尿蛋白检验方法及临床评价

张广友

（黑龙江省绥滨县人民医院156200）

【摘要】探讨尿蛋白检验方法及临床评价。尿蛋白测定是肾脏疾病诊断的基础，检测方法包括定性、定量及蛋白质分类。通过对尿蛋白定性和总量测定，应用于泌尿系统疾病及一些全身性疾病的过筛，治疗效果的评价。

【关键词】尿蛋白检验方法临床评价

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）33-0036-02

健康人24h尿中排出的蛋白总量低于150mg，一般为40～80mg，常规定性检测为阴性，尿蛋白50％～70％来自血浆，30％～50％来自泌尿系统的组织蛋白，尿中蛋白质含量超过150mg／24h称为蛋白尿[1]。尿蛋白测定是肾脏疾病诊断的基础，检测方法包括定性、定量及蛋白质分类。

1尿蛋白的定性试验

目前应用较广的定性方法包括磺基水杨酸法、加热乙酸法、干化学试纸法。

1.1磺基水杨酸法磺基水杨酸亦称磺柳酸，为一种生物碱试剂，在略低于蛋白质等电点的酸性条件下，磺基水杨酸的阴离子与蛋白质氨基酸残端阳离子结合，成为不溶性蛋白盐而沉淀。取100g/L磺基水杨酸溶液与等量甲醇或95％乙醇混合。取尿若干毫升，加试剂1～3滴，尿液上层若见白色混浊，即蛋白阳性，结果判定：(±)轻微混浊、(+)明显白色混浊、(++)澎乳状混浊、+++乳状混浊、++++絮状混浊。

1.2加热乙酸法蛋白质在酸性溶液内加热煮沸即凝固变性。加酸可使蛋白质接近等电点，还可消除碱性盐类晶体。将尿液注入试管，约占管2／3容量，用火焰加热上层至煮沸，然后加5％醋酸或醋酸钠缓冲液2～4滴，然后再煮沸，观察结果。(－)不混浊、(±)轻微混浊、(+)明显白雾状、(++)混浊且有明显颗粒、(+++)大量絮片状沉淀，(++++)大量絮片状沉淀，并有凝块。

2尿蛋白定量试验

尿蛋白定量测定是肾脏疾病不可缺少的检查方法，所得结果是总尿蛋白。影响尿蛋白定量测定的因素较多，至今还没有一个普遍推广、稳定、准确的方法，目前常用的方法有浊度法、染料结合法、化学比色法。

2.1浊度法也叫蛋白质沉淀法，是目前测定尿蛋白含量最常用的方法，它是利用沉淀剂加人尿中使蛋白质沉淀而形成一定的浊度，经光度计或散射浊度计直接测定悬液中粒子的散射光。目前常用的沉淀剂是：三氯乙酸(TCA)、磺基水杨酸(SSA)，氯化苄甲乙氧铵碱性液(BEC)。浊度的形成受沉淀剂的化学性质，蛋白质种类，酸浓度、温度、加酸速度及加酸后放置的时间等影响[2]。高浓度的青霉素等可产生沉淀干扰比浊；一些低分子量糖蛋白不被TCA和SSA沉淀，可能造成漏检。在相同温度下(温度高于25％时)，白蛋白与SSA产生的浊度比α-球蛋白产生的高，在SSA试剂中加入硫酸钠，这种不一致可得到改善，BEC法对温度依赖性较低，但精度最好。

2.2染料结合法

2.2.1直接法：是通过染料与蛋白质结合时，其最大吸收率的漂移来检测的。常用染料：考马斯亮蓝G-250(最大吸收率以465nm、红色移至595nm、蓝色)、邻苯三酚红(以467nm、红色移至594nm、蓝色)。优点是蛋白质与染料结合快速，呈色稳定、灵敏度高。缺点是阳离子和非离子型表面活性剂对呈色反应有正干扰，阴离子型表面活性剂有负干扰。考马斯亮蓝染料易附着于玻璃容器表面，影响试验的准确性和精密度。

2.2.2沉淀法：是蛋白质与结合的染料在TCA作用下共同沉淀下来，然后在稀碱溶液中复溶，再比色测定染料吸光度。常用染料：丽春红S、苯胺蓝。优点是白、球蛋白反应较一致，灵敏度高。

