简介：

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简介：目的构建并筛选出最有效的HPV16E6基因特异的小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)表达载体,观察其对宫颈癌细胞中HPV16E6基因表达的长期影响,探讨E6基因在宫颈癌发生过程中的分子作用机制,为临床HPV感染及宫颈癌治疗探索新方法.方法构建HairpinsiRNA质粒,稳定转染宫颈癌SiHa细胞,鉴定转染细胞中的质粒DNA,通过Real-TimeRT-PCR检测细胞中HPV16E6mRNA表达,采用Western-blot检测p53、p21等蛋白的变化.MTT法(四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法)检测SiHa细胞转染siRNA后细胞增殖曲线.结果HPV16E6AhairpinsiRNA表达载体转染人宫颈癌SiHa细胞,可以在细胞内长期表达siRNA,有效抑制细胞内HPV16E6基因的表达.E6AsiRNA能抑制细胞生长,作用持续达4个月以上.结论利用siRNA表达载体抑制整合在细胞中的外源HPVE6病毒癌基因可能是治疗HPV感染和宫颈癌的一种新的理想方法.

简介：摘要：目的：在研究中基于多重实时荧光定量PCR的方法以及相关的技术，来建立一个能够同时对14中高危型人乳头瘤病毒进行检测与分析，来有效地建立一个对癌基因E6/E7mRNA的检测方法。方法：在此次研究中选取我院223例临床样本进行检测与分析，来探究14种高危型人乳头瘤病毒中，不同病毒的E6/E7基因序列，来探究这些基因序列中存在的区域设计特异性，并且结合相对应的反应体系来构建一个高危型人乳头瘤病毒E6/E7mRNA的检测方法与系统。在实验中需要结合这些临床样本来利用温核算扩增技术进行高危型人乳头瘤病毒E6/E7mRNA检测，最终来探究其检测结果与宫颈组织病理学检测结果之间是否存在着一致性。结果：在实验中所建立的检测方法，能够在试验检测中将检测限提升更高的程度，并且对于一些常见低危型HPV中也并没有出现交叉检出的情况，使用多重实时荧光定量PCR方法所检测出的结果与Aptima HPV检测结果是具有较好的一致性，并且多重实时荧光定量PCR法中的敏感性为84.0%，特异性更是高达94.4%阴性预测值比阳性预测值高出更多，高达97.9%，而阳性预测值仅为65.6%。结论：使用多重实时荧光定量PCR法进行检测有着特异性好、稳定性好以及灵敏性高等等优势，能够在为高危型人乳头瘤病毒的患者提供一个更好的诊断方案以及技术平台。

简介：革兰阴性菌是临床常见致病菌，但这些年由于各种抗生素的大规模使用，多重耐药革兰阴性菌比例逐年上升，多粘菌素作为革兰阴性菌的最后一道防线，再次引起了广泛的关注。多粘菌素B（polymyxinB）最早于1947年在Bacilluspolymyxa的二次代谢产物中提取得到，1949年在B.polymyxasubsp.colistinus中得到多粘菌素E（polymyxinE）。1959年作为抗菌药物用于临床，由于严重的肾毒性，而逐渐被新晋抗菌药物取代。近期，除了替加环素批准用于治疗多重耐药鲍曼不动杆菌（但该药对铜绿假单胞菌无效）外，就再无其他新研发的针对多重耐药革兰阴性杆菌感染的药物，但随着替加环素的大规模使用，耐药率也呈明显的上升趋势。所以，原来的抗菌药物，如多粘菌素被再次启用，作为治疗泛耐药革兰阴性杆菌感染的最后选择。

简介：随着技术的不断进步,数字化建设对档案管理工作产生深远影响,档案管理数字化系统（E6）的产生标志着档案管理向信息化、科学化管理迈进了一步。本文对E6档案管理系统在石油化工档案管理中的作用进行了全面分析,认为该系统在石油化工企业项目自主研发、商品的生产销售以及企业自身建设中起着重要的作用。

