EGFR在喉癌中的表达及其意义

郭凤房艳春许秋实张宝薇孙健陈伟刚郑

【摘要】：目的：本研究即应用免疫组化法检测喉癌组织中EGFR的表达，并通过分析

了解其检测在喉癌的检出及预后评估中的意义。方法：SP法检测齐齐哈尔市第一医院喉癌标本61例，病理类型为鳞状细胞癌。采用统计学分析EGFR在喉癌组织与癌旁正常组织中表达的差异相关性分析。结果：EGFR的蛋白表达与分化程度及淋巴结转移有明显相关性，与年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤发生部位、肿瘤大体分型、浸润深度、分期无相关性。结论：EGFR异常表达与喉癌的发生发展密切相关，其表达在喉癌的筛查、诊断及预后评估中起着重要作用。

【关键词】喉癌；免疫组织化学染色；EGFR

喉癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一，发病率逐年增长且病因复杂，喉部恶性肿瘤中96％一98％是鳞状细胞癌[1],在东北地区发病率高，是危害健康危险疾病之一。近年来，虽然对喉癌的治疗手段不断改进，但部分患者预后效果仍不佳，早诊断、早治疗仍然是,及早干预,提高预后的首选之策。肿瘤的分子水平改变往往优先于肿瘤的病理学改变，因此寻找喉癌的肿瘤标志物有着重要的临床意义。本研究用免疫组织化学方法检测EGFR在喉癌组织与癌旁正常组织中表达的差异相关性分析。评估EGFR在喉鳞状细胞癌发生、发展中的作用及其作为喉癌肿瘤标志物的可能性。

EGFR(epidermalgrowthfactorreceptor)即表皮生长因子受体，它属于erbB家族成员。是一种细胞表面酪氨酸激酶受体，能够与其相应的配体相结合，从而启动相应的信号传导途径，调节细胞正常的生长、增殖及分化。当多种内外致癌因子共同作用下，过表达，信号传导通路发生异常，细胞异常增生，从而导致肿瘤的发生，其异常表达在多种肿瘤的发生发展过程中起着重要作用[2]。

材料与方法

1.1材料

收集在齐齐哈尔市第一医院病理科的喉癌标本61例，病理类型为鳞状细胞癌。患者中男42例，女19例，年龄40-83岁平均62岁；患者均为首次就诊，未进行过放疗、化疗及其它特殊治疗。收集资料均含有完整的临床资料，包括病人的年龄、性别、病理类型、浸润深度、肿瘤发生部位、有无淋巴结转移、肿瘤大小和临床分期，排除心、肝、脑、肾等其他疾病。

1.2主要试剂

Truzol(美国生命技术公司）；兔抗人EGFR单克隆抗体（美国生物技术有限公司）；正常山羊血清（北京中彬金桥生物技术有限公司）；通用型二抗（丹麦公司）；显色试剂盒（丹麦公司）；梓檬酸盐抗原修复液（北京鼎国）；憐酸盐缓冲液（北京鼎国）；无水乙醇，二甲苯，苏木素（北京鼎国）。

1.3采用免疫组织化学染色链霉菌抗生物素蛋白过氧化酶连接法法，具体步驟如下：

标本用福尔马林固定，进行乙醇脱水，石錯包埋，并制成厚度为的4um切片。常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水，液浸泡约5min,高压抗原修复3次，室温冷却后加过氧化氢孵育，用以灭活内源性的生物素及过氧化物酶活性；PBS冲洗3次；正常山羊血清加封闭并室温孵育10nin加兔抗人EGFR单克隆抗体（美国生物技术有限公司）于湿盒内4℃过夜冷藏，恢复常温后，加二抗并室温解育；PBS液冲洗次；滴加新鲜配制的DAB液至标本，镜下控制显色时间，显色满意后自来水冲洗；苏木素复染，用氨水冲洗后进行无水乙醇梯度脱水；最后封片。

