简介:目的构建表达Nogo受体(NgR)特异性siRNA199的重组质粒。方法按照E1bashir等设计原则和siRNA表达载体的要求,在合成、筛选出基因沉默效率较高的siRNA199基础上,设计带有BamHⅠ、HindⅢ酶切黏性末端、终止识别序列和LOOP环的shRNA,并将其克隆入载体pRNAT-1/6.1/Neo,构建成NgR特异siRNA199重组质粒,然后进行酶切鉴定及基因测序。结果设计的shRNA成功克隆入载体pRNAT-1/6.1/Neo,构建成NgR特异siRNA199重组质粒,酶切鉴定及基因测序表明设计序列完全相符,目的基因序列准确无误。结论重组质粒构建成功,为构建病毒载体及观察重组质粒抑制大鼠NgR基因的表达对脊髓损伤的修复作用奠定了基础。
简介:目的探讨Nogo—A及其受体(NgR)在大鼠颅脑损伤后损伤脑组织的表达变化。方法将136只SD大鼠按随机数字表法分成对照组、假损伤组、轻型颅脑损伤组、中型颅脑损伤组、重型颅脑损伤组,采用自制改良的Feeney’s自由落体装置制作大鼠颅脑损伤模型;伤后12h、24h、3d、7d和14d采用免疫组化染色法检测损伤脑组织中Nogo—A和NgR蛋白的表达。结果伤后各时间点,各型颅脑损伤组Nogo—A表达水平均明显高于假损伤组(P〈0.05);重型、中型、轻型颅脑损伤组之间Nogo—A表达均有显著差异(P〈0.05)。而NgR的表达水平则在伤后3、7、14d各型颅脑损伤组才明显高于假损伤组(P〈0.05),各损伤组之间也有统计学差异(P〈0.05)。结论Nogo—A和NgR在不同程度的损伤脑组织中表达差异显著,且有各自的表达规律。
简介:摘要目的旨在研究高压氧联合电针治疗对脊髓损伤大鼠髓鞘抑制相关蛋白(Nogo-A及NgR受体)的影响。方法将84只雌性SD大鼠按照数字表法分为4组,每组21只,依次为模型组、高压氧治疗组、电针治疗组和联合治疗(电针联合高压氧)组。建模成功后,模型组不进行干预,其余各组进行相应的治疗。分别在损伤后3、7、14 d进行取材,对损伤大鼠进行BBB评分、HE染色及相关基因检测。结果损伤后3、7、14 d,高压氧治疗组、电针治疗组和联合治疗组的BBB评分均高于模型组(P<0.01),且联合治疗组评分均高于高压氧治疗组和电针治疗组,高压氧治疗组与电针治疗组比较差异无统计学意义。损伤后3、7、14 d高压氧治疗组、电针治疗组和联合治疗组Nogo-A mRNA表达量均低于模型组(P<0.05);损伤后7、14 d高压氧治疗组NgR mRNA表达量(0.49±0.53、0.52±0.47)、电针治疗组NgR mRNA表达量(0.53±0.58、0.58±0.36)和联合治疗组NgR mRNA表达量(0.16±0.13、0.20±0.13)均低于模型组NgR mRNA表达量(1.33±1.26、1.03±0.30)(P<0.05),且联合治疗组Nogo-A及NgR mRNA表达量低于高压氧治疗组和电针治疗组(P<0.05),而高压氧治疗组和电针治疗组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论高压氧联合电针治疗脊髓损伤大鼠与单一疗法相比更能抑制Nogo-A及NgR mRNA的表达,减轻细胞损伤,促进脊髓纤维束的生长和运动功能的恢复。
简介:BACKGROUND:PreviousstudieshavefocusedonthecorrelationbetweenNogo-AexpressionandmultiplesclerosisorbetweenNogo-Areceptor(NgR)expressionandmultiplesclerosisinthecentralnervoussystem.ExpressionpatternsofNogo-AandNgRremainpoorlyunderstoodinratmodelsofexperimentalautoimmuneencephalomyelitis(EAE).OBJECTIVE:ToobservedynamicchangesinNogo-AandNgRproteinexpression,andtoverifythecorrelationbetweenNogo-AandNgRprotein,aswellasexpressionpatternsatvarioustimepoints,inperiventriculartissueofEAErats.DESIGN,TIMEANDSETTING:Aneuroimmunological,randomized,controlledexperimentwasperformedattheClinicalInstituteofHunanPeople'sHospitalofChinafromSeptembertoNovember2008.MATERIALS:Immunohistochemistry(streptavidin-biotin-peroxidasecomplexmethod)kitwaspurchasedfromBoster,China.METHODS:Atotalof60female,Wistarrats,aged6-8weeks,wererandomlyassignedtoEAEandcontrolgroups(n=30,respectively).Guineapigspinalcordhomogenate,self-madecompleteFreund'sadjuvant(0.2mL/100g),andpertussisvaccine(0.2mL)weresubcutaneouslyinjectedintothehindlimbfootpadofratsfromtheEAEgrouptocreateratmodelsofEAE.CompleteFreund'sadjuvant(0.2mL)wasinfusedintoratsfromthecontrolgroup.MAINOUTCOMEMEASURES:Nogo-AandNgRproteinexpressionwasdeterminedinperiventricularwhitematterusingimmunohistochemicalmethods.Neurologicalscoresweredeterminedinallrats.RESULTS:RatsfromtheEAEgroupdevelopedacute-onsetEAEfollowingimmunization.Thepathogeneticsymptomsreachedapeakonday15,andneurologicalscoreswerealsogreatestatthistimepoint.Neurologicalscoresdecreasedwithrecoveryoftheillness.Nogo-Awasshowntobeexpressedinneuronalcellsandoligodendrocytes,andexpressionincreased11daysafterimmunization(P<0.01),decreasedbyday13(P<0.01),andthenincreasedagainbyday15.Nogo-AexpressionremainedgreaterintheEAEgroupcomparedwiththecontrolgroupatday30(P<0.01).IntheEAEgroup
简介:摘要目的分析Nogo-66受体特异性小干扰RNA对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠神经再生功能的影响。方法选取新生大鼠HIBD模型60只,分析大鼠的逃生时间等。结果假手术组和实验组的阳性细胞数明显高于其他两组,P〈0.05表示统计学有意义。而假手术组和实验组相比无差异,P〉0.05表示统计学无意义。HIBD组的大鼠逃生时间明显高于假手术组,实验组的大鼠逃生时间明显短于HIBD组和对照组,P〈0.05表示统计学有意义。结论合成特异性的siRNA能够对新生大鼠的脑组织NgR表达产生一定的影响,从而能够有效促进大鼠神经的再生,促进大鼠神经功能的恢复。
简介:目的探讨NOGO—A在PC12细胞生长发育过程中的表达及意义。方法培养大鼠嗜铬细胞瘤细胞系PC12细胞,用神经生长因子诱导其分化,并于倒置显微镜下随机取20视野计数观察细胞增值和轴突生长情况。采用免疫荧光染色、逆转录酶聚合酶链反应(RT—PCR)及免疫印迹法等方法检测诱导后第1d、第3d、第5d、第7dPC12细胞中NOGO—AmRNA及蛋白的表达及变化,并留取细胞培养液检测多巴胺水平。结果未分化的PC12细胞中未检测到NOGO—AmRNA及蛋白表达。经神经生长因子诱导的PC12细胞,细胞轴突不断生长,NOGO—AmRNA及蛋白的表达逐渐增高(P〈0.05)。PC12细胞在分化过程中多巴胺(DA)分泌水平无明显差别。结论PC12细胞向交感神经元分化的过程中NOGO—A的表达逐渐增强,推测NOGO—A在神经元发育早期可能促进轴突生长。但对多巴胺激素释放的调节不明显。
简介:雌激素是一种促进细胞有丝分裂的甾体激素,是女性生殖系统发育和功能维持的重要因素,此外在机体多种生理过程中均有重要作用。雌激素功能失常能够引发乳腺、子宫、心脏等多种疾病,特别是与内分泌相关的癌症。雌激素的多种生理效应通过的两种经典雌激素受体α和β传导(estrogenreceptorαandβ),核受体命名委员会(nuclearreceptorsnomenclaturecommittee,NRNC)1999年命名为NR3A1和NR3A2,这两种受体均是核受体超家族(nuclearmoeptorsuperfamily,NRs)的成员。
简介:目的研究雌激素受体(ESR)及其亚型mRNA、多巴胺受体(D2R)及其亚型mRNA在泌乳素腺瘤中的表达。方法应用逆转录酶聚合酶链式反应(RT—PCR)测定30例泌乳素腺瘤标本ESR1mRNA、ESR2mRNA、第五外显子缺失的1型雌激素受体(△5-Del-ESR1mRNA)及D2RmRNA的表达,研究其表达水平与患者性别、肿瘤体积、侵袭性及泌乳素(PRL)水平的关系。结果男性和绝经后女性患者肿瘤ESR1mRNA表达高于育龄女性患者;侵袭性泌乳素腺瘤高于非侵袭性肿瘤;PRL≥1000ng/ml的患者△5-Del-ESR1mRNA表达水平较PRL〈1000ng/ml的患者明显增高。D2RmRNA异构体的表达水平与泌乳素腺瘤生物学行为有关系,D2SmRNA的表达水平在侵袭性与非侵袭性泌乳素腺瘤中存在显著差异,D2SmRNA在侵袭性泌乳素腺瘤中呈低水平表达。结论ESR1及其亚型△5-Del-ESR1mRNA、D2R及其亚型mRNA表达与泌乳素腺瘤PRL分泌及肿瘤侵袭有关。
简介:目的探讨雌激素孕激素受体阳性与雌激素受体(ER)阳性孕激素受体(PR)阴性乳腺癌的临床病理特征及预后因素分析。方法收集2012年1月至2015年12月山东省肿瘤医院收治的398例女性乳腺癌患者的临床资料,分析病理学特征。应用#检验比较不同组的差异;应用COX回归模型分析疾病进展相关因素。结果低ER水平(HR5.59,95%CI:2.42~12.95,P〈0.001)、低PR水平(HR0.19,95%CI:0.04~0.90,P〈0.05)和高Ki-67增殖指数(HR5.84,95%CI:1.91~17.85,P〈0.05)的患者复发率更高。ER+/PR+患者与ER+/PR+患者在肿瘤体积(P〈0.001)、病理分期(P〈0.001)、Ki-67水平(I〉20%)(P〈0.001)、Her-2阳性表达(P〈0.05)等方面比较,差异有统计学意义。结论ER+/PR+乳腺肿瘤比ER+/PR+乳腺肿瘤具有更强的侵袭性。
简介:摘要Leptin为肥胖基因(ob)编码产物,是脂肪细胞分泌的蛋白质类激素,在调节能量平衡、摄食行为起重要作用。Leptin受体广泛分布在许多组织。Leptin和肝纤维化发生的关系引起关注。更多的证据表明在肝病中包括慢性肝炎、酒精性肝病和非酒精性肝病,Leptin是一促进因子。尽管一些机制仍未阐明,研究证明Leptin在肝病中起了重要作用。