简介：摘要目的探讨hnRNP E1对HPV16早期基因E2、E6表达的调控及宫颈癌细胞生物学功能的影响。方法采用体外细胞实验方法，对HPV16阳性人宫颈鳞癌SiHa细胞株采用hnRNP E1cDNA质粒上调hnRNP E1表达，于上调前、后采用Real-time PCR和Western blot分别检测各组细胞HPV16 E2、E6 mRNA和蛋白表达水平，同时，应用CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖、周期及凋亡。采用SPSS 22.0和Graphpad Prism 7.0软件进行相关资料分析。结果随着转染时间的增加（24、48、72 h），hnRNP E1过表达组的SiHa细胞活性及处于增殖状态的细胞数逐渐减少（P<0.05），而G0/G1期细胞比例增高，S、G2/M期细胞比例及增殖指数降低（P<0.05），晚期凋亡率和细胞总凋亡率逐渐增加（P<0.05）。hnRNP E1过表达组HPV16 E6 mRNA和蛋白表达水平低于空白组和空质粒组，差异有统计学意义（P<0.05），且随着HPV16 E6 mRNA和蛋白表达水平的降低，SiHa细胞增殖指数下降，而总凋亡率有增加趋势。3组间HPV16 E2 mRNA表达量差异无统计学意义（P=0.427），HPV16 E2蛋白未被检测到。结论hnRNP E1可抑制HPV16 E6的转录和翻译，进而抑制宫颈癌细胞增殖，促使凋亡，hnRNP E1可作为抑制宫颈癌变的潜在靶标。但本研究未发现hnRNP E1与HPV16 E2在SiHa细胞中的关系。

简介：摘要目的构建人乳头状瘤病毒（HPV）16 E6/E7基因稳定表达的人永生化角质形成细胞（KC），为研究HPV16 E6/E7诱导的细胞永生化及恶性转化机制提供细胞模型。方法两步消化法分离培养原代人包皮角质形成细胞（HFK），利用慢病毒感染技术对细胞稳定转染HPV16 E6/E7基因，连续培养30代以上，筛选出永生化KC，分为3组：①空白对照组：传代2次的原代HFK；②实验组：传代2次的原代HFK感染LV5-HPV16 E6/E7，感染细胞记录为A0代，感染后以传代次数记录（A1、A2……）；③阳性对照组：HPV16阳性宫颈癌细胞SiHa。应用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、Western印迹实验分别检测空白对照组、实验组、阳性对照组HPV16 E6/E7 mRNA、蛋白及CK14蛋白的表达，CCK-8及Transwell Insert方法检测细胞的增殖及侵袭能力。裸鼠致瘤实验检测实验组A30、阳性对照组SiHa细胞的致瘤能力。结果成功分离原代HFK。LV5-HPV16 E6/E7重组质粒感染原代HFK后，空白对照组细胞无荧光表达，连续传代后出现衰老表现，实验组A30细胞体积、形态较原代HFK无明显变化，且荧光表达率为100%。与空白对照组相比，实验组A1、A10、A20、A30细胞HPV16 E6 mRNA表达水平显著升高（t值分别为7.12、8.07、6.53、5.66；P值分别< 0.001、< 0.001、= 0.001、= 0.005）；与空白对照组相比，实验组A1、A10、A20、A30细胞HPV16 E7 mRNA表达水平也显著升高（t值分别为3.20、4.29、3.75、4.22；P值分别为0.024、0.008、0.013、0.014）。空白对照组未见HPV16 E6/E7蛋白的表达，而A30及SiHa细胞可见HPV16 E6/E7蛋白的表达。CCK-8实验显示，实验组A10、A20、A30细胞增殖水平显著高于空白对照组（t值分别为6.49、7.55、9.43；P值分别为0.003、0.002、0.001），而A1的增殖水平与空白对照组比较，差异无统计学意义（t = 2.40，P = 0.074）。Transwell Insert侵袭实验显示，A30不能穿过基底膜，SiHa细胞可穿过基底膜被染成蓝色。裸鼠接种A30细胞2个月后无肉眼可见肿瘤，组织学亦显示无肿瘤形成，裸鼠接种SiHa细胞后可于皮下形成肿瘤。结论通过采用慢病毒技术转染HPV16 E6/E7基因成功建立人永生化角质形成细胞，可作为HPV相关研究中的理想细胞模型。

