MMP-9、TIMP-1在大鼠II期压疮愈合过程中的表达及意义

王越1杨丽坤2

（1承德医学院河北承德067000）

（2河北省人民医院河北石家庄050057）

【摘要】目的：探讨大鼠II期压疮愈合过程中MMP-9、TIMP-1的变化趋势。方法：采用磁铁压迫持续缺血损伤复制大鼠Ⅱ期压疮模型，在造模前和造模后的1、3、7、14天测量大鼠压疮面积，取压疮部位组织通过免疫组化观察MMP-9和TIMP-1的表达情况。结果：压疮愈合过程中的第三天MMP-9、TIMP-1及MMP-9/TIMP-1比值达到高峰，随后随着压疮愈合MMP-9、TIMP-1呈下降趋势（P＜0.05）。结论：MMP-9、TIMP-1及MMP-9/TIMP-1与大鼠II期压疮愈合有关。

【关键词】MMP-9；TIMP-1；II期压疮；压疮愈合

【中图分类号】R245【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2018）31-0023-02

压疮是长期卧床老年患者严重并发症之一，其临床治疗相对困难，治疗周期长，花费高，给患者和社会带来了沉重的经济负担。研究显示，基质金属蛋白酶(MMP-9)及基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1)在创面愈合过程中发挥重要作用[1-2]。而目前国内有关于在压疮愈合过程中MMP-9和TIMP-1含量变化的文献却鲜见报道，本研究拟从分子水平探讨大鼠Ⅱ期压疮愈合过程中MMP-9、TIMP-1的变化趋势。

1.对象

1.1实验动物

自河北医科大学实验动物中心购买雄性健康大鼠30只，体重（240±20）克。

1.2实验器材

圆片形铁片、圆形磁铁购自河北超强磁业技术有限公司。抗体MMP-9、抗体TIMP-1购于美国Cloud-Clone公司。硫酸纸、卡纸购自市面上。

2.方法

2.1实验方法

参照埋置铁片加外用磁铁加压的造模方法[3]制备大鼠Ⅱ期压疮模型。在压疮形成前和压疮形成后1天、3天、7天、14天测量大鼠的压疮面积，并随机抓取2只取压疮部组织，免疫组化测MMP-9和TIMP-1的表达情况。光镜观察，结果以胞浆或胞膜着棕色者为阳性染色。在400倍光镜下观察免疫组化结果，在光镜下每组取3张片子，每张片子随机取5个视野，计算阳性细胞数并以百分数表示，分别测定MMP-9和TIMP-1阳性表达率，取其均值并计算MMP-9/TIMP-1的比值。

2.2统计学方法

采用SPSS19.0进行统计学分析，计量资料采用均数±标准差（x-±s)，不同时间点MMP-9、TIMP-1表达水平及MMP-9/TIMP-1比值用重复测量方差分析及两两比较，以P＜0.05为统计学意义。

3.结果

MMP-9在正常组织中不表达，在压疮造模成功后产生，在造模第3天达到高峰，随着压疮的愈合呈下降趋势（P＜0.05）；TIMP-1在正常组织中也有表达，在压疮造模第3天达到高峰，随着压疮的愈合呈下降趋势（P＜0.05）；MMP-9/TIMP-1比值在压疮造模第3天最高，随着压疮愈合呈下降趋势（P＜0.05），见表。

4.讨论

4.1MMP-9在大鼠Ⅱ期压疮组织中表达水平的结果分析

大鼠Ⅱ期压疮组织中MMP-9的含量在第3天达到高峰，随着压疮的愈合呈下降趋势。研究表明[4]，MMP-9在慢性伤口渗出液中的表达水平明显高于急性伤口渗出液，处于一种过度表达状态，使创面形成过度蛋白水解环境，造成创面长期不能愈合，随着创面的愈合，MMP-9的表达水平会明显下降[5]。

4.2TIMP-1在大鼠Ⅱ期压疮组织中表达水平的结果分析

研究结果显示，TIMP-1在正常组织中也有表达，在第3天达到峰值，随着压疮愈合呈下降趋势。TIMP-1是MMP-9特异性性抑制剂，与MMP-9催化区以1:1可逆性结合抑制MMP-9的活性。在压疮的愈合过程中MMP-9与TIMP-1的表达会趋于一个平衡稳定的状态。

4.3MMP-9/TIMP-1比值在大鼠Ⅱ期压疮组织中表达结果的分析

研究结果显示，MMP-9/TIMP-1的比值在第三天达到峰值，随着压疮愈合，比值呈下降趋势。研究显示，在一般伤口愈合过程中清除坏死物、细胞迁移和ECM降解重塑等过程中起着重要作用的是MMP-9/TIMP-1的比值。在生理状态下MMP-9与TIMP-1之间保持着动态平衡，协调ECM降解与重建，维持组织结构的完整和内环境的稳定，当MMP-9/TIMP-1的比值越高，组织出现过度降解的程度越重[6]。

5.小结

MMP-9、TIMP-1的表达及MMP-9/TIMP-1的比值变化与大鼠Ⅱ期压疮愈合有关，但由于本研究样本量较少，且为动物实验，因此有待进一步研究。

【参考文献】

[1]XueM,LeNT,JacksonCJ.TargetingMatrixmetalloproteasestoimprovecutaneouswoundhealing[J]．ExpertOpinTherTargets,2006,10(1)：143-155．

[2]常学洪，常方媛，董建凤，等.基质金属蛋白酶及其组织抑制物在糖尿病足创面愈合中作用的研究概况[J].中国临床新医学，2017，10(09):916-919.

[3]PeirceSMSkalakTC.RodeheaverGT.Ischemia-reperfusioninjuryinchronicpressureulcerformation:ashinmodelintherat[J].WoundRepairRegen.2000;8(1):68-76.

[4]Lazaro,JL;Izzo,V;Meaume;etal.Elevatedlevelsofmatrixmetalloproteinasesandchronicwoundhealing:anupdatedreviewofclinicalevidence[J].JWoundCare,2016,25(5):277-287.

[5]BellayrI,HoldenK,MuX,eta1.Matrixmetalloproteinaseinhibitionnegativelyaffectsmusclestemcellbehavior[J].IntJClinExpPathol,2013,6(2):124-141.

[6]Muller,M;Trocme,C;Lardy,B;etal.Matrixmetalloproteinasesanddiabeticfootulcers:theratioofMMP-1toTIMP-1isapredictorofwoundhealing.[J].DiabetMed,2008,25(4):419-426.