HPLC测定黄藤素片有关物质

陈珊丹

【摘要】建立黄藤素片HPLC测定有关物质的质量标准。方法：用十八烷基键合硅胶作为固定相的反相色谱柱，甲醇-0.1%的磷酸水溶液（25:75）的流动相，水为溶剂，检测波长为220nm。结论：有关物质：不得过7.0％；理论塔版数按盐酸巴马汀计：不小于5000；最小检测量：0.488ng。

【关键词】黄藤素；有关物质；HPLC

【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2017）03-0269-02

黄藤是我国的传统中药，其有效成分黄藤素具有疗效显著、副作用低的特征，药用植物黄藤具有越来越广的应用价值[1]。目前研究表明，黄藤主要含有生物碱、内酯，还含有少量萜类、醛类、挥发油等化学成分，其中主要生物碱有黄藤素(盐酸巴马汀)、药根碱，内酯类成分主要以黄藤内酯为主。其药理活性研究表明，黄藤提取物和其所含的化学成分具有抗炎、抑菌、抗病毒、增强免疫力、提高记忆等药理作用，并且关于药理活性的研究主要集中在黄藤素，被当代医学称为“植物抗生素”。黄藤素片主要用于治疗妇科炎症、外科感染、菌痢、肠炎、呼吸道及泌尿道感染、眼结膜炎等。

采用高效液相色谱法[2]，对本品有关物质的检查方法进行研究。

1.仪器、试剂、样品：

仪器：Waters公司1525/2487HPLC，M32色谱工作站；色谱柱：SymmetryShieldRp18，5m，3.9×150mm(Waters公司)；检测波长：220nm；柱温：30℃；流动相：甲醇-0.1%的磷酸水溶液（25:75）；流速：0.8ml/min；进样体积：10l；

试剂：甲醇（色谱纯）；磷酸（分析纯）；纯净水；

样品：黄藤素片(每片重0.136g（含盐酸巴马汀0.1g）)3批分别标识为HTS01、HTS02、HTS03。

2.固定相选择

参照盐酸巴马汀检查方法[2]。通过试验，结果表明：用十八烷基键合硅胶作为固定相的反相色谱柱测试，分离效果好，保留时间适宜，重现性好。故选用十八烷基键合硅胶作为固定相的反相色谱柱。

3.流动相的选择

通过试验，结果以流动相为甲醇-0.1%的磷酸水溶液（25:75），试验结果表明：主成份保留（tR=7～8分钟），峰形较好，且保留时间适宜。

4.溶剂的选择

黄藤素在水中可溶解。为避免溶剂峰，选用水为溶解及稀释溶剂。

5.检测波长

参照盐酸巴马汀对照品及其进行紫外光谱扫描，其最大吸收波长为220nm，因此确定检测波长为220nm。

6.系统适用性试验

6.1测试液的配制

取本品27.5mg，加甲醇10ml，超声溶解，定容至50ml容量瓶中，作为供试品溶液，备用。另取相应量的辅料，同法制成空白辅料溶液，备用。

a.酸破坏样品

量取供试品溶液及空白辅料溶液各5ml，分别置10ml具塞试管中，各加入1mol/L盐酸1ml，于90℃加热20小时，放至室温，用1mol/L氢氧化钠溶液中和后，水浴蒸发至约1ml，加水稀释成5ml，滤过，即得。

b.碱破坏样品

量取供试品溶液及空白辅料溶液各5ml，分别置10ml具塞试管中，各加入1mol/L氢氧化钠溶液1ml，于90℃加热20小时，放至室温，用1mol/L盐酸溶液中和后，水浴蒸发至约1ml，加水稀释成5ml，滤过，即得。

c.过氧化氢破坏样品

量取供试品溶液及空白辅料溶液各5ml，分别置10ml具塞试管中，各加入3%的H2O2溶液1ml，于90℃加热20小时，水浴蒸干，残渣加水溶解并稀释成5ml，滤过，即得。

d.高温破坏样品

量取供试品溶液及空白溶液各5ml，分别置10ml具塞试管中，于90℃加热20小时，水浴蒸发至约1ml，加水稀释成5ml，滤过，即得。

在上述液相色谱条件下，吸取各测试液20l，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图。

6.2结果

a.在上述液相色谱条件下，空白溶剂和空白辅料均不干扰本品有关物质检查。黄藤素的保留时间约为8分钟。

b.本品在强碱及强氧化剂作用下，有分解物产生，在强酸、高温90℃条件下放置20小时，未见明显杂质产生。

c.黄藤素峰的保留时间约8分钟，记录色谱图至45分钟，结果表明，破坏性试验产生的杂质保留时间均在45分钟之前，故将有关物质考察时间定为45分钟。

理论塔版数按盐酸巴马汀计为：5000。

7.最小检测量的测定

取盐酸巴马汀对照品溶液，依上述液相色谱条件按仪器噪音的三倍响应值测定其最小检测量为0.488ng。

8.三批供试品有关物质检查结果

对三批供试品按上述方法进行有关物质检查，结果见表1。有关物质图谱为图1.有关物质均不超过7.0％。

表1注射用黄藤素三批样品有关物质检查结果

批号HTS01HTS02HTS03

有关物质（%）3.203.272.85

图1黄藤素片有关物质图谱

9.辅料的干扰试验

按处方量配比称取辅料，配成适当浓度的溶液，照有关物质测定项下的方法，依法测定，结果表明辅料不干扰黄藤素片的测定。

10.结论

本品在强酸、强碱及强氧化剂作用下，有分解物产生，在高温90℃条件下放置20小时，未见明显杂质产生，辅料不干扰黄藤素片检测。对三批注射用黄藤素片中有关物质的检查，确定有关物质不得过7.0％。理论塔版数按盐酸巴马汀计：不小于5000；最小检测量：0.488ng。

【参考文献】

[1]吕娜，赵昱玮，汲立伟，司学玲，南敏伦.黄藤的研究进展.《中国实验方剂学杂志》.2016.08.04.10：45.

[2]《中国药典》2015版第一部.415.