简介：【摘要】目的：探究在宫颈癌筛查中采用DNA倍体定量分析联合HPV E6/E7mRNA检测的临床价值。方法：选取2020年10月～2021年10月于我院行宫颈癌筛查的3000例女性，均行DNA倍体定量分析结合HPV E6E7mRNA检测。结果：两者联合检查的阳性率为（6%，180/3000），病理活检后ClN 1级及以上为（64.44%，116/180）。结论：DNA倍体定量分析结合HPV-E6/E7mRNA检测在宫颈癌筛查中的应用价值较高，能够为患者的进一步诊疗提供可靠依据。

简介：本文在分析了北京同步辐射室4B9B原束线低能分支的构造及弊病后，在不影响束线高能分支性能及总体机械结构的基础上提出了改进方案。文中不仅详细介绍了该设计方案，同时也介绍了97年4月份专用光开始前夕的调试工作及出光后束线的性能测试工作，测试结果完全符合设计要求。该束线在这次同步辐射专用光实验中充分发挥了改进后的优势，取得了令人满意的结果。

简介：对于覆盖层和大粒径坝料，单纯依靠室内试验难以准确测定其模型参数，近年来联合室内和现场试验反演分析确定本构模型参数的方法日益受到重视。但待反演参数过多时反演结果可能会出现多值问题，因此需要合理选择待反演参数。本文研究了土石坝应力变形计算中位移对邓肯E—B模型参数的敏感性，讨论了影响分析结果的因素，给出了邓肯E—B模型参数的敏感性排序。研究结果可作为选择待反演参数的依据，同时也可为土石坝应力变形分析结果的综合评价提供支持。

简介：E790／E792（B）手机的CPU、电源芯片和字库都是采用封胶，字库虚焊较少。软件方面存在的问题约占15％左右，其余多为硬件故障引起的。其故障表现为：显示异常（花屏）、信号弱、无服务、不识卡、不充电、不开机、不能下载、死机、自动关机、自动重启、不插耳机时显示耳机符、听筒无声等故障。其中由CPU、电源芯片虚焊或者损坏引起的故障占硬件故障的30％左右。以下介绍个人维修的方法，供大家参考。

简介：摘要目的探讨在宫颈细胞学ASC-US分流管理中高危型人乳头瘤病毒E6/E7的临床检测价值。方法选择在2016年4月-2017年4月期间来本院妇科门诊进行宫颈TCT检查结果为ASC-US的50例患者作为研究对象，对所有患者采取HR-HPVDNA分型检测与E6/E7mRNA检测，同时进行宫颈活检与阴道镜检查。对HR-HPVDNA与E6/E7mRNA检测结果的特异性与敏感度进行比较与分析。结果对于CIN2+，E6/E7阳性率为52.5%，HPV阳性率为86.9%；对于CIN2-，HPVDNA检测CIN2+敏感度为87.0%，低于HPVDNA敏感度（91.3%），差异无统计学意义（P＞0.05）；前者特异性为67.5%，高于HPVDNA特异性（25.0%），差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论E6/E7表达与宫颈病变关系密切，HPVE6/E7mRNA检测可反映病毒的致癌能力，对细胞学检查为ASC－US患者有一定的分流价值。

