简介：摘要目的观察二磷酸腺苷(ADP)核糖化因子鸟苷酸激酶1(ASAP1)在调节甲状腺乳头状癌细胞自噬中的作用。方法通过免疫荧光检测郑州大学第一附属医院60例甲状腺乳头状癌组织和癌旁组织中ASAP1以及自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达水平，分析60例标本中ASAP1的表达水平与患者临床病理特征之间的关系，用慢病毒CRISPR/Cas9技术敲除ASAP1来构建稳定细胞系，通过免疫荧光和蛋白质印迹法(Western blot)检测ASAP1敲除组与对照组之间自噬水平的差异，各变量比较采用χ2检验和t检验。结果甲状腺乳头状癌组织中ASAP1蛋白平均荧光强度为276.33，癌旁组织中ASAP1蛋白平均荧光强度为74.67，两组比较差异有统计学意义(P<0.01)；甲状腺乳头状癌组织中LC3蛋白平均荧光强度为74.67，癌旁组织中LC3蛋白平均荧光强度为290.67，两组差异有统计学意义(P<0.01)；在甲状腺乳头状癌细胞中，ASAP1敲除组LC3Ⅱ蛋白的表达量高于对照组，两组比较差异有统计学意义(MDA-T32细胞：0.463±0.081，P<0.05；MDA-T85细胞：0.750±0.050，P<0.01)。结论ASAP1能够调节甲状腺乳头状癌细胞的自噬，这可能是ASAP1参与甲状腺乳头状癌细胞转移调控的机制之一。

简介：摘要目的探究硫化氢的抗癫痫机制即调控环磷酸鸟苷/蛋白激酶G（cGMP/PKG）信号通路对三磷酸腺苷敏感性钾通道（KATP）亚基Kir6.2表达的影响。方法将60只SD大鼠按随机数字表法分为6个组（每组10只）：（1）正常对照组；（2）癫痫组；（3）硫化氢供体干预组；（4）硫化氢供体加PKG抑制剂（KT5823）组；（5）硫化氢供体加KATP抑制剂（格列本脲）组；（6）硫化氢供体正常对照组。采用腹腔注射戊四氮致大鼠癫痫发作，记录潜伏期、首次发作级别、持续时间；记录癫痫发作时海马脑电图的变化；采用 蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应法检测海马组织中PKG、Kir6.2 mRNA和蛋白的表达水平，酶联免疫吸附测定法检测海马组织中cGMP、磷酸化PKG的浓度。结果癫痫组出现Ⅳ~Ⅴ级发作，级别为4.500（4.000，4.875）级，潜伏期短［（10.37±8.21） min］， 持续时间长［（69.50±24.37） s］。与癫痫组相比，硫化氢供体干预组的发作级别降低（P=0.004），潜伏期延长（P<0.001）和持续时间缩短（P<0.001）。硫化氢供体加PKG抑制剂组与硫化氢供体干预组相比，潜伏期缩短（P<0.001），持续时间延长（P<0.001）。硫化氢供体干预组癫痫波明显减少，波幅与癫痫组相比差异有统计学意义（P<0.001）；硫化氢供体加PKG抑制剂组与硫化氢供体干预组相比癫痫波增加，波幅增大（P<0.001）。组间比较结果提示，各组PKG mRNA和蛋白的表达水平存在差异（分别为n=5， H=26.714， P<0.001和n=5， F=30.597， P<0.001）；其中与正常对照组相比，癫痫组PKG mRNA（分别为1.000±0.001和0.782±0.064，P=0.023）和蛋白（分别为0.550±0.037和0.145±0.020，P=0.042）的表达水平显著下降。组间比较结果提示，各组Kir6.2 mRNA和蛋白的表达水平存在差异（分别为n=5， H=27.761， P<0.001和n=5， F=60.659， P<0.001）；其中与正常对照组相比，癫痫组Kir6.2 mRNA（分别为1.000±0.001和0.897±0.033，P=0.004）和蛋白（分别为0.384±0.035和0.215±0.016，P=0.024）的表达水平显著下降，cGMP（P<0.001）、磷酸化PKG（P<0.001）的浓度降低；与癫痫组相比，硫化氢供体干预组PKG mRNA（P=0.047）、Kir6.2 mRNA（P=0.011）、PKG 蛋白（P<0.001）和Kir6.2蛋白（P<0.001）的表达水平则上升，cGMP、磷酸化PKG的浓度升高（均P<0.001）；尤其是与硫化氢干预组相比，硫化氢供体加PKG抑制剂组PKG mRNA（P=0.015）、Kir6.2 mRNA（P=0.013）、PKG 蛋白（P=0.027）和Kir6.2蛋白（P=0.017）的表达水平下降，cGMP（P=0.005）、磷酸化PKG（P<0.001）的浓度降低。结论硫化氢可抑制大鼠癫痫发作，其机制之一可能与激活海马中cGMP/PKG信号通路上调KATP通道亚基Kir6.2的表达从而降低海马的兴奋性有关。

