简介:研制人线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtDNA)表达谱芯片,鉴定芯片的特异性和稳定性,完善芯片的制备和使用程序,优化实验参数,为线粒体功能研究提供物质基础及技术保障。以人mtDNA剑桥序列为标准,设计mtDNA编码的13种mRNA、2种rRNA和9种tRNA基因及蛋白产物定位于线粒体的核DNA(nDNA)编码的5种凋亡相关基因寡核苷酸探针。芯片点样仪点制芯片,进行荧光显示和洗脱,用其检测人宫颈癌上皮Hela细胞和人肾小管上皮Hc1细胞cDNA文库mtDNA编码基因及nDNA编码凋亡相关基因的差异表达情况。所点制的芯片扫描结果显示,样点分布均匀、清晰,规整度好,无漏点、连点。cDNA文库杂交鉴定结果显示,整张芯片荧光信号均匀一致,背景清晰,各基因重复样点杂交结果一致,各质控点能正常显示。成功制备了人mtDNA基因表达谱芯片,完善了该芯片的制备和使用程序,通过初步应用,证明所研制的人mtDNA基因表达谱芯片具有特异性高、稳定性好等优点,可用于不同组织或细胞样本cDNA文库mtDNA基因的差异表达分析。
简介:摘要电化学DNA传感器具有选择性好、灵敏度高、消耗低及简便易用等优点,能够对特征DNA序列进行快速准确的测定,因此电化学DNA传感器在食品安全检测、医学诊断和环境监测等领域都有广阔的应用前景。
简介:目的:脓毒症是感染因素介导的全身炎症反应综合征,至今无有效的治疗手段。细菌Cp6DNA是引起脓毒症的主要病原分子。CpGDNA通过与TLR9结合,介导单核/巨噬细胞的活化,是介导脓毒症发生的重要途径。本研究以CpGDNA为靶点,从中药中定向分离具有拮抗CpGDNA和治疗脓毒症作用的活性物质。方法:(1)应用生物传感器技术、建立以CpGDNA为靶点的筛选抗炎中药的技术平台并对78种中药进行筛选;(2)利用生物传感器技术、硅胶柱层析、离子交换柱层析技术,从大黄中定向分离与CDGDNA具有较高结合活性的组分,并对得到的组分进行初步的活性评价,确定活性组分;(3)在体外实验中,测定活性组分与CpGDNA、lipidA的结合能力,观察活性组分对LPS、CpGDNA刺激小鼠RAW264.7细胞分泌炎症介质的抑制作用,在体内实验中,观察活性组分对致死剂量热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用。(4)利用反相HPLC技术对活性组分进行制备分离,获得活性单体化合物;(5)在体外实验中,检测单体化合物与CpGDNA和lipidA的结合能力.观察化合物对LPS、CpGDNA刺激小鼠RAW264.7细胞分泌炎症介质的抑制作用。结果:(1)建立了以CpGDNA为靶点应用生物传感器筛选抗炎中药的技术平台;从78种中药中筛选出大黄等14种中药与CpGDNA具有较高结合能力;(2)利用生物传感器技术、硅胶柱层析、离子交换柱层析等技术从大黄水提物中定向分离得到与CpGDNA有较高结合活性大黄D组分;(3)在体外,大黄D组分与CpGDNA、LipidA均具有较高的结合活性,对CpGDNA及LPS刺激小鼠RAW264.7细胞分泌TNF-α有显著的抑制活性,并呈现良好的量一效关系。在体内,大黄D组分对致死剂量的热灭活大肠杆菌攻击小鼠有显著的保护作用,并呈现良好的量-效关系;(4)通过反相HPLC从D组分中分离得到单体
简介:摘要目的建立无创DNA产前筛查(noninvasive prenatal screening, NIPS)质量管理样本的制备方法,并对制备的样本进行质量及稳定性评价。方法基于孕妇血浆中胎儿游离DNA的特点,将核型为21号染色体三体、18号染色体三体和13号染色体三体的片段化基因组DNA分别与背景血浆混合制备出人工模拟样本,与商品化质控品进行对比,并在不同的检测平台进行检测,再分别在-80℃、-20℃、4℃、24℃和37℃条件下保存。结果人工模拟样本结果与预期相符,可以在不同平台进行检测,可在-80℃和-20℃条件下保存至少30天。结论成功制备了人工模拟样本,并证实该样本具有良好的稳定性,可以考虑将其作为NIPS的质量管理样本。
简介:摘要目的原核表达人腺病毒(HAdV)7型DNA结合蛋白(DBP),制备DBP蛋白多克隆抗体。方法合成HAdV-7 DBP基因并克隆至pET30a载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导进行原核表达。经镍离子金属螯合层析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体,使用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)测定该抗体效价;使用Western blotting方法与间接免疫荧光方法(IFA)检测抗体特异性。以rDBP包被ELISA反应板使用间接ELISA对HAdV感染儿童急性期血清中抗DBP蛋白IgM和IgG抗体进行检测。结果成功构建HAdV-7 DBP原核表达载体,表达的重组DBP蛋白经镍柱亲和层析纯化后纯度>95%,间接ELISA方法测得制备的多克隆抗血清的抗体效价为1∶1 024 000,Western blotting方法和IFA方法显示该抗体具有较高的特异性,间接ELISA方法检测HAdV感染儿童 急性期血清中抗DBP蛋白IgM和IgG抗体的阳性率分别为50.0%(19/38)和63.2%(24/38)。结论成功构建HAdV-7 DBP蛋白的原达表达载体,获得了HAdV-7型DBP重组蛋白和高效价的兔多克隆抗体。
简介:AventadorLP700-4还是延续了Lamborghini的一贯设计风格,显得粗犷而霸气,浑身充满了如蛮牛般的力量。而从整体感觉上,我们也能从其身上看到Murcielago、Renventon以及SestoElementoConcept的影子。
简介:一三月初的一个黄昏,跟着父亲学习古老石匠技术的索拉杰同父亲及他们村上几个年青人一起从知莫乡年克村去到银河乡木尔基沟的冉斯则村。他个子不太高,长相也不太漂亮,穿着一件灰色有些破旧的毛衣,外面套着一件藏族男人们出门时爱穿的既保暖又防湿的毪衫,棕色,衫子的边嵌着色彩鲜明的氆氇。一条紫红色的绸腰带很随意地拴在腰间,在腰后面露
简介:CleavageofchromosomalDNAintooligonucleosomalsizefragmentsisanintegralpartofapoptosis.ElegantbiochemicalworkidentifiedtheDNAfragmentationfactor(DFF)asamajorapoptoticendonucleaseforDNAfragmentationinvitroGeneticstudiesinmicesupporttheimportenceofDFFinDNAfragmentationandpossiblyinapoptosisinvivo.RecentworkalsosuggeststheexistenceofadditionalendonucleasesforDNAdegradation.Understandingtherolesofindividualendonucleasesinapoptosis,andhowtheymightcoordinatetodegradeDNAindifferenttissuesduringnormaldevelopmentandhomeostasis,aswellasinvariousdiseasedstates,willbeamajorresearchfocusinthenearfuture.