简介：目的:开发具有特异性杀虫谱特性的Bt菌新株系,促进Bt菌制剂的更新换代,减缓抗性发生。方法:在前人对摇瓶培养研究的基础上.通过改变培养基成分、通气量和pH等操作条件,检测不同条件对菌体生长量、芽孢及伴孢晶体形成的影响,对中国BtKen—Ag这一新的优良菌株发酵罐间歇发酵的工艺条件进行研究。结果:中国BtKen—Ag发酵罐发酵最佳工艺条件:发酵温度维持30℃,发酵前期,控制pH为7.0,用较大的通气量1∶2.Ovvmin;发酵后期不控制pH,并适当减小通气量为1∶0.5vvmin。这样就使得发酵前期菌体达到75亿/ml的较高浓度,发酵后期则实现了菌体向芽孢转化的高转化率98％以上。结论:初步得出适于该菌发酵的最佳工艺,为该菌制剂的生产应用提供可靠依据。

简介：Objective:Avarietyofionchannelshavebeenimplicatedinbreastcancerproliferationandmetastasis.VoltagegatedK+(Kv)channelsnotonlycauserepolarizationinexcitablecells,butarealsoinvolvedinmultiplecellularfunctionsinnon-excitablecells.InthisstudyweinvestigatedtheroleofKvchannelsinmigrationofBT474breastcancercells.Methods:Transwelltechniquewasusedtoseparatemigratorycellsfromnon-migratoryonesandthesetwogroupsofcellsweresubjecttoelectrophysiologicalexaminationsandmicrofluorimetricmeasurementsforcytosolicCa2+.CellmigrationwasexaminedintheabsenceorpresenceofKvchannelblockers.Results:Whencomparedwithnon-migratorycells,migratorycellshadmuchhigherKvcurrentdensities,butratherunexpectedly,moredepolarizedmembranepotentialandreducedCa2+influx.Reversetranscriptasepolymerasechainreaction(RT-PCR)analysisrevealedthepresenceofKv1.1,Kv1.3,Kv1.5,Kv2.1,Kv3.3,Kv3.4andKv4.3channels.Cellmigrationwasmarkedlyinhibitedbytetraethylammonium(TEA),adelayedrectifierKvchannelblocker,butnotby4-aminopyridine,anA-typeKvchannelblocker.Conclusions:Takentogether,ourresultsshowthatincreasedKvchannelexpressionplayedaroleinBT474cellmigration,andKvchannelscouldbeconsideredasbiomarkersorpotentialtherapeutictargetsforbreastcancermetastasis.Themechanism(s)bywhichKvchannelsenhancedmigrationappearedunrelatedtomembranehyperpolarizationandCa2+influx.

简介：

简介：摘要目的探讨早期应用吡柔比星（THP）膀胱灌注预防浅表性膀胱癌TUR-Bt术后复发的疗效及安全性。方法对采用TUR-Bt术治疗浅表性膀胱癌患者120例术后随机分为A组(早期膀胱灌注化疗组)和B组(常规膀胱灌注化疗组)各60例。A组术后6小时内应用THP行膀胱灌注化疗1次，术后1周开始THP常规膀胱灌注化疗;B组60例，术后1周开始应用THP常规膀胱灌注化疗。比较两组患者的膀胱肿瘤复发率、肿瘤复发时间及灌注化疗不良反应情况。结果36个月时随访A组6例复发(10.00%)，B组20例复发(33.33%)，两组比较，差异有统计学意义(P＜0.05);A组复发平均时间较B组显著推迟(P<0.05)膀胱灌注化疗不良反应包括膀胱刺激症状、肉眼血尿等，两组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。结论浅表性膀胱癌TUR-Bt术后早期应用THP膀胱灌注化疗可有效降低术后肿瘤复发率，且不增加灌注化疗不良反应。

