山豆根提取物评价性质量研究

林颖怡陈平华

（广州王老吉药业股份有限公司广东广州510450）

【摘要】目的：优选山豆根药材的提取工艺。方法：以提取物中苦参碱的含量为研究指标，采用高效液相色谱法测定其含量；比较水提醇沉法、60℃酸水浸泡醇沉，pH8-9氨水提取醇沉法、60%乙醇加热回流法等不同工艺的差异。结果：60%乙醇加热回流法苦参碱含量较高，苦参碱含量在6.24μg～399.04μg范围里呈较好的线性关系；苦参碱的回收率为100.08%。结论：60%乙醇加热回流法，提取山豆根药材的提取物中苦参碱含量较高，苦参碱转移率最高，提取方法合理、操作简单，适合用于大生产提取工艺。

【关键词】山豆根提取物苦参碱质量研究高效液相色谱法

【中图分类号】R28【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）14-0087-02

EvaluativeQualityStudyforSophoraeTonkinensisRadixEtRhizomaExtracts

LinYinyi,ChenPinghua（GuangzhouWanglaojiPharmaceuticalCompanyLimited,GuangzhouGuangdong510450）

【Abstract】Objective:TooptimizetheextractiontechnologyfortheSophoraeTonkinensisRadixEtRhizoma.Methods:TakingthecontentoftheMatrinewithintheextractsasastudyindex,weuseHPLCtodetermineitscontent.ThenwecomparedifferencesamongWaterextraction-Alcoholprecipitation,60℃Acidwatersoaking-Alcoholprecipitation,pH8-9AmmoniawaterextractionAlcoholprecipitationand60%AlcoholHeatingrefluxmethod.Result:ThecontentoftheMatrinefrom60%AlcoholHeatingrefluxmethodisthehigher.Intherangeof6.24μg～399.04μg,thecontentoftheMatrineshowsagoodlinearrelationshipandtherecoveryis100.08%.Conclusion:Usingthe60%alcoholHeatingrefluxmethod,thecontentoftheMatrinefromtheSophoraeTonkinensisRadixEtRhizomaExtractsisthehigher,withahighestmetastasisrate.Theextractingmethodisreasonable,simpleandsuitableforindustrializedproduction.

【Keywords】SophoraeTonkinensisRadixEtRhizomaExtractsMatrinequalitystudyHPLC.

本品为豆科植物越南槐SophoratonkinensisGapnep.的干燥根及根茎。质坚硬，难折断，断面皮部浅棕色，木部淡黄色。有豆腥气，味极苦，性寒，有毒。具有清热解毒，消肿利咽功能，用于火毒蕴结，咽喉肿痛，齿龈肿痛等症状[1]。在中成药生产中，主要是以山豆根的提取物入药。现代医药研究：①化学成分为生物碱及黄酮化合物。生物碱有苦参碱、氧化苦参碱等；黄酮类化合物包括柔枝槐酮、柔枝槐素、柔枝槐酮色烯、柔枝槐素色烯等。②药理作用有抗癌作用，所含苦参碱、氧化苦参碱对实验性肿瘤均呈抑制作用。③不良反应：过量服用易引起呕吐、腹泻、胸闷、心悸等副作用，故用量不宜过大。脾胃虚寒者慎用[2-4]。我公司产品清热暗疮系列、喉痛片等成方制剂中的山豆根药材均以提取物入药。因此，为完善山豆根药材提取物的提取工艺及纯化方法，提高产品的质量，并适用于企业大产生需求的原则，本实验通过测定苦参碱的含量为指标，提供相关基础数据，评价山豆根提取物的质量。优选出适合的山豆根提取工艺。

1实验仪器、试剂和提取物

高效液相色谱仪：Agilent1200型，DAD检测器；十万分位电子天平：Sartorius-CPA225D；超声波清洗器：Elnasonic-S60H型，乙腈（色谱纯）；水（超纯水）；其余试剂为分析纯，苦参碱对照品（购自中国药品生物检定所，批号为110805-201106，供含量测定用），山豆根药材，山豆根提取物（由本公司提供）。

2提取工艺：采用同一批号的山豆根药材进行进行不同提取工艺

2.160℃酸水浸泡醇沉法：取山豆根药材，粉碎成粗粉，加6倍量用盐酸调成pH=4的盐酸水，加热至60℃保温提取3次，每次1小时，滤过，合并3次滤液，浓缩至相对密度为1.05～1.15（55℃～60℃计），放冷，加入乙醇至药液含醇量达到60％，搅匀，静置24小时，取上清液过滤并回收乙醇，浓缩至相对密度1.25～1.30（55℃～60℃计），即得。

