乙酰半胱氨酸制剂的含量测定和有关物质检查

刘管理1黄德恩2李庆国2张辉珍1

（2广州中医药大学中药学院广东广州510006）

【摘要】目的：建立乙酰半胱氨酸颗粒制剂的含量测定和有关物质检查方法。方法：采用HPLC法，使用DiamonsilC18(2)色谱柱(250mm×4.6mm，5?m)色谱柱，以0.0lmol/L磷酸盐缓冲液(pH=2.15)-甲醇（95:5）为流动相，柱温为30℃，进样量为20μl，检测波长210nm。结果：乙酰半胱氨酸在0.2～2.0mg?mL-1浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系，乙酰半胱氨酸颗粒的平均回收率（n=6）为103.31%；有关物质检查中，供试品单个杂质峰的峰面积占乙酰半胱氨酸主峰面积比例均低于1.5%，符合国家药典的标准。结论：结果显示该方法简便、准确、可靠，适用于产品的质量控制。

【关键词】乙酰半胱氨酸;HPLC;有关物质；含量测定

【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）36-0038-04

Studyonthecontentdeterminationandrelatedsubstancesinspectionofacetylcysteinegranules

LiuGuanli1,HuangDeen2,ZhangHuizhen1.1DepartmentofPharmacy,PeopleHospitalofGuangdongprovince,Guangzhou,Guangdong510080;2GuangzhouUniversityofChineseMedicine,Guangzhou,Guangdong510006,China

【Abstract】ObjectiveAHPLCmethodwasestablishedforacetylcysteinegranulesofitscontentdeterminationandrelatedsubstancesinspection.Methods:TheHPLCchromatographicconditionwere：DiamonsilC18(2)(250mm×4.6mm，5?m)column;0.01mol?L-1phosphatebuffer(pH=2.15)-methanol(95：5)asmobilephase；columntemperaturewas30℃;Theinjectionvolumewas20μl;wavelengthofdetectorwas210nm.Results:Thecalibrationcurvewaslinearintherangeof0.2~2.0mg?mL-1withcorrelationcoefficient0.9996.Theaveragerecovery(n=6)ofacetylcysteinewas103.31%.IntheDeterminationofRelatedSubstances,theareaoftheimpuritypeakslessthan1.5%oftheacetylcysteinepeakarea.Conclusion:Thisresultshowedthatthismethodissimple,accurate,reliableandsuitableforthequalityinspectionofthedrug.

【Keywords】Acetylcysteine;HPLC;Relatedsubstances;Determination

乙酰半胱氨酸为祛痰药类中黏液溶解药，适用于慢性支气管炎等咳嗽有粘痰而不易咳出的患者。由于乙酰半胱氨酸有硫磺样臭味，可引起咳呛、恶心、呕吐、口臭等，故本品将乙酰半胱氨酸制成的颗粒剂，以改善其口味与外观[1-3]。乙酰半胱氨酸原料药极其制剂在生产中容易引入N，N-二乙酰胱氨酸、半胱氨酸、N，S-二乙酰半胱氨酸、胱氨酸等杂质，因此在其质量检查中应考虑对其有关物质进行检查。在参考2015年版《中国药典》、文献研究[4-12]和试验摸索的基础上，采用反相高效液相色谱法，研究该制剂中乙酰半胱氨酸含量测定和有关物质检查方法。与2015版中国药典记载方法相比，本文建立方法无需使用庚烷磺酸钠与盐酸配制pH=1.4的流动相，简化流动相配置流程，减少了流动相批次对分析结果的影响，提高方法适用范围，保护分析柱免受庚烷磺酸钠和过低pH值的伤害。

1.试药与仪器

1.1试药

乙酰半胱氨酸颗粒制剂（自制，规格：0.1g/包，批号：20140701,20140702,20140703）；乙酰半胱氨酸（中国食品药品检定研究院，含量：99.8%，批号140671-201202）；盐酸半胱氨酸（有关物质A）（中国食品药品检定研究院，批号140699-201302）；胱氨酸（有关物质B）（中国食品药品检定研究院，批号140632-200502）；N,S-二乙酰半胱氨酸（有关物质C）（CouncilofEurope）；N,N-二乙酰胱氨酸（有关物质D）（CouncilofEurope）；HPLC级甲醇（ShanghaiANPELScientificInstrumentCo.)；磷酸和磷酸二氢钠均为广州化学试剂厂分析纯试剂。

1.2仪器

LC-10A高效液相色谱仪（SHIMADZUCORPORATION）；N2000色谱工作站（浙江大学智能信息研究所）

2.实验方法与实验结果

乙酰半胱氨酸的含量测定

2.1色谱条件

色谱柱：DiamonsilC18(2)(250mm×4.6mm，5?m)；流动相：0.01mol?L-1磷酸盐缓冲液（磷酸二氢钠2.4g，加水溶解后磷酸调PH至2.15，加水至2000mL）-甲醇（95:5）；检测波长：210nm；柱温：30℃；流速：1mL?min-1；进样量：20?L。

