两种IGRA检测方法诊断结核分枝杆菌潜伏感染的效能分析

栗方芝李娜娜石亚萍贺仁忠（通讯作者）陈玲

（贵州省遵义医学院附属医院呼吸二科呼吸医学研究室贵州遵义563003）

【摘要】目的比较γ-干扰素释放试验TB-IGRA和T-SPOT.TB检测结核分枝杆菌潜伏感染的效能和一致性。方法分别用TB-IGRA和T-SPOT.TB两种方法对18例志愿者、4例涂阳肺结核患者及1例非结核分枝杆菌感染者的外周血标本中特异性γ-干扰素的含量进行检测，进行平行比较分析。结果TB-IGRA法和T-SPOT.TB法的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值均为100%,2种方法的Youden指数均为1，差异无统计学意义(P＞0.05)。结论TB-IGRA和T-SPOT.TB两种方法在诊断结核分枝杆菌潜伏感染方面有较好的效能和一致性，有临床应用价值，阴性结果在结核病鉴别诊断中有较重要的临床意义。

【关键词】结核分枝杆菌潜伏感染γ-干扰素释放试验TB-IGRAT-SPOT.TB

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2014）01-0026-02

【Abstract】ObjectiveTocompareefficiencyandconsistencyoftypeinterferongammareleaseassayondetectingmycobacteriumtuberculosislatentinfectionbytwodifferentmethodsofTB-IGRAandT-SPOT.TB.MethodDetectthespecificIFN-γof18volunteers,4patientswithsmearpositivepulmonarytuberculosis,1caseofnontuberculousmycobacterialinfectionforparallelcomparativeanalysisbythetwodifferentmethods.ResultsSensitivity,specificity,positivepredictivevalue,andnegativepredictivevalueofTB-IGRAandT-SPOT.TBwere100%,Youdenindexofthetwomethodswas1,indicatingnostatisticallysignificant(P>0.05).ConclusionTB-IGRAandT-SPOT.TBhavegoodconsistencyinthediagnosisofmycobacteriumtuberculosislatentinfectionwithagoodclinicalapplicationvalue,andthenegativeresulthasavaluablesignificanceinthedifferentialdiagnosisoftuberculosis.

【Keywords】MycobacteriumtuberculosisLatentinfectionsInterferongammareleaseassayTB-IGRA，T-SPOT.TB

结核病是由结核分枝杆菌（MTB）引起的一种严重危害人类健康的慢性传染病，本世纪80年代中期以来在全球出现回升趋势，结核分枝杆菌潜伏感染(LTBI)的早发现、早诊断是预防与控制结核病的重要手段之一[1，2]。近年来，经多方证实以T细胞免疫为基础的体外γ-干扰素释放试验(IGRA)在MTB感染检测中有较好的特异性和敏感性，在欧美国家已经作为一种结核病的常规检测方法被广泛应用于临床。目前常用的IGRA试验方式有二种:一种是酶联免疫吸附法(ELISA),通过ELISA方法检测体外释放的特异性IFN-γ，判断是否感染结核分枝杆菌。另一种方法为酶联免疫斑点法(ELISPOT)，通过检测外周血中结核分枝杆菌致敏的T淋巴细胞数量即斑点数量判断是否感染结核分枝杆菌。本研究旨在对TB-IGRA和T-SPOT.TB两种方法进行效能和一致性比较，评价其在检测结核分枝杆菌潜伏感染方面的临床应用价值。

1对象与方法

1.1研究对象2013年8月-12月本院住院及门诊患者及志愿者23例，包括志愿者18例，涂阳肺结核患者4例，非结核分枝杆菌感染者1例，男女比例约1:1，年龄在19～70岁之间，平均34岁。

1.2试剂与仪器TB-IGRA诊断产品试剂盒；T-SPOT．TB试剂盒；Ficoll淋巴细胞分离液；淋巴细胞培养液AIM-V、RPMI1640；；iMark酶标仪，FORMA1285二级生物安全柜，37℃恒温箱，FORMA371C02培养箱，5417型台式高速冷冻离心机，5810型离心机，CX21型显微镜等。