简介：摘要目的探讨髓源性抑制细胞（MDSC）在鸟苷酸结合蛋白1（GBP1）促进胶质瘤U87细胞增殖中的作用及其相关机制。方法选择过表达GBP1的胶质瘤U87细胞（U87-GBP1细胞）和转染空载体的对照U87-Lacz细胞进行实验。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）、蛋白质印迹法、酶联免疫吸附试验（ELISA）检测两种U87细胞GBP1和CC趋化因子配体2（CCL2）mRNA相对表达量或蛋白表达水平，采用CCK-8法检测两种细胞增殖变化。利用免疫磁珠从健康人外周血中分选出CD14+单核细胞和CD3+ T淋巴细胞。用U87-Lacz或U87-GBP1细胞培养液处理CD14+单核细胞，分别为U87-Lacz培养液组和U87-GBP1培养液组；采用流式细胞术检测CD14+单核细胞中MDSC比例，用两培养液组作用的CD14+单核细胞与活化的CD3+ T淋巴细胞共培养，流式细胞术检测活化的CD3+ T细胞增殖情况，分别以未经U87细胞培养液处理的单核细胞或活化CD3+ T淋巴细胞作为对照组。用加入抗人CCL2抗体U87-Lacz或U87-GBP1细胞培养液处理CD14+单核细胞，分别为U87-Lacz+抗CCL2培养液组和U87-GBP1+抗CCL2培养液组，采用流式细胞术分析CD14+单核细胞中MDSC比例。分别将U87-GBP1细胞和U87-Lacz细胞原位接种至BALB/c裸鼠颅内致瘤，1周后各分为CC趋化因子受体2（CCR2）抑制剂RS504393治疗组（U87-Lacz+RS裸鼠组和U87-GBP1+RS裸鼠组）和未经治疗的对照组（U87-Lacz裸鼠组和U87-GBP1裸鼠组）；30 d后处死裸鼠，分离全脑、脾脏和骨髓组织，采用苏木精-伊红（HE）染色观察裸鼠脑中移植瘤，计算移植瘤体积，采用流式细胞术检测各组织MDSC比例。结果U87-GBP1细胞中GBP1蛋白表达水平高于U87-Lacz细胞，但两组细胞体外增殖水平差异无统计学意义（P>0.05）。U87-GBP1培养液组MDSC比例高于U87-Lacz培养液组[（7.75±0.80）%比（4.50±0.08）%，P=0.003]，两组均高于对照组[（2.55±0.31）%）]（F=18.27，P=0.002）；U87-GBP1培养液组作用的活化CD3+ T淋巴细胞增殖率低于U87-Lacz培养液组[（47.38±0.08）%比（61.70±5.05）%，P=0.040]。U87-GBP1细胞中CCL2 mRNA相对表达量及其培养液中CCL2蛋白表达水平[30.66±0.17和（1 005.00±12.23）ng/L]高于U87-Lacz细胞[1.29±0.15和（111.60±11.44）ng/L]（均P<0.01），U87-Lacz+抗CCL2培养液组和U87-GBP1+抗CCL2培养液组MDSC比例分别低于U87-Lacz培养液组和U87-GBP1培养液组（均P<0.05）。U87-GBP1裸鼠组脑移植瘤体积大于U87-Lacz裸鼠组，U87-GBP1+RS裸鼠组和U87-Lacz+RS裸鼠组脑移植瘤体积较未经治疗的相应裸鼠组增长减慢，差异均有统计学意义（均P<0.05）；U87-GBP1裸鼠组脑移植瘤、脾脏和骨髓中MDSC比例高于U87-Lacz裸鼠组，U87-GBP1+RS裸鼠组和U87-Lacz+RS裸鼠组各组织MDSC比例均较未经RS504393治疗相应裸鼠组低，差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论GBP1可能通过促进胶质瘤U87细胞中CCL2表达，招募MDSC，在胶质瘤微环境中集聚形成免疫抑制，进而促进胶质瘤U87细胞在体内增殖。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miRNA，miR)-630对膀胱尿路上皮癌侵袭转移的调控作用及其分子机制。方法通过生物信息学预测，APC膜募集蛋白(Amer2)为miR-630下游靶基因。构建含miR-630结合位点的Amer2基因3’端非编码区(3’UTR)荧光素酶报告载体，检测miR-630与Amer2的3’UTR相互作用对荧光素酶活性的影响。miR-630模拟物(mimics)和抑制剂(inhibitor)用脂质体(Lipofectamine) 2000在体外瞬时转染膀胱癌细胞株EJ，转染72 h后采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测Amer2、鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF-H1)的表达；蛋白质印迹法(Western blot)检测Amer2、GEF-H1蛋白的表达变化；细胞划痕实验、Transwell小室体外侵袭实验反映细胞增殖、转移潜能的变化，组间比较采用两独立样本t检验。结果转染miR-630 mimics后，Amer2荧光海肾素酶活性低于对照组，差异有统计学意义(13.885±1.624比22.182±1.354，t＝-6.885，P<0.05)；转染miR-630 mimics后，膀胱癌细胞株EJ中Amer2的表达量明显低于对照组(11.786±4.123比8.327±3.863，t＝5.780，P<0.05)，差异有统计学意义，实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及Western blot结果显示GEF-H1基因及蛋白的表达水平明显高于对照组(9.886±5.422比13.565±4.476，t＝5.420，P<0.05)，差异有统计学意义；转染miR-630 inhibitor后，体外实验表明膀胱癌细胞的迁移活性[(42.320±4.183)%比(35.528±5.433)%，t＝5.825]和侵袭能力[(49.180±5.677)%比(40.422±6.266)%，t＝7.377，P<0.05]明显低于对照组，差异有统计学意义。结论MiR-630在膀胱尿路上皮癌中高表达，可能通过调控Amer2/GEF-H1通路增强肿瘤细胞增殖，诱导膀胱癌细胞侵袭转移。