2.3化学呈色法利用试剂中无机离子与蛋白肽键反应而显色，不管蛋白质的种类如何，其肽键是一致的，反应颜色与肽键量成正比。常用的反应试剂：双缩脲试剂、福林(Folin)试剂、氧化铁－鞣酸试剂。在酸性沉淀剂中，钨酸沉淀蛋白质较完全，TCH不能沉淀某些低分子量糖蛋白。与其他方法比较，化学呈色法敏感性适中，干扰因素少，双缩脲法被推荐为尿总蛋白质测定的常规参考方法。蛋白总量正常情况下一般为<130ms／24h尿，定性为阴性。尿蛋白含量增高，只能提示患者每日从尿中流失的蛋白量，并不能代表疾病的严重程度。

3临床评价

3.1尿液由肾脏生成，肾脏的基本功能单位是肾单位，肾单位由肾小体(肾小球和肾小囊)和肾小管组成。从正常生理来看，尿中蛋白含量的异常增加，其机制主要有三个：肾小球滤过膜损害，许多高分子量的血浆蛋白滤出，超过了肾小管的重吸收能力、其结果是导致肾小球性蛋白尿；肾小管损害及功能异常抑制了肾小管的重吸收能力，尿中低分子量蛋白为主；血浆中正常或异常蛋白含量的增多、超过肾阈，因而从肾小球滤过，并超过了肾小管重吸收的能力，如这些蛋白分子量小或带阳电荷，那么尿中的蛋白量可明显增高[3]。肾小管本身虽然可分泌某些蛋白，但其分泌量的增加，也是极为罕见的。

3.2正常人尿蛋白定性为阴性或弱阳性，定量小于150mg／24h(如超过即“蛋白尿”)；但也可在特殊情况下出现蛋白尿，主要见于：功能性蛋白尿，体位性蛋白尿(可能为脊柱前凸压迫左肾静脉引起)；暂时性蛋白尿，可因一时的高热、严寒、剧烈运动以及妊娠等引起。功能性蛋白尿的特点是一过性，且尿中蛋白量增高一般<0.5g／24h.，很少超过1g／24h。

病理情况下，即尿中蛋白质持续超过150mg／24h时或持续定性阳性即有临床意义。肾小球性蛋白尿：尿蛋白以白蛋白为主，常见于急、慢性肾小球肾炎、肾小球肾病、糖尿病肾小球硬化症、狼疮性肾炎、过敏性紫癜性肾炎以及肾静脉血栓形成、肾动脉硬化、心功能不全、肾肿瘤等，尿蛋白量通常少于3g／24h，但也可达20g／24h(如肾病综合征)；肾小管性蛋白尿：通常以小分子量蛋白为主(如β2－微球蛋白)，常见于：活动性肾盂肾炎、Fanconi综合征、肾移植、镉等重金属中毒等；尿蛋白通常1～2g／24h；溢出性蛋白尿见于血红蛋白、免疫球蛋白或片段产生过多，如多发性骨髓瘤的Bence－Jones蛋白、重链病、轻链病等；组织性蛋白尿由于肾小管蛋白分泌过多或肾组织破坏分解，如Tamm－Horsfall糖蛋白、lgA、粘蛋白等；如下泌尿道感染(膀胱炎、尿道炎)出现尿蛋白为假性蛋白尿。

3.3尿中蛋白的检测，可用于初步判断肾脏的功能、协助诊断其他系统多种疾病以及进行疾病的动态观察、疗效评判；作为尿液常规检查项目之一，尿蛋白定性试验主要作为人群健康筛检和疾病的初步提示，如要准确反映肾脏的功能，则要作肾功能试验(如内生肌酐清除率、血清肌酐、血尿素氮、酚红排泄试验等)以及物理检查(如静脉肾盂造影等)。

3.4尿蛋白检查，无论定性或定量方法，均有各自的敏感性和特异性，并可受多种非疾病因素的干扰。

参考文献

[1]中华检验医学杂志编辑部.全国首届医院临床实验室自动化学术峰会会议纪要[J].中华检验医学杂志，2005，28:11-16.

[2]胡望平，胡盈莹，黄兢姚.尿总蛋白／肌酐正常参考值的探讨[J].中华肾脏病杂志.2004.121-121.

[3]王平.不同尿标本尿蛋白检测结果的比较[J].中国中医药现代远程教育.2010.(21):154.