芪芍方有效部位中黄芪甲苷和黄芪总皂苷质量控制方法的建立分析

杨丹丹

（海南皇隆制药股份有限公司海南海口570311）

【摘要】目的：建立高效液相色谱法和紫外可见分光光度法检测芪芍方中黄芪甲苷和黄芪总皂苷含量的方法。方法：采用液相色谱法测定黄芪甲苷和采用紫外分光光度法测定黄芪总皂苷。结果：该方中黄芪甲苷的平均含量为0.46%，该方中黄芪总皂苷平均含量为9.7%。结论：采用HPLC和UV进行芪芍方中黄芪甲苷和黄芪总皂苷含量测定及其方法学考察，方法稳定可行。

【关键词】芪芍方；黄芪甲苷；黄芪总皂苷

【中图分类号】R28【文献标识码】B【文章编号】2095-1752（2016）22-0362-02

芪芍方具有健脾化湿，疏肝理气之功效，有研究发现该方有效物质基础成分为黄芪甲苷为主的黄芪总皂苷物质；本研究在代丽萍[1]的研究基础上对其方法进行验证和改进，为该方的质量控制提供科学依据。

1.仪器与试剂

Agilent1260液相色谱仪，岛津1800紫外可见分光光度仪，超声波清洗机，上海杜文化学科技公司的色谱乙腈，双蒸水；葛根、赤芍、黄芪购自湖北九州通药业有限公司，且均经过生药学教授鉴定确认。用10%乙醇溶液提取浓缩再过大孔吸附树脂制得本研究所得样品。

2.方法与结果

2.1.1对照品制备精密称定7.0mg对照品用甲醇定容到10ml，制成浓度为0.70mg/ml的对照品，置于4度冰箱备用。

2.1.2供试品的制备精密称定140.2mg的样品用10ml的水溶解，用20ml正丁醇振摇后提取，提取4次，合并提取液，用20ml的氨试液洗涤2次，弃去氨试液，挥干正丁醇，得残渣用2ml的水溶解，再过AB-8大孔吸附树脂，先用水冲柱至无色，再用40%的乙醇溶液冲柱，弃去洗脱液，再用80%的乙醇冲洗，收集洗脱液，挥干溶剂，所得提取物用5ml的甲醇溶解并定容到5ml，得供试品溶液。

2.1.3色谱条件ZorbaxXDB-C18色谱柱，流动相：乙腈：水（30:70），流速：1ml/min，漂移管温度：100度，柱温箱：30度，空气流速：2.7L/min,在该色谱条件下，各成分分离较好。

2.1.4线性关系考察吸取黄芪甲苷对照品2、4、6、8、10、12ul，注入液相色谱仪中，重复进样三次，取平均值。以峰面积的自然对数为纵坐标，浓度的自然对数为横坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y=0.265x-0.0056，r=0.9993，表明样品在1.4～8.4μg范围内呈良好的线性关系。

2.1.5精密度试验精密吸取对照品溶液10ul于液相色谱仪中，同一天里连续进样6次，测峰面积，得RSD1.11%，表明仪器日内精密度良好。

2.1.6加样回收试验向已知含量的五份样品中加入前面制备的对照品0.5ml，计算样品的加样回收率,平均回收率为95.6%，RSD为2.12%。

2.1.7含量测定取三批样品，每批次样品各三份，每份150毫克，制备供试品溶液，测其峰面积，外标法计算含量，见表1。

表1供试品中黄芪甲苷的含量测定

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2.2黄芪总皂苷含量测定

2.2.1对照品制备方法参照前文对照品的制备方法。

2.2.2样品制备精密称定该方45mg用少量水溶解，上MCI柱，用40ml水洗脱，再用30%乙醇洗脱，弃去洗脱液，再用80%乙醇洗脱，回收洗脱液，挥干溶剂，用甲醇溶解定容到10ml，精密量取0.3毫升，用10%甲醇溶解，上反相C18固相萃取小柱，先用10ml的10%甲醇洗脱，弃去洗脱液，再用90%甲醇洗脱，回收洗脱液即为供试品溶液。

2.2.3含量测定方法用1ml移液管吸取1ml样品，加入0.2ml的5%香草醛-冰醋酸和0.8ml的高氯酸，在75度水浴加热25min，然后冷却，再加入5ml的冰醋酸，先扫描其最大波长，在400～800nm范围内，最大吸收波长为541～544之间，同时检测对照品的最大波长为543，故选择543为最大波长，在543nm下测吸光度。

2.2.4标准曲线的绘制精密吸取对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于具塞试管中，按照样品测定方法，测定其吸光度，以吸光度为横坐标，以浓度为纵坐标绘制标准曲线，得标准曲线为Y=0.265x-0.0056，r=0.9993。

2.2.5加样回收试验向已知含量的五份样品中加入前面制备的对照品0.5ml，计算样品的加样回收率,平均回收率为96.6%，RSD为2.22%。

2.2.6样品含量测定结果取三批样品，每批次样品各三份，每份50毫克，制备供试品溶液，测吸光度并计算含量，见表2。

表2供试品中黄芪总皂苷的含量测定

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3.讨论

黄芪总皂苷类成分是芪芍方的有效物质基础成分，该成分的含量高低对该方的药效有非常重要的影响，故控制黄芪总皂苷的质量非常关键；该方中的芍药苷类成分与黄芪总皂苷的吸收光谱非常接近，故将两大类成分分离是该研究的重点，我们在文献研究的基础上[1-3]采用上MCI柱分离和上反相C18固相萃取小柱纯化的方法，制得样品，进行检测，无干扰；经检验该方中黄芪甲苷的平均含量为0.46%，黄芪总皂苷平均含量为9.7%。采用HPLC和UV进行芪芍方中黄芪甲苷和黄芪总皂苷含量测定及其方法学考察，方法稳定可行。

【参考文献】

[1]代丽萍,石任兵,梁吉春.芪芍方有效部位中黄芪甲苷和黄芪总皂苷质量控制方法的建立[J].北京中医药大学学报,2010,04:270-273.

[2]江燕,晁若冰.黄芪药材中黄芪甲苷和总皂苷含量的比较[J].华西药学杂志,2007,22(3):322-324.

[3]李永吉,管庆霞,关延彬等.HPLC与比色法测定复方黄芪注射液中总皂苷与黄芪甲苷含量[J].黑龙江医药,2004,17(1):1-3.