简介：

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简介：摘要目的筛选骨肉瘤相关的微小RNA(miRNA，miR)，研究其对骨肉瘤细胞的影响及其机制。方法生物信息学筛选GSE39058中骨肉瘤相关miRNA的表达差异，确定miR-329为研究目标。细胞计数试剂盒(CCK-8)分析miR-329对骨肉瘤143B细胞增殖能力的影响，Transwel比较miR-329对骨肉瘤143B细胞侵袭能力的影响。双荧光素酶报告基因实验观察miR-329对G3BP1的调控作用。蛋白质印迹法(Western blot)分析miR-329转染前后G3BP1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)的表达水平。组间比较采用t检验。结果获得差异miRNA 90个，其中miR-329功能富集程度较高。聚合酶链反应(PCR)结果表明miR-329在各骨肉瘤细胞中的表达低于成骨细胞hFOB1.19(P<0.05)。CCK-8结果显示miR-329模拟物组143B细胞增殖率较对照组NC低(0.571±0.019比0.975±0.022，P<0.05)，差异有统计学意义。Transwell分析发现转染miR-329模拟物组侵袭细胞数明显少于对照组[(28.83±4.55)个比(58.17±6.25)个，t＝6.220，P<0.05]，差异有统计学意义。双荧光素酶报告基因分析结果显示共转染G3BP1 mRNA3’端非编码区(3’UTR) wt和miR-329质粒的细胞荧光素酶相对活性较对照组显著降低(0.45±0.06比1.01±0.09，t＝1.250，P<0.05)，差异有统计学意义。Western blot结果表明转染miR-329 mimic后E-cadherin表达水平高于对照组(0.51±0.11比0.31±0.12，t＝2.903，P<0.05)，而Vimentin、N-cadherin表达量低于对照组(0.13±0.03比0.25±0.06，t＝2.859，P<0.05；0.28±0.11比0.45±0.12，t＝2.574，P<0.05)，差异有统计学意义。结论miR-329通过靶向抑制G3BP1表达，抑制肿瘤细胞的上皮-间充质转化，从而抑制骨肉瘤143B细胞的体外增殖和侵袭。

简介：

简介：背景与目的：胶质母细胞瘤（GBM）是一种恶性程度最高的星形细胞瘤,其主要的治疗方法是外科手术和放射疗法,2005年批准使用替莫唑胺,化学疗法的效果才得以确定。本文比较中国香港原发性GBM患者接受同期放化治疗或单纯放疗的生存时间,探讨GBM肿瘤组织中O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）的甲基化状态在预后评价的价值。方法：回顾性分析2005年3月至2007年6月期间35例经手术后病理确诊并接受过同期放化治疗或单纯放疗的中国香港GBM患者的资料,从石蜡包埋的GBM肿瘤组织中分离出基因组DNA,采用甲基化特异性聚合酶链反应方法（MSP）检测基因MGMT甲基化状态。采用KaplanMeier方法计算总生存时间（OS）和无进展生存时间（PFS）,比较同期放化治疗或单纯放疗和MGMT甲基化或非甲基化状态对生存时间的影响。结果：35例患者中,男性27例,女性8例,平均年龄50.4岁。35例患者的中位PFS和中位OS分别是4.7个月（3.1-6.2个月）和11.7个月（6.5-16.6个月）,其中18例仅接受单纯放疗患者的中位PFS和中位OS分别是4.2个月（3.4-5.0个月）和5.8个月（2.0-9.6个月）,17例接受同期放化治疗患者的中位PFS和中位OS分别是6.0个月（2.0-10个月）和13.2个月（8.1-18.3个月）,P值〉0.05。15例（43%）肿瘤组织中存在MGMT甲基化,MGMT甲基化和非甲基化患者的中位OS分别是16.9个月（12.7-21.1个月）和10个月（5.8-14.1个月）,P值〉0.05。结论：尽管差异无统计学意义,但与单纯放疗比较,接受了同期放化治疗的GBM患者显示出了更长的总体生存趋势,MGMT甲基化可能是GBM的明显预后较好的因素。