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简介：摘要目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA和高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)检测在液基薄层细胞学检测(TCT)异常的绝经女性宫颈病变筛查中的临床研究。方法本研究为回顾性研究，选取2019年1月至2021年4月北部战区总医院妇产科收治的502例TCT检查结果异常的患者，年龄(56.05±8.46)岁，年龄范围为45~74岁。所有患者进行HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV检测及病理检查。结果502例患者的病理结果中，正常及炎症102例，低度鳞状上皮内病变(LSIL)64例，高度鳞状上皮内病变(HSIL)320例，宫颈癌16例。HPV E6/E7 mRNA和HR-HPV在不同病理类型的阳性表达率比较，差异有统计学意义(P<0.001)，两者在正常及炎症、LSIL中，差异有统计学意义(P<0.001)，在HSIL中，差异无统计学意义(P>0.05)。在病理诊断为LSIL及以下中，HPV E6/E7 mRNA的阳性率(53.1%+39.2%)低于HR-HPV(95.3%+66.7%)，差异有统计学意义(P<0.001)，在HSIL及以上病理结果中，HPV E6/E7 mRNA的阳性率(100%+98.1%)高于HR-HPV(100%+95.6%)，差异无统计学意义(P>0.05)。病理诊断在LSIL及以下与HSIL及以上比较，HPV E6/E7 mRNA的阳性表达率前者低于后者，HR-HPV检测的阳性率前者低于后者，差异均有统计学意义(P<0.001)。HPV E6/E7 mRNA在病理诊断为HSIL及以上病变的特异度[55.4%(92/166)]、阳性预测值[80.9%(330/408)]、阴性预测值[97.9%(92/94)]均高于HR-HPV[22.3%(37/166)、71.4%(322/408)、72.5%(37/51)]，差异有统计学意义(P<0.05)，灵敏度[98.2%(330/336)]低于HR-HPV[98.8%(332/336)]，差异无统计学意义(P>0.05)。结论HPV E6/E7 mRNA与宫颈病变病理诊断高低有相关性，联合TCT检测在绝经后女性宫颈病变筛查中有较高诊断价值。

简介：摘要子宫颈癌是影响全球女性健康的第4大恶性肿瘤，也是我国女性第6位高发恶性肿瘤。绝大多数子宫颈癌及癌前病变是由高危型HPV持续感染引起的。近年来，随着对HPV致癌的分子学机制研究的不断深入，发现HPV E6和（或）E7（E6/E7）基因的激活与子宫颈病变的发生、维持及进展有密切关系，故其作为潜在的治疗靶点受到了学者们的广泛关注。本文从治疗性疫苗、基因编辑治疗、免疫治疗和植物药治疗几个方面综述目前靶向HPV E6/E7基因的治疗在子宫颈癌及其癌前病变中应用的研究进展，希望为临床治疗子宫颈癌及其癌前病变提供新的研究思路和策略。

简介：摘要目的探讨人乳头瘤病毒（HPV）16早期基因E2和E6与核不均一核糖核蛋白（hnRNP）E2在宫颈癌变中的作用及其交互效应。方法研究对象来源于课题组在山西省介休市建立的"自然人群宫颈病变队列"，以2014年6—9月经病理学确诊的正常宫颈（NC）女性、低度宫颈上皮内瘤变（CIN Ⅰ）、高度宫颈上皮内瘤变（CIN Ⅱ/Ⅲ）以及同期在山西医科大学第二医院确诊的宫颈鳞状细胞癌（SCC）病例为研究对象。共纳入257名研究对象，NC、CINⅠ、CIN Ⅱ/Ⅲ、SCC组分别为67名（26.07%）、69例（26.85%）、68例（26.46%）、53例（20.62%）。采用问卷调查收集人口学特征、生活卫生习惯及宫颈病变相关信息，并采集宫颈脱落细胞和宫颈活检组织，检测HPV16的感染、hnRNP E2、HPV16 E2和E6的蛋白表达水平。根据NC组的hnRNP E2、HPV16 E2、E6蛋白表达量及E2/E6比值的M值，将研究对象分为高、低表达组/比值组，采用多因素logistic回归模型分析HPV16早期基因E2和E6、hnRNP E2与宫颈癌变的关联，并应用广义多因子降维模型（GMDR）评价其交互作用。结果NC、CIN Ⅰ、CIN Ⅱ/Ⅲ、SCC组的年龄分别为（47.00±9.07）、（47.64±7.35）、（46.37±8.67）和（51.26±8.03）岁。多因素logistic回归模型分析结果显示，HPV16 E2低表达、E6高表达及E2/E6低比值可导致CIN Ⅱ/Ⅲ[OR（95%CI）值分别为11.11（1.63~75.56）、8.00（1.28~50.04）、9.75（1.22~77.72）]和SCC[OR（95%CI）值分别为14.22（2.11~95.88）、10.33（1.67~64.00）、12.38（1.56~97.91）]的患病风险增加；hnRNP E2低表达可导致CIN Ⅱ/Ⅲ、SCC风险增加[OR（95%CI）值为3.35（1.39~8.10）、5.53（1.54~19.88）]。GMDR模型交互作用分析结果显示，hnRNP E2低表达、HPV16 E2低表达、HPV16 E6高表达在CIN Ⅱ/Ⅲ和SCC组均存在交互作用（P值均<0.05）。结论HPV16早期基因的异常表达和hnRNP E2低表达均可能增加宫颈癌变的发病风险，且在宫颈癌变的发生发展中存在交互作用。