1.3TB-IGRA检测方法及判定标准采取外周静脉血3~5ml,肝素钠抗凝，2h内依次分装1ml全血到N、T、P3个培养管中,分别为本底对照管、测试管、阳性对照管，T管中添加了结核特异性抗原ESAT-6、CFP-10,P管中添加了非特异刺激原植物血凝素(PHA)。然后将培养管直立放入37℃恒温培养箱中,培养20～24h,3000rpm/min离心10min收集上清液,进行ELISA检测，通过酶标仪检测吸光度（A值),用校准品浓度值与A值拟合乘幂曲线,计算样本中IFN-γ的含量。设定测试管(T)含量值=a,本底对照管(N)含量值=b,阳性对照管(P)含量值=c。若b≤400实验有意义,当a-b≥14,并且≥25%b,不管c-b为任何值,均为阳性；当a-b≥14,但<25%b，或<14时,此时c-b≥20均为阴性；若a-b<14,c-b<20或a-b≥14,但<25%b,且c-b<20时，实验结果为不确定。最后结果以阳性、阴性及不确定三种定性方式表达。

1.4T-SPOT．TB检测方法及判定标准使用肝素钠抗凝管采集外周静脉血5~8mL，4h内用Ficoll淋巴细胞分离液分离单核淋巴细胞（PBMC），经RPMI1640培养液洗涤后，使用台盼蓝染色计数，然后用AIM-V培养液调整细胞数至2.5×109/L，各取100μL分别加至4个微孔，依次用AIM-V培养液(阴性对照)、ESAT-6(抗原A)、CFP-10(抗原B)和植物血凝素(PHA)(阳性对照)刺激各孔细胞，在37℃5%CO2培养箱中温育16～20h,用PBS洗板,加入新鲜配制的碱性磷酸酶标记抗体，4℃反应1h，用PBS洗板，每孔加入底物显色液BCIP/NBT，室温暗室反应6min，蒸馏水冲洗终止反应，放大镜观察记录每孔斑点数。结果判定标准:(1)阴性对照孔斑点数＜6个，抗原A或抗原B检测孔计数－阴性孔计数≥6个可判为阳性；(2)阴性孔斑点数≥6个，检测孔斑点数≥2倍阴性孔斑点数判为阳性，余判为阴性。

1.5统计学分析用SPSS17.0软件进行统计，并进行u检验比较两者差异，以P＜0.05为有统计学意义。

2结果

TB-IGRA法和T-SPOT.TB法敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值均为100%。2种方法的Youden指数均为1，差异无统计学意义(P＞0.05)。

3讨论

本研究通过TB-IGRA和T-SPOT.TB两种方法检测涂阳肺结核患者，其结果一致，均为阳性；非结核分枝杆菌感染者检测结果一致，均为阴性，TB-IGRA法和T-SPOT.TB法的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值均为100%，与文献报道结果相近[3～5]。从实验结果分析，不考虑堪萨斯分枝杆菌、海水分枝杆菌、苏加分枝杆菌及鸟胞内分枝杆菌感染的可能，可进一步行非结核分枝杆菌分型检测。结核分枝杆菌感染检测阳性结果存在一定差异，提示需结合临床进一步分析是否存在结核分枝杆菌感染。本研究结果显示，涂阳肺结核指标参数明显高于结核潜伏感染者，对活动性结核病的诊断有一定参考价值；阴性结果在结核病鉴别诊断中有较重要的临床意义。提示IGRA在结核病的诊断及预防中具有非常重要的临床应用价值及参考价值。TB-IGRA检测方法操作简便快速，对设备要求较低；T-SPOT.TB检测结果直观，但操作较为复杂，检测人员可根据实验室条件等因素进行选择。

综上所述，本研究两种检测方法诊断结核分枝杆菌潜伏感染性能无显著差异，结果有较高的一致性，与文献报道一致，两者均有较好的临床应用价值。

参考文献

[1]全国结核病流行病学抽样调查技术指导组．第四次全国结核病流行病学抽样调查报告[J].中华结核和呼吸杂志，2002，25(1):3－7．

[2]刘二勇,周林,成诗明.结核分枝杆菌潜伏性感染及预防性治疗研究进展的系统评价[J].中国防痨杂志,2013,35(4):231－239.

[3]李兵，陈献雄，杨倩婷，等．卡介苗对结核分枝杆菌IFN-γ酶联免疫斑点检测法的影响[J].临床肺科杂志，2010，15(7):955-957．

[4]KikSV，FrankenWP，MensenM，etal．PredictivevalueforprogressiontotuberculosisbyIGRAandTSTinimmigrantcontacts[J]．EurRespirJ，2010，35(6):1346-1353．

[5]郑建洲，王亚楠，俞小卫.两种γ-干扰素释放试验诊断结核病的性能比较[J].临床检验杂志，2013,7:556-557.

基金资助：1.贵州省卫生厅科学技术基金（gzkj2009-1-009）

2.贵州省结核病综合防治2011协同创新中心（培育）项目