2.2溶液的制备

2.2.1样品稀释液（0.025mol?L-1磷酸盐缓冲液）的制备

精密称取磷酸二氢钠1.5g，加水350mL溶解，用浓磷酸调PH至2.0，加水至500mL。

2.2.2乙酰半胱氨酸对照品储备液

精密称取乙酰半胱氨酸对照品25mg，置于25mL量瓶中，加样品稀释液制成每1mL中含有乙酰半胱氨酸1mg的溶液，摇匀。

2.2.3供试品溶液的制备

精密称取乙酰半胱氨酸颗粒3g，置于25mL量瓶中，加样品稀释液至刻度，摇匀，吸取5mL，置于20mL量瓶中，加样品稀释液至刻度，摇匀，制成每1mL中含乙酰半胱氨酸1mg的溶液。

2.2.4有关物质溶液

分别精密称取盐酸半胱氨酸、胱氨酸、N,S-二乙酰基-L-半胱氨酸和N,N-二乙酰基-L-胱氨酸各25mg，置于25mL量瓶中，加样品稀释液分别制成每1mL中含有盐酸半胱氨酸、胱氨酸、N,N-二乙酰基-L-胱氨酸和N,S-二乙酰基-L-半胱氨酸1mg的溶液，摇匀，即得。

2.2.5阴性溶液

按处方称取除乙酰半胱氨酸以外的其他辅料适量，按处方工艺制成不含乙酰半胱氨酸的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备，即得。

2.3方法学考察

2.3.1专属性试验

在“2.1”项下的色谱条件下，吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20?L，注入高效液相色谱仪，色谱图见下图，阴性无干扰，说明该实验方法的专属性强。

2.3.2标准曲线的绘制精密称取乙酰半胱氨酸对照品100mg，加样品稀释液溶解并稀释至50mL作为对照品储备液。分别精密量取对照品储备液1.0，2.0，5.0，6.0，8.0和10.0mL，用样品稀释液稀释至10mL，配成浓度分别为0.2～2.0mg?mL-1的对照品溶液，按“2.1”项下的色谱条件进样分析，记录色谱图，以峰面积A为纵坐标，以浓度C（mg?mL-1）为横坐标作线性回归，得回归方程为：A=11186329C+127542,r=0.9996。结果表明乙酰半胱氨酸在0.2～2.0mg?mL-1浓度范围内峰面积与测定浓度呈良好的线性关系。

2.3.3精密度实验吸取“2.3.2”项下的5号浓度为1.0mg?mL-1对照品溶液，重复进样5次，每次20?L，测定峰面积，求RSD。详见表2。由表2可知进样5次，乙酰半胱氨酸峰面积的平均值为17767942.6，RSD为0.24%（n=5），说明仪器精密度好。

供试品中单个杂质峰的峰面积均小于对照品溶液乙酰半胱氨酸主峰面积（小于1.0%），各杂质峰面积的小于对照溶液主峰面积的1.5倍（1.5%)。符合国家药典的标准。

3.讨论

本文采用高效液相色谱法建立了乙酰半胱氨酸的含量测定方法，其方法学验证的系统适用性、仪器精密度、方法的重复性等较好，符合药典要求。乙酰半胱氨酸原料药极其制剂在生产中容易引入N,N-二乙酰胱氨酸、半胱氨酸、N，S-二乙酰半胱氨酸、胱氨酸等杂质，因此在其质量检查中应考虑对其有关物质进行检查。本文测定乙酰半胱氨酸颗粒制剂的含量及有关物质,适用于乙酰半胱氨酸颗粒制剂的质量控制。

【参考文献】

[1]国家药典委员会.中国药典2015年版二部[M].北京:化学工业出版社，2015.

[2]程天贵.乙酰半胱氨酸制剂与临床应用研究进展[J].中国生化药物杂志，2007，2(6):430-432.

[3]李长生，扬炯，李清泉，等.乙酰半胱氨酸胶囊止咳祛痰作用的临床研究[J].中国医院药学杂志，1999，19(11):676-677.

[4]国家食品药品监督管理局药品标准[S].YBH08402009.

[5]国家药典委员会.国家药品标准[S].WS1-(X-261)-2003Z-2006.

[6]仵淑红，郭栋，王丽霞，等.HPLC法测定乙酰半胱氨酸颗粒的含量[J].中国药师，2011，14(11):1627-1629.

[7]王芳侠，徐创莉，陈赞民，等.HPLC法测定乙酰半胱氨酸颗粒中有关物质[J].中国热带医学，2007，7(9):1665-1675.

[8]王正俊，周春燕.乙酰半胱氨酸泡腾颗粒中有关物质的测定[J].药物鉴定，2008，17(17):12-13.

[9]杨昭鹏，王国峰，曾文珊，等.乙酰半胱氨酸含量及其相关物质测定方法的研究[J].药物分析杂志，2003，23(3)：189.

[10]吴小曼，纪宇.反相高效液相色谱法测定复方氨基酸注射液中乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸[J].中国生化药物杂志，2003，24(4):194.

[11]曾文珊，杨昭鹏，廖海明，等.复方氨基酸注射液中乙酰半胱氨酸含量测定方法的研究[J].药物分析杂志，2003，23(4):277.

[12]金义光.浅议乙酰半胱氨酸测定方法[J].中国药事，2002(7):430.