简介：橡胶树起源热带雨林,对低温敏感。在中国橡胶树（Heveabrasiliensis）种植受到严重的低温胁迫影响,而CBF/DREB1（C-repeatbindingfactor/dehydrationresponsiveelementbindingfactor1）是低温信号通路中重要的转录因子,但目前橡胶树中仅克隆到HbCBF1。本研究从橡胶树中克隆出两个新的CBF家族基因HbCBF2和HbCBF3。经测序,HbCBF2和HbCBF3分别编码了234个和242个氨基酸。氨基酸序列分析表明HbCBF2和HbCBF3均含有CBF家族特有两个短肽序列包括一个保守的DNA结合结构域和NLS簇。通过构建进化树发现HbCBF2、HbCBF3与HbCBF1以及拟南芥中的CBF序列同源性很高。将HbCBF2和HbCBF3构建到pGEX4T-1原核表达载体上,在Transetta（DE3）中进行表达。SDS-PAGE电泳检测它们蛋白质表达量为51.8kD和53kD,与预期一致。对蛋白的诱导条件进行优化,构建融合表达质粒pGEX4T-1-CBF2和pGEX4T-1-CBF3,在28℃、IPTG浓度为0.4mmol/L的情况下表达量最佳。实验为纯化蛋白和研究HbCBF2和HbCBF3在橡胶树中的功能提供理论帮助。

简介：紫外线B(UV-B)对于植物生长发育具有重要调节作用,其中UVRESISTANCELOCUS8蛋白作为UV-B的光受体在植物响应UV-B过程中起关键作用。草莓是一种重要的经济果树,目前关于草莓的UV-B光受体报道较少。为研究草莓中UV-B受体蛋白,本研究采用同源克隆的方法获得‘丰香’草莓中编码UV-B光受体蛋白的cDNA序列,进行了生物信息学的分析并构建了原核生物表达载体pET32a-UVR8,利用中心点响应面法优化了重组蛋白的诱导条件(包括诱导温度,IPTG浓度,菌液浓度和诱导时间)。结果表明:克隆得到了编码草莓UVR8蛋白的全长cDNA序列,命名为FaUVR8,生物信息学分析表明该序列长1317bp,编码438个氨基酸,预测分子量为47.28kD,等电点pI为5.85,重建蛋白质三维结构表明该蛋白包含7个β-片状螺旋结构;原核表达得到69.7kD的融合蛋白,对四个诱导条件优化表明将工程菌培养至菌液OD600=0.7,加入浓度为0.55mmol/L的IPTG,在27.72℃下诱导9h,可获得最大量重组蛋白79μg/mL。研究结果可为后期寻找与FaUVR8蛋白互作的下游蛋白,以及进一步开展其功能研究提供参考。

简介：硬头鳟早期发育过程中存在三种红血细胞核类型，圆形的幼体核（L核，在圆盘形的红血细胞内），椭圆形的成体核（A核，在椭圆盘形的红血细胞内）和近椭圆形的未成熟的成体核（ImA核，在近椭圆盘形的红血细胞内）。L核从胚胎早期发生（眼点期前后）至卵黄吸收完毕后（受精后65日，孵出后33日）消失，其间核直径逐渐减少，减幅达29．7％。A核从胚胎孵出时开始出现，至卵黄吸收完毕后，A核基本取代其它类型核，其间核长短径持续发生变化。长径逐渐增加，短径逐渐减少，这种变化直至受精后99日才稳定下来，此时A核长径增幅为43．1％，短径减幅为22．3％，长短径比率由1．11增至2．04。ImA核在胚胎孵出时开始出现，但比例很少，尺寸变化不大，在卵黄吸收完毕稍后（受精后74日,孵出后42日，）可忽略大计（基本上转变为A核）。在胚胎孵出前，红血细胞核全为L核；在卵黄吸收期间，L，A和ImA3种混合存在，核大小及形状发生急剧变化，核类型迅速发生转换，最终全为A核所取代，这种变化和Ichiro(1974）所描述的虹鳟红血细胞的变化基本一致。在卵黄吸收完毕后（受精后74日），A核尺度相对稳定。Wright染色后在显微镜下观察，细胞核着色深，核形状清晰，便于测量。所以，硬头鳟（虹鳟）早期发育中，这一阶段用红血细胞测量鉴别其倍性的合适取样时期。

简介：采用RT—PCR方法从马流感病毒中国分离株A／马／新疆／07（H3N8）中扩增的HA1基因片段，将其克隆到表达载体pET-28a（＋）中，测序正确后转化入Rosetta（DE3）中进行IPTG诱导表达。结果表明，重组菌表达出约53ku，以沉淀性形式存在的重组蛋白，

简介：为研究A型禽流感病毒M2蛋白胞外功能区（M2e）蛋白亚单位疫苗在鸡体的免疫保护力，利用笔者所在实验室已构建的含M2e基因的质粒pGEM—T-1459，获得顺次串联的基因片段3M2e，将其克隆到原核表达载体pMAL—C2x中，经酶切和DNAN序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，经IPTG诱导表达，SDS—PAGE和Western—blot分析，结果显示，