简介：1938年冬天,在《纽约客》供职的资深撰稿人埃尔文·布鲁克斯·怀特突然辞职,他与妻子和年幼的儿子,从曼哈顿四十八街的公寓,搬到位于缅因州的咸水农场,过起远避尘嚣的小镇生活,怀特同时开始他作为独立作家的写作生活,开启了个人生命的新时期。最初我知道怀特是因为一幅照片。一幢简朴得几乎没有任何陈设的房间,向上打开的窗户能看到辽阔的海面,一位戴着眼镜面容清癯的白发老人近于肃穆地安坐桌前,面对一台老式打印机安然工作。

简介：摘要目的探讨高危型人乳头状瘤病毒（HPV）E6/E7 mRNA原位杂交技术在宫颈上皮内瘤变（CIN）分级诊断中的应用价值。方法收集四川大学华西第二医院2019年7月至2020年6月组织病理诊断为CIN与宫颈鳞状细胞癌的病例共261例，其中CIN1级60例、CIN2级41例、CIN3级51例、鳞癌72例和形态学正常的宫颈对照组织37例（HPV阴性10例、阳性27例）。将所有病理组织制成组织芯片，分别进行HE染色、HPV E6/E7 mRNA原位杂交检测及p16免疫组织化学染色，在光镜下完成染色判读，并统计分析其阳性率及阳性模式。结果HPV mRNA原位杂交在CIN1级中主要表现为鳞状上皮基底至中层细胞核与质的点状染色（≤BME）及伴表层细胞内弥散整个核的片状染色（supD），即≤BME+supD模式；在CIN2级中主要表现为基底直至中层之上但未达上皮全层的细胞核与质的点状染色模式（>BME）和部分伴supD染色的模式，即>BME+SupD模式；CIN3级主要表现为>BME模式，且点状染色分布于上皮全层。在CIN1级、2级和3级中，上述3种染色模式差异有统计学意义（P<0.05）。结论HPV mRNA原位杂交技术有助于CIN的准确诊断与分级，且有着比p16免疫组织化学染色更佳的特异性。

简介：目的研究高危型人乳头瘤病毒（high-riskhumanpapillomavirus,hrHPV）E6/E7mRNA在结果意义不明的非典型鳞状上皮细胞（atypicalsquamouscellsofundeterminedsignificance,ASCUS）中的分流效率,探索其在ASCUS分流中的临床价值。方法选取2013年至2015年在青岛市立医院妇科门诊行细胞学筛查结果为ASCUS的女性405例,年龄21~65岁。根据HPV检测方法,分为3组：HC2组、HPV分型组、hrHPVE6/E7mRNA（E6/E7）组。比较3种HPV检测方法分流ASCUS的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、阴道镜转诊率、CIN2~＋/CIN3~＋检出率。结果（1）E6/E7分流ASCUS的CIN2~＋灵敏度为100.00%（90.51%~100.00%）,CIN2~＋/CIN3~＋的特异度分别为64.84%（53.06%~75.99%）、56.46%（43.98%~69.72%）,阴性预测值分别为100.00%（99.41%~100.00%）、100.00%（99.34%~100.00%）,与HC2和HPV分型比较差异无统计学意义（P〉0.05）。阳性预测值分别为40.79%（37.91%~44.29%）、15.79%（10.07%~20.94%）,高于HC2（P〈0.05）。阴道镜转诊率为47.80%,低于HC2和HPV分型（P〈0.05）。CIN2~＋检出率为19.50%,高于HC2（P〈0.05）。（2）E6/E7分流ASCUS检测CIN2~＋的曲线下面积为0.815,〉HC2和HPV分型（P〈0.05）。结论hrHPVE6/E7mRNA分流ASCUS的灵敏度、特异度与HC2相似,PPV和CIN2~＋检出率更高,阴道镜转诊率更低,可用于ASCUS的分流。