2.2水提醇沉法：取山豆根药材，粉碎成粗粉，加6倍量的水，煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.15（55℃～60℃计），放冷，加入乙醇至药液含醇量达到60％，搅匀，静置24小时，取上清液过滤并回收乙醇，浓缩至相对密度1.25～1.30（55℃～60℃计），即得。

2.3碱水提取醇沉法：取山豆根药材，粉碎成粗粉，加6倍量用氨水调节pH为8-9的碱性水，煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.15（55℃～60℃计），放冷，加入乙醇至药液含醇量达到60％，搅匀，静置24小时，取上清液过滤并回收乙醇，浓缩至相对密度1.25～1.30（55℃～60℃计），即得。

2.4乙醇加热回流法：取山豆根药材，粉碎成粗粉，加6倍量的60%乙醇溶液，加热回流二次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩至相对密度1.25～1.30（55℃～60℃计），即得。

3含量测定方法与结果

3.1色谱条件及系统适应性试验：色谱柱：PhenomenexLuna（4.6mm×250mm，5μm），流动相；乙腈－0.02mol/L磷酸二氢铵溶液（每1000ml中加入十二烷基硫酸钠2g，磷酸1ml），检测波长为205nm，流速：1ml/min；柱温35℃。理论板数以苦参碱峰计算应不低于4000[5]。苦参碱峰与相邻峰之间的分离度均＞1.5。

3.2检测波长确定：采用Agilent1200高效液相色谱仪的DAD检测器，对苦参碱对照品溶液，在200～400nm波长范围内进行光谱扫描，检测结果，苦参碱在205nm处有最大吸收峰，确定苦参碱的检测波长为205nm。结果见附图1。

图1苦参碱光谱图

3.3溶液配制

3.3.1对照品溶液的制备：取苦参碱对照品适量，精密称定，加甲醇配制成每1ml含50μg的溶液，即得。结果见图2。

3.3.2供试品溶液的制备：取山豆根浸膏0.1g，精密称定，置50ml量瓶中，加氨水2ml，再加二氯甲烷－甲醇（40：10）混合溶液40ml,超声处理40min，取出，放冷，用二氯甲烷－甲醇（40：10）混合溶液定容至刻度。摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，蒸干，残渣加流动相溶解并定容至10ml，摇匀，即得[5]。结果见图2。

图2从上至下色谱峰为对照品、供试品溶液

3.4线性关系考察：取苦参碱对照品适量，精密称定。配制成每1ml含6.24μg、12.47μg、24.94μg、49.88μg、99.76μg、199.52μg、399.04μg的溶液，进样量为10μl。以对照品量（μg）为横坐标（x），峰面积为纵坐标（y），绘制标准曲线；得苦参碱的线性方程：Y=15.327x－19.843，R2=0.9999。结果证明苦参碱在6.24～399.04μg范围线性关系良好。

3.5重复性考察：取样品适量，精密称定，按供试品溶液制备方法制备6份，进行测定，计算。苦参碱含量的RSD为1.96%。

3.6稳定性考察：取同一供试品溶液，在0、3、9、12、24h分别进样检测，计算，结果苦参碱含量的RSD为1.61%。结果证明制备的供试品溶液在24h内稳定。

3.7加样回收率考察：取已知含量的山豆根药材提取物适量，精密称定，共6份，置50ml容量瓶中，分别精密加入一定量的苦参碱对照品溶液，按3.3.1、3.3.2项下方法检测，计算回收率，结果见表1。

表1苦参碱加样回收率考察结果

4.2结论：山豆根药材在60℃酸水浸泡提取和60%乙醇加热回流提取含量最高，但60℃酸水浸泡提取的成本费用相对低。

4.3本文所建立的山豆根药材提取物的不同提取工艺及含量测定方法。为山豆根药材提取物的工艺参数与质量标准提供合理的依据。

参考文献

[1]国家药典委员会.中国药典（.2010年版.）一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：25，附录ⅥD

[2]全国中草药汇编[S].北京：人民卫生出版社，2009.

[3]江海燕;王芸;山豆根有效成分、药材与制剂质量研究进展[J];中外健康文摘;2007,07:67-68

[4]沈亮;罗苑;张平刚;袁荣韶;山豆根资源现状及其质量标准研究进展[J];大众科技;2010,05，145-146

[5]邵燕虹;喉痛片质量标准分析与研究[J];中国现代药物应用;2012,07，3-4