浅析痰标本在细菌学检验中的应用

潘中华

【摘要】目的探讨痰标本在细菌学检验中的临床应用价值。方法选择送往检验科的200例痰标本作为研究标本，在不同的培养基上培养选中的痰标本，比较不同培养基分离细菌菌株情况。结果1例痰标本在923TBL液体培养基中出现浑浊，有细菌生成；在7H9L半固体培养基中有菌株出现；而在罗氏培养基以及923TBB培养基上则没有菌株生成。结论采用高渗半固体培养基可以从痰标本中分离出结核杆菌L型菌株，表明痰标本在细菌学检验中具有重要的作用。

【关键词】痰标本细菌学检验

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）14-0175-01

L型细菌属于能够感染疾病的病原菌的一种，其主要是由于细菌细胞壁发生部分缺损或者是完全丧失而形成的，细菌细胞壁的缺失可以自发形成，也可以通过人工诱导的方式形成，同时人工诱发所形成的概率也明显的高于自发过程[1]。当在琼脂培养基上培养痰标本时，所形成的菌落呈现“油煎蛋”样式。本研究为了探讨痰标本中结核杆菌L型菌株的存在情况，将痰标本培养于不同的培养基上，以进一步分析痰标本在细菌学检验中的作用，为研究结核分枝杆菌提供借鉴，现汇报如下。

1.资料与方法

1.1实验对象

将2010年1月-2012年1月期间送往我院检验科的200例痰标本作为研究标本。

1.2培养基配制

罗氏培养基的配置：将磷酸二氢钾1.0g、谷氨酸钠1.6g、硫酸镁0.1g、葡萄糖0.25g、丙三醇5ml、蒸馏水250ml混合作为培养基基础液。将基础液加热并充分溶解，同时加入5g土豆粉，摇匀后继续加热5min。然后将混合液泠却至45℃左右，并继续加入500ml的全卵液、10ml的2%高压灭菌孔雀绿，进行静置。静置完成后置于烘箱中干燥1.5h，90℃。干燥完成后拿出冷却，冷却后的培养基应保持颜色鲜艳，表面无气泡，并保存于4℃温度下。

7H9L半固体培养基、923TBL液体培养基、923TBB液体培养基则直接购买。

1.3痰标本细菌培养

取送至检验科的痰标本作为培养对象，以1:3的比例加入预制消化液，并进行旋转振荡，然后以3500转/min的转速离心分离15-20min，离心结束后加入适量的PBS重悬沉淀，分别取200ml接种于7H9L半固体培养基、923TBL液体培养基、923TBB液体培养基、罗氏固体培养基中，在37℃条件下静置培养。

预制消化液的配置：2.5%的枸橼酸钠溶液40ml、4%的NaOH溶液45ml、乙酰半胱胺酸0.5g混合均匀，一般应该在痰标本培养当天进行配置，并且使用期间不超过24h。

最后对培养的痰标本进行染色涂片后在显微镜下检查。

2.结果

培养基培养结果显示，有1例痰标本在923TBL液体培养基中出现浑浊，说明有细菌生成，在7H9L半固体培养基上出现了油煎蛋形状的菌落，而在923TBB液体培养基和罗氏固体培养基中没有菌落生成。对7H9L半固体培养基上出现的油煎蛋形状涂片检验分析可知，该菌株经抗酸染色后可以看到大小不等的短杆状菌种。

7H9L半固体培养基上培养出现菌株的患者病历分析：患者为男性，23周岁，于2010年10月出现无诱因的咳嗽，并且以干咳为主，同时也伴有少量白色痰液。经过X射线检查其左肺有斑片状阴影，CT检查发现左肺斑片状不均匀。入院后痰检为阳性，根据痰检和影像学检查诊断为原发性肺结核。对该例患者进行抗痨抗炎治疗，后治愈出院。

3.讨论

L型细菌因为细胞壁中的肽聚糖含量很少，因此经过有效的溶菌酶处理以后能够部分或者全部的保留其外膜部分，同时其内部渗透压较低，因此能够在低渗透环境下形成一种具有较好抵抗力的原生质球[2]。痰是支气管、肺部以及气管内的炎性分泌物，是一种病理的产物，临床中采集患者的痰标本主要是为了进行病原菌的检查和鉴定，从而协助临床的诊断和治疗。在肺结核患者中能否找到L型细菌主要取决于痰标本留置方法的正确性。一般而言正确的痰标本留置方法为：首先用清水多次嗽口，以除去口腔中的食物残留渣和细菌，然后让患者自气管中用力咳嗽出痰液，将痰液装于痰盒中送检，注意不能将鼻涕或者唾液吐入痰盒中。同时为了防止痰液污染，应该将用过的作消毒灭菌处理[3]。本文中送检痰标本中有一例痰标本在7H9L半固体培养基上出现了油煎蛋形状的菌落，并且显微镜检查为L型细菌，而该痰标本的患者恰好患有原发性肺结核。

总之，用高渗半固体培养基可以从痰标本中分离出结核杆菌L型菌株，表明痰标本在细菌学检验中具有重要的作用，可以作为临床诊断的参考和依据。

参考文献

[1]祝秉东,于红娟.结核病学基础与临床[J].兰州:兰州大学出版社,2009:369-375.

[2]朱明利,张元和,李明君,等.肺结核肺癌患者外周血结核分枝杆菌及其L型的检测方法[J].蚌埠医学院学报,2011,26(1):71-73.

[3]朱明利,张永乐,张立诚,等.肺结核患者结核菌L型感染及其荧光定量检测的意义[J].中国实验诊断学,200812(5):632-635.