简介：

简介：目的：beclin1基因慢病毒表达载体稳定感染三阴性乳腺癌BT549细胞后,于短程低氧条件下探讨beclin1基因对上皮间质转化（EMT）的影响。方法用带有pLenO-GTPVector及pLenO-GTP-beclin1Vector的慢病毒以感染复数（MOI）为20分别感染BT549细胞,即实验对照组及实验组,未感染细胞作为空白对照。感染96h后用倒置荧光显微镜观察荧光,估计感染效率；用Westernblot法检测beclin1基因是否在BT549细胞中稳定表达；将各组细胞低氧培养12、24h后采用荧光定量PCR、Westernblot法及激光共聚焦显微镜检测EMT相关标志物；用Westernblot法检测低氧培养24h后的各组细胞Wnt/β-catenin信号通路的相关蛋白表达水平。用两样本t检验分析低氧时间对细胞EMT相关标志物的表达情况,余计量资料用方差分析进行统计。结果慢病毒感染BT549细胞96h后,感染效率约为100%,实验组beclin1蛋白高效稳定表达（F=107．200,P=0．000）；低氧条件下,相对于空白对照组、实验对照组,实验组细胞的上皮标志物E-cadherinmRNA和蛋白表达水平上调（12h：F=122．451、P=0．000,F=29．651、P=0．001；24h：F=108．783、P=0．000,F=41．232、P=0．000）,而间皮标志物N-cadherin、vimentin及fibronectin表达水平下调（12h：N-cadherinF=92．918、P=0．000、F=138．034、P=0．000,vimentinF=135．313、P=0．000、F=39．765、P=0．000,fibronectinF=144．275、P=0．000；24h：N-cadherinF=76．064、P=0．000、F=40．614、P=0．000,vimentinF=206．576、P=0．000、F=46．658、P=0．000,fibronectinF=411．405、P=0．000）；相对于低氧培养12h,各组细胞低氧培养24h后E-cadherin表达水平下调（空白对照组：t=4．266、P=0．013,t=11．235、P=0．000；实验对照组：t=10．463、P=0．000,t=4．092、P=0．009；实验组：t=28．208、P=0．000,t=7．262、P=0．001）,而N-cadherin（实验组除外）、vimentin和fibronectin表达水平上调（空白对�

简介：目的探讨绿色荧光蛋白(GFP)特异性发夹结构RNA(shRNA)对人类胶质瘤BT325细胞系GFP基因表达的抑制作用.方法设计并合成针对GFP基因的shRNA序列,与报告基因质粒pEGFP-N1共转染,选择最佳转染比例,荧光显微镜下观察GFP表达的效率和对GFP的抑制效应.结果质粒pSIREN-RetroQ-RNAi经双酶切得到6kb和100bp条带,结合测序验证,与实验设计的shRNA长度相符.质粒DNA与XP-1转染比例为1:25时GFP表达最强.BT325细胞干扰48h时GFP表达显著减少.结论BT325细胞系中存在RNA干扰现象,且干扰效果特异、稳定;本实验为研究基因功能提供了新的策略.

简介：目的研究转染beclin-1基因对三阴性乳腺癌（TNBC）细胞BT-549在正常及低氧环境下的增殖抑制情况,促自噬和促凋亡作用,以及其对细胞迁移能力的影响。方法利用脂质体将真核载体pDS-RED-C1-beclin-1转染进入BT-549细胞作为实验组,空白组细胞和转染pDS-RED-C1空质粒的细胞分别作为空白对照组和阴性对照组,用RT-PCR检测转染后beclin-1mRNA表达,Westernblot检测转染后蛋白表达。在正常及低氧环境下分别培养后用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测细胞增殖率,吖啶橙染色后用荧光显微镜观察细胞自噬情况,流式细胞仪检测细胞凋亡百分比。通过细胞划痕试验研究转染beclin-1基因对细胞迁移能力的影响。RT-PCR和Westernblot结果及MTT所测增殖率结果用单因素方差分析,自噬和凋亡的差异采用卡方检验分析。结果beclin-1基因被成功转染进细胞;转染后目的基因组beclin-1mRNA和蛋白表达均高于对照组,72h最明显。MTT测定结果：正常与低氧环境下实验组48h和72h增殖率均低于对照组（48hP1=0.002,P2=0.000;72hP1=0.006,P2=0.001;P1和P2分别为正常与低氧环境下统计结果）,beclin-1与低氧刺激有明显交互作用（P=0.016）,即二者能增强彼此对细胞增殖率的抑制作用。吖啶橙染色镜下观察正常和低氧环境下实验组自噬发生率明显高于空白对照组（P1=0.004,P2=0.001）,阴性对照组与空白对照组间差异无统计学意义（P〉0.050）。流式细胞仪检测正常和低氧环境下实验组凋亡发生率均高于空白对照组（P1=0.045,P2=0.008）。体外划痕试验发现转染beclin-1后细胞迁移能力降低。结论在正常和低氧环境下,转染beclin-1基因可抑制TNBC细胞BT-549增殖,促进细胞发生自噬及凋亡,并且降低其迁移能力。

简介：目的观察经尿道膀胱肿瘤切除术(TUR-BT)后吡柔比星(THP)即刻膀胱灌注预防非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)复发的临床疗效。方法回顾性分析2000~2009年收治的301例非肌层浸润性膀胱癌行经尿道膀胱肿瘤切除术患者,随机分为治疗组(184例)和对照组(117例),治疗组术后24小时内行即刻膀胱灌注,对照组术后未行24小时内即刻膀胱灌注,随访比较两组患者的复发情况。结果患者术后24小时内行即刻膀胱灌注与肿瘤复发风险相关(HR=2.564,P<0.0001),但与肿瘤进展风险无关,治疗组和对照组无复发生存时间有显著的统计学差异(P<0.0001)。结论经尿道膀胱肿瘤切除术后24小时内行吡柔比星即刻膀胱灌注是预防非肌层浸润性膀胱癌复发有效的治疗方法。