简介:摘要目的研究转录调控因子OmpR在创伤弧菌中致病相关的生物学功能及分子机制。方法通过基因无痕敲除技术构建创伤弧菌ompR基因敲除株(ΔompR)。通过生长曲线测定法检测不同渗透压下菌株的耐受力,细菌泳动试验检测运动性,结晶紫染色试验检测细菌生物膜形成能力,菌落计数法测定创伤弧菌ΔompR株黏附细胞的变化,乳酸脱氢酶释放法测定创伤弧菌ΔompR株对细胞毒性的变化,以明确ΔompR株的致病性相关生物学表型;实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)法检测创伤弧菌ΔompR株和野生株中毒力相关靶基因ompN、ompU、ompA、hcp2的mRNA水平变化。结果成功构建创伤弧菌ΔompR株。与野生株相比,ΔompR株在高渗透压培养基中生长缓慢,生物膜形成能力减弱,细菌运动性未有明显差异,ΔompR株对细胞的黏附率和毒性显著低于野生株。ΔompR株中渗透压调节及生物膜形成相关ompN基因mRNA水平显著下调(P<0.05),其他靶基因mRNA水平无明显变化。结论OmpR参与调控创伤弧菌高渗透压环境下生长、生物膜形成、对细胞的黏附及毒性。
简介:为探讨中医不同治法调节大鼠肝癌相关基因转录水平的差异.以DEN诱发的大鼠肝癌为模型,18W后将其分为模型(B)组、西药(C)组及中药全方(Di)组、清热(D2)组、活血(D3)组、健脾(D4)组,每组10只,分别给予相应药物治疗,疗程6W,另取10只未造模鼠为正常对照(A)组.之后,处死动物,采用异硫氰酸胍-苯酚-氯仿一步法抽提肝组织总RNA,DD-PCR及放射自显影技术分离A组肝组织与B组肝癌组织中差异显示的基因片段,以此片段为探针,分别与各组肝组织总RNA进行Northemblot印迹杂交,比较其间的差异,同时将筛选出的阳性cDNA片段进行克隆与序列分析.结果:从正常肝组织与模型组肝癌组织中分离出32个差异显示的基因片段;Northemblot印迹杂交表明其中9个基因片段在各组之间转录水平上存在明显差异;其中,来源于正常肝组织中的DD22为新基因,来源于肝癌组织中的基因有5个为已知基因,3个为新基因.提示不同治法对DEN诱发大鼠肝癌相关基因转录的调节作用也不同.
简介:摘要小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)是一种具有碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链结构的转录因子,它在神经嵴源性黑素细胞的生存、增殖和分化以及黑色素的合成、转运和分布过程中起着至关重要的作用。MITF基因突变会影响黑素细胞的功能,从而导致与黑色素相关的疾病。了解MITF对黑素细胞的作用机制可为这些疾病的治疗提供一些线索。本文就MITF基因的表达调控、对黑素细胞的调控作用以及其导致Waardenburg综合征的机制做一综述。
简介:摘要目的采用生物信息分析方法探讨RUNT相关转录因子1(RUNX1)在肠癌中的表达及其与患者预后的关系。方法采用生物信息分析方法分析肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中RUNX1基因的表达(mRNA)情况。应用蛋白-蛋白作用网络数据库STRING构建RUNX1基因编码蛋白相互作用网络,对蛋白网络中的基因进行基因本体论(GO)和京都基因及基因组百科全书(KEGG)分析,预测其可能功能及信号通路。根据RUNX1基因在肿瘤组织中表达的中位数分为高和低表达组,绘制生存曲线,生分析探讨RUNX1高低表达水平与肠癌的预后关系。结果RUNX1在结直肠癌组织中的表达水平明显高于正常肠黏膜组织(P<0.05)。RUNX1编码蛋白及相互作用蛋白主要定位于细胞核、细胞膜和染色质,分子功能主要富集于蛋白结合、细胞核蛋白结合及蛋白复合体。而生物学过程主要富集于细胞代谢,细胞增殖和细胞对外界刺激反应。KEEG信号通路分析显示RUNX1及相关基因主要通路富集于消化系统肿瘤、磷酸肌醇3激酶(PI3K)、细胞周期和Wnt等肿瘤相互信号通路。Log-rank检验显示RUNX1高、低表达组总生存[风险比(HR)=1.5,P>0.05]差异无统计学意义而高表达组无疾病进展生存(HR=1.9,P<0.01)显著低于低表达组。亚组分析显示,结肠癌RUNX1高表达者总生存(HR=1.7,P<0.05)和无疾病进展生存(HR=1.9,P<0.01)均低于低表达者。而直肠癌中RUNXI1高低表达对患者预后无明显影响(P>0.05)。结论在结肠癌和直肠癌中,RUNX1基因表达水平明显上调并与结肠癌患者的预后不良有关。
简介:据调查统计,工业化程度越高的地区不孕不育者增加越多,工业化程度相对较低的地区不孕不育增加程度远低于工业化程度高的地区,为什么在医疗技术不断提高的状态下,不孕不育发生率反而增加呢?主要是因为人们赖以生存的环境质量的不断恶化,主要有:1.金属元素已经证明具有生殖毒性的金属有汞、铅、镉。长期接触可以导致精子数量下降、精子密度减少、精子活动率降低、一次排精量减少和畸形精子比例增加。2.农药和药物随着农业的发展,农药对精子质量的影响越来越受到人们的重视,比如敌敌畏、马拉硫磷、亚甲蓝、靛青红等可以影响精子的运动能力,使精子的数量减少、形态发生改变。3.有机物质许多有机物质对精子具有毒性,如苯、甲醛、食品添加剂等一些有害化学物质会阻碍精子的生成和活力,甚至导致睾丸萎缩。4.气体(汽车尾气)研究发现,4.气体(汽车尾气)研究发现,交通警察、出租汽车驾驶员的正常精子比例明显下降。5.辐射电磁波、核辐射、X线照射都是人类精子的杀手,可使精细胞异常、孕妇流产及胎儿发育不良。对环境因素的影响,可采取以下防护措施:1).不用聚氯乙烯包装材料在微波炉中加热;不购买塑料制婴幼儿用品;不用泡沫塑料容器冲泡食物。2).从市场采购的蔬菜,建议要...
简介:摘要目的探讨肺腺癌组织中Runt相关转录因子2(Runx2)蛋白的表达与肿瘤侵袭转移的关系。方法收集49例肺腺癌患者的临床资料及病理标本(包括肺腺癌组织、癌旁组织及正常肺组织)。应用免疫组织化学和Western blotting方法检测各相关组织中Runx2蛋白的表达,对Runx2蛋白表达与临床病理参数的关系进行统计学分析。结果Runx2蛋白在肺腺癌组织、癌旁组织、正常肺组织中的阳性表达率分别为57