简介：背景与目的：O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（O^6-methylguanine-DNAmethyltransferase,MGMT）阳性胶质瘤易对甲基化类药物耐药。本研究应用奥沙利铂（oxaliplatin）甘露醇与替尼泊苷（teniposide,VM-26）联合方案治疗恶性脑胶质瘤患者,观察其对恶性脑胶质瘤的近期临床治疗效果,评价其不良反应。方法：2009年12月至2011年8月,我科收治48例经病理活检确诊的恶性脑胶质瘤患者（WHOⅢ级24例,WHOⅣ级24例）。基于肿瘤组织MGMT的免疫组织化学检测结果选择化疗方案。MGMT阳性（＋或＋＋）者接受VM-26与oxaliplatin甘露醇联合方案化疗。方案为VM-26,80-100mg/（m2.d）,d1～3,4周重复一次;oxaliplatin甘露醇,130mg/（m2.d）,d1,4周重复一次。按RECIST（ResponseEvaluationCriteriainSolidTumours,RECIST）疗效评价标准评价疗效。按美国国立癌症研究所（NationalCancerInstitute,NCI）评价标准评价不良反应。结果：48例患者资料完整,均可行近期疗效评价。上述病例共行160周期化疗。化疗周期数为2至8（中位周期数为3.3）。依据意向性治疗原则（intention-to-treatprinciple,ITT）,无明确可评价病灶9例（18.8%）,完全缓解（completeresponse,CR）3例（6.3%）,部分缓解（partialresponse,PR）11例（23.0%）,稳定（stabledisease,SD）12例（25%）,进展（progressivedisease,PD）13例（27.1%）。客观有效率（CR＋PR）为47.9%（95%CI,37%~80%）,疾病控制率（CR＋PR＋SD）为72.9%（95%CI,50%~90%）。最常见的严重毒性反应是Ⅲ度或Ⅳ度中性粒细胞减少症,发生率为10.6%（17/160）。最常见的轻至中度毒性反应依次为脱发（68.8%）、中性粒细胞减少症（58.8%）、疲乏（48%）、便秘（41.2%）以及恶心、抑郁与呕吐（均为32%）。结论：基于肿瘤组织MGMT检测结果,VM-26与oxaliplatin甘露醇联合方案治疗恶性脑胶质瘤是安全的,可取得较为满意的总反应率、疾病控制率。

简介：摘要目的分析改良Ponticelli方案治疗基因多态性膜性肾病患者的疗效及对患者血清中磷脂酶A2受体(PLA2R)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)和1型血小板反应蛋白7A域(THSD7A)水平的影响。方法选择成都大学附属医院2017年1月至2019年8月期间收治的186例膜性肾病患者作为研究对象，并依照基因多态性检测结果将研究对象分为CYP2B6*4组(108例)和CYP2B6*5组(78例)。所有患者均采用改良Ponticelli方案治疗，治疗结束后对两组患者的临床疗效进行评估，治疗前后采集空腹静脉血3 mL，采用酶联免疫吸附法检测血清中PLA2R、8-OHdG、THSD7A水平，同时检测患者尿液中的尿蛋白水平。采用logistic回归模型分析基因多态性与临床疗效及血清学指标的关系。结果CYP2B6*5组患者治疗的临床疗效显著优于CYP2B6*4组，差异有统计学意义(P<0.05)；治疗后CYP2B6*5组患者的血清PLA2R、8-OHdG、THSD7A水平及尿液中尿蛋白水平明显低于CYP2B6*4组，差异有统计学意义(P<0.05)；Logistic回归模型分析结果显示，膜性肾病患者基因多态性是影响患者的临床疗效及PLA2R、8-OHdG、THSD7A、尿蛋白水平的独立影响因素(P<0.05)。结论改良Ponticelli方案治疗膜性肾病患者临床疗效显著。CYP2B6*4及CYP2B6*5多态性是患者疗效和血清PLA2R、8-OHdG、THSD7A的独立影响因素。