaltuberculosisreport[R].Geneva:WHO,2015.

[2]唐神结，许邵发，等.耐药结核病学[M]，2014，8(1):103-109.

[3]Varma-BasilM,El-HajjH,ColangeliR,etal.RapdiddetectionofrifamapinresistanceinmycobacreriumtuberculosisisolatesfromIndiaandMexicobyamolecularbeaconassay.JClinMicrobiol,2004,42(12):5512-5516.

[4]张治国，欧喜超，等.利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术检测痰标本中结核分枝杆菌及其耐药性的研究[J].中国防痨杂志，2013，35（1）：13-16.