头孢拉定清洁残留检验方法验证

姚巍

【摘 要】本文主要对头孢拉定清洁残留检验方法进行合理的验证，从多方面展开验证工作，一方面要验证方法的精密度和准确性，这是验证的关键部分，另一方面则是从专属性、定量限等专业角度进行验证，通过全方面的合理验证，最终证明方法的可靠性，希望本文为今后的头孢拉定清洁残留检验提供参考。

【关键词】头孢拉定残留；分析方法验证；高压液相色谱；相对标准偏差

头孢拉定是一种常用药物，一般采用口服的用药方式，具有很好的吸收性，对于多种病菌都有着良好的杀菌效果，用于感染性疾病的治疗。在生产头孢拉定药品医护，需要对仪器进行清理，但是仅靠肉眼无法确定设备是否清理干净，为此建立了残留检验方法，为设备的清理工作提供帮助。

1仪器及试剂

本次验证需要的设备及试剂较少，仪器为高校液相色谱仪，试剂则为头孢来定药品的对照品。

2色谱条件

检测器：紫外检测器X=254nm

色谱柱:C185/xm4.6x150mm

流速：1.0ml/min

流动相的配置：水-甲醇-3.86%醋酸钠溶液-酸溶液=3500:1400:75:15

3方法与结果

3.1专属性

先进行专属性的检测，主要对方法的专一性进行检测，在样品可能含有不同物质的情况，检测过程中，分析方法可以针对性的检测被测物质，这精确得到物质的特性即为专属性。这种测试一般都会安排空白试验，用来对比该分析方法的检测结果。本次试验中，先却适量的头孢拉定溶液，可以通过药品粉末加纯化水的方式制备，并另取一份纯化水作为对比的空白溶液，使用棉签蘸取设备的溶出液，可以减少对试验的干扰性。

3.2检测限

检测限别名检出限，可以理解为一种最低值，在检测中被测物检测出来的最低值即为检测线。先进行头孢拉定溶液的制备，按照标准溶液的要求制备低浓度溶液，将次作为调整的依据，并对对照溶液的浓度进行合理的调整，在达到信噪比的3倍时，及得到了检测线的具体浓度。按照上述步骤进行检测限的测试，在调节到3.1的信噪比时，可以得到溶液的具体浓度为3.87055×10-5mg/ml，也就得到了本次试验的检测限浓度。

3.3定量限

在定量检测时，被测物能被测量的最低检测值即为定量限，也是一种最低值。这种最低值具有精确度，可以保证后续试验的准确性。对分析方法进行定量限检测，可以确定分析方法是够具备灵敏性。例如，进行杂质的定量测试，可以在杂质非常少的情况下，精确检测出杂质的具体含量。定量限的测试方法与检测限具有同样的思路，先按照标准溶液进行低浓度头孢拉定溶液的制备，然后进行信噪比的调整，在达到10:1的信噪比以后，即可得到相应的定量限浓度。根据上述的思路进行测试，在信噪比为10.6时，可以得到溶液浓度为1.2164×10-4mg/ml，可以得到本次测试的定量限浓度。

3.4线性范围

方法的测定范围可定义为分析方法有足够的准确度、精密度和线性的最高和最低浓度。线性指在设计的测定范围内，响应信号与试样中被测物浓度成正比关系的程度。配置不同浓度的头孢拉定溶液，在5%-150%的范围内，分別为标准规定的5%、10%、20%、30%、40%、60%、80%,100%J50%)9个浓度值注入色谱系统，记录色谱图，根据测得头孢拉定峰面积和对应的头孢拉定浓度进行线性回归，列出回归方程、求出相关系数re并对测定结果进行评价。经测试，线性范围为0.276μg/ml-8.325μg/ml；线性回归方程Y=28.915x+0.3779；相关系数r为0.9997。符合设计要求。

3.5精密度

精密度是指经多次取样重复测定同匀一均匀样品所得结果之间的接近程度。常用标准偏差和相对标准偏差来表示。配置含头孢拉定0.75μg/ml的溶液，在测定条件下分别进头拉定供试品溶液6次，以峰面积计算浓度的相对标准偏差。由不同分析人员，在不同仪器条件下进行浓度测定，3个供试品溶液分别进样两次，汇总2组数据进行分析，计算结果的相对标准偏差。重复性经测试，测得头孢拉定溶液浓度为0.755μg/ml,结果的相对标准偏差为0.6%，符合设计要求。中间精密度经测试，由不同的分析人员，在不同的仪器条件下，测得三组头孢拉定溶液浓度的相对偏差分别为0.7%、0.6%、0.8%。三组数据均符合设计要求。

3.6准确度

准确度是最为关键的因素，将多次测定的结果合理统计，并取平均值与实际值进行对比，与实际值越相似，则测试的精确度越高。本次试验中，先进行头孢拉定样品的称取，选择三种浓度的溶液，每种浓度的溶液各备三分，使用100ml容量品保存溶液。将每份溶液都加入纯化水稀释到100ml，并且将色谱仪放入制定位置，使用外标法进行计算，并将得到的结果和对照组合理对比，得到具体的回收率为99.96%~100.13%之间。使用棉签去头孢拉定溶液，并且涂抹在准备好的不同材质上面，放置一段时间晾干。并且使用新棉签重新擦拭，先将棉签蘸水，并按照一定顺序擦拭，本次试验中先横向在纵向，要注意的是，在更换方向的同时，还要将棉签反面。一定要选定一个方向擦拭，不可进行反复擦拭。要保证擦拭的全面性，避免出现任何遗漏。在擦拭结束后，要对棉签进行合理处理，使用流动相容的方法，将棉签中含有的溶液进行测试，使用滤膜过滤以后，技能进行定量测试，采用的测试方法为外标法，并进行回收率的合理计算。按照上述要求进行一些系列的测试之后，得到了具体的回收率，具体为98.8%和89.2%，满足实际的设计要求。

3.7耐药性

分析方法的耐用性指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度。配置含头孢拉定0.75μg/ml的溶液。耐用性:改变流速后，测定头孢拉定浓度计算结果的相对标准偏差。并对供试品溶液分别在初始时、冰箱内放置1小时、4小时、6小时、8小时、9小时进行测定。测定供试品溶液放置后的峰面积与初始值的差值，以验证供试品溶液的稳定性。经测试，流速分别为0.9ml/min、1.0ml/min、1.lml/min时，三组样品中头孢拉定浓度的计算结果的相对标准偏差为1.3%、1.1%、0.9%，符合设计要求。经测试:溶液冷藏放置9小时后，头孢拉定峰的峰面积的结果与初始值的相对偏差分别为:0.1%、0.6%、0.4%、0.6%、1.4%，符合设计要求。

4结语

本文对头孢拉定的清洁残留分析方法进行合理的验证，确定了该方法具有租后的适用性。本文从多方面展开分析，主要以专属性、检测限、耐药性、精密度、准确度、线性范围、定量限等等几方面展开试验，通过实际的试验证明分析方法的适用性，可以满足大部分的仪器残留分析，为头孢拉定药品今后的制备提供一定的帮助。虽然本次研究可以证明该分析方法的适用性，但是在今后的应用过程中，如果出现变更现象，例如更换仪器、更换生产工艺、改变原有的清洁流程等等，都会影响到分析方法，产生精确度下降的问题，为此，再出现以上几种情况时，要重新进行验证，才能确定分析方法的适用性。

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