青梅茎中总三萜酸的含量测定

  作者：莫峥嵘 王安伟 莫燕琴 陈光英 韩长日

【摘要】  目的测定青梅茎中总三萜酸的含量。方法以熊果酸为对照品，5％香草醛-冰乙酸和高氯酸为显色剂，采用紫外分光光度法在548 nm波长处测定样品的吸光度。结果熊果酸对照品在20～100 μg范围内呈良好线性关系。其回归方程为Y=-0.040 5+0.008 29X，R2=0.999 4。青梅茎中总三萜酸的含量约为2.15％。结论紫外分光光度法适合青梅茎中总三萜酸的含量测定，方法操作简便，结果稳定，重复性好。

【关键词】  分光光度法 总三萜酸 青梅

青梅Vatica mangachpoi Blanco［1］系龙脑香科(Diptercocarpaceae)青梅属(Vatica genus)植物，青梅又称为青皮、海梅和油楠，主要分布于海南保亭、三亚、东方、白沙、乐东、万宁和琼中等地区。在民间，青梅叶长期用作杀菌消毒，治疗肝炎及提取中药龙脑香。通过对青梅茎的有效成分的提取、分离、纯化及结构鉴定，确定青梅茎中含有熊果酸(Ursolic acid ) ［2］。熊果酸是三萜酸类化合物，三萜酸类广泛地存在于自然界，且有广泛的生物活性，如抗炎活性，抗肿瘤活性，抗菌和抗病毒活性，降低胆固醇，降血糖，免疫活性，杀软体动物活性等［3］。青梅茎中总三萜酸的含量测定还未见报道，而紫外分光光度法可用于总三萜酸的含量测定［3］。为了充分利用青梅药用植物，本实验以熊果酸为对照品，利用紫外分光光度法首次测定青梅茎中总三萜酸的含量，为青梅的开发利用提供有意义的基础数据。

    1  仪器与材料

    紫外可见分光光度计（北京普析）；RV05-ST 旋转蒸发仪（德国）；95%乙醇，无水乙醇，香草醛，高氯酸，冰醋酸均为国产分析纯；青梅药材采自海南万宁，经海南师范大学生物系钟琼芯副教授鉴定为龙脑香科青梅属植物Vatica. mangachpoi Blanco。标本现存于海南师范大学海南省热带药用植物化学重点实验室；熊果酸对照品购自芜湖甙尔塔医药科技有限公司DELTA(甙尔塔)天然有机化合物信息中心。

    2  方法［3～6］

    2.1  对照品溶液的制备准确称取105℃干燥至恒重的熊果酸对照品10.0 mg，置于100 ml容量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为100 μg/ml的对照品。

    2.2  供试品溶液的制备将粉碎过的青梅茎于50℃干燥，准确称取5.00 g，用200 ml的95%乙醇超声提取20 min，抽滤，滤渣再用100 ml的95%乙醇超声提取20 min，合并滤液，回收乙醇，残留物放冷至室温，用无水乙醇溶解并定容至50 ml，准确吸取3 ml于50 ml容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，制得供试品溶液。

    2.3  测定波长的确定经紫外扫描，熊果酸在548 nm波长处有最大吸收，空白无干扰。

    3  结果［3～6］

    3.1  标准曲线的绘制准确吸取对照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml分别置于5个已编号的5 ml 容量瓶中，沸水浴挥去无水乙醇，冷却，加入5%香草醛冰乙酸溶液0.2 ml，高氯酸0.8 ml ，将容量瓶放人60℃水浴中加热15 min，冷却至室温，用冰醋酸定容到刻度，摇匀。在548 nm波长处测定吸光度值。结果见表1。表1  对照品不同熊果酸含量的吸光度
以熊果酸含量（μg）为横坐标，吸光度值为纵坐标，作图得到标准曲线，其回归方程为Y=-0.040 5+0.008 29X，R2=0.999 4。结果表明，熊果酸在20～100 μg范围内，熊果酸含量（μg）与其吸光度呈良好的线性关系。   3.2  稳定性实验分别取对照品溶液及供试品溶液0.4 ml，按含量测定条件测定，在548 nm处每间隔10 min测其吸光度值（见表2）。结果表明，在显色90 min内，对照品溶液和供试品溶液稳定性都比较好。表2  不同时间吸光度值

    3.3  精密度实验取同一批样品，进行5次平行实验，测定含量，结果表3，RSD=2.77%，表明精密度良好。表3  精密度实验

    3.4   重复性实验准确称取同一批青梅茎粉末5份，每份5.00 g，按“2.2”项方法制备供试品溶液，并按含量测定条件测定。结果见表4。RSD=2.78%。表4  重复性实验

    3.5  加样回收率实验准确称取5份已知含量的青梅粉末各5.00 g，准确加入一定量的的熊果酸对照品，按“2.2”项方法制备供试品溶液，按含量测定条件测定（结果见表5）。结果表明，平均回收率为102.5%，RSD=0.62%。表5  加样回收率实验

    3.6  样品含量测定准确称取3份青梅粉末各5.00 g，按“2.2”项方法制备供试品溶液。从上述3份供试品溶液中各取0.4 ml，沸水浴挥去无水乙醇，冷却，加入5%香草醛冰乙酸溶液0.2 ml，高氯酸0.8 ml，将容量瓶放人60℃水浴中加热15 min，冷却至室温，用冰醋酸定容到刻度，摇匀。在548 nm波长处测定吸光度值，结果见表6。表6  青梅茎中总三萜酸的含量测定

    4  结论

    青梅茎中总三萜酸含量的测定未见文献报道，本实验首次采用紫外分光光度法测定了其含量，其含量为2.15％。该方法简便可靠，结果稳定，重复性好。

【参考文献】
  ［1］ 吴德邻. 海南及广东沿海岛屿植物名录［M］.北京：科学出版社，1994：58.

［2］ 莫峥嵘，陈光英，韩长日，等.青梅茎的化学成分研究（Ⅰ）［J］.中山大学学报（自然科学版），2007， 46(2)：126.

［3］ 张雁冰，王克让，刘宏民. 马桑叶中总三萜酸的含量测定［J］.时珍国医国药，2006， 17(4)：529.

［4］ 罗启剑，祝德秋，崔 岚，等. 分光光度法测定连钱草中熊果酸含量［J］.药学服务与研究，2003，3(4)：268.

［5］ 李国章，于华忠，卜晓英，等.分光光度法测定湘产苦丁茶中熊果酸含量［J］.光谱实验室，2006，23(2)：401.

［6］ 何正有，张 艺，张 旭，等. 分光光度法测定藏药翼首草中总皂苷的含量［J］.华西药学杂志，2002，17(1)：43.