1.4EGFR表达阳性判断标准

EGFR主要以胞装染色为主，染色呈棕色或棕黄色。依据阳性细胞的比例和染色强度进行评分。阳性细胞百分比可依据阳性细胞占总细胞数的百分比共分为4级：无阳性细胞者计为0分，1分即阳性细胞数<10%，2分即阳性细胞数11%--50%，3分即阳性细胞数51%--80%，4分即阳性细胞数为>80%.细胞染色强度也分4级：无细胞着色，弱阳性（+），中等阳性（++），强阳性（+++）分别记为0、1、2、3分；当阳性细胞百分比与细胞染色强度乘积〉6分时即为免疫反应阳性。

1.5统计学方法

所有资料均采用SPSS17.00统计软件包进行统计学分析。EGFR在喉癌组织与癌旁正常组织中表达的差异以及它们在喉癌组织中的蛋白表达与临床各病理特征之间的关系均釆用卡方检测(Chi-squaretest/Chi-SquareGoodness-of-FitTest)及fesher确切概率法；以a=0.05为检验水准，p<0.05时有统计学意义。

结果

2.1EGFR在喉癌及其正常组织中的表达

EGFR以胞浆染色为主（见附图）在61例喉癌组织标本中阳性表达为77.1%（47/61）

EGFR在61例正常组织中的表达率分别为9.8%（6/61）经卡方检验，EGFR在喉癌纽织与癌旁正常组织中的差异均具有著性（p<0.05）。EGFR在喉癌纽织中的表达

讨论

喉癌是我国最常见的恶性肿瘤之一。其明显的地域性差异及家族聚集现象，提示喉癌的发生是环境和遗传因素的交互作用导致正常细胞癌变的结果，但其发生的确切机制仍不明确。近年来，随着分子生物学的发展，对肿瘤的研已深入到分子水平。人们发现，人类肿瘤的发生是原癌基因与抑癌基因共同作用的结果，其发生发展过程包含有多种基因的表达，是一种多阶段、多步骤的复杂变化的过程，喉癌的发生过程亦是如此。因此，从分子水平对喉

癌的发生及演进过程进行研究，寻找可用于喉癌的诊断和治疗的关键基因及标志物，从而为临床上喉癌的诊断和治疗提供新的方法和手段，对降低喉癌的发病率和死亡率有着重要意义。EGFR基因定位于人类染色体7p13_7p12上，由28个外显子组成，其酷氨酸激酶的活性是由外显子的编码。除血管组织外，广泛分布于上皮细胞膜上，相对分子质量约横跨细胞内外，胞外的配体结合区、疏水跨膜结构域和胞内的蛋白酪氨酸激酶区三部分共同组成的分子结构。正常情况下，通过其酪氨酸激酶活性，对细胞生长信号起着转导作用，从而调节细胞的正常的生长、增殖及分化。当发生突变过表达时可导致信号传导的异常，最终致使细胞生长失控，细胞癌变。这就以更客观的分子生物学实验手段，证实了国内外一些学者关于喉癌组织EGFR过量表达的说法[3,4]。

本实验结果发现在喉癌及癌旁正常组织中EGFR表达差异明显可以作为检测喉癌的发生、发展及预后状况的有重要价值的指标之一,及其作为喉癌肿瘤标志物的可能性。

【参考文献】

[1].孔维佳，王斌全.耳鼻咽喉科头颈外科学(8年制第2版)．北京：人民卫生出版社，2010．482．

[2]MendelsohnJ，BaselgaJ．StatusofepidermalgrowthfactorreceptorantagonistsinthebiologyandtreatmeatofCancer[J].ClinOncol，2003，21(14)：2787-2799．

[3]Qing—HuaWen，TakakiMiwa,，TomokazuYoshizaki，etal．Progno-sticvalueofEGFRandTGF-ainearlylarynegelcancerreatedwithIadiotherapy[J]．Laryngoscope，1996，106：884．

[4]凌玲，罗敏捷，来茂德，等．表皮生长因子受体在喉癌及癌前病变中表达[J]．中国肿瘤临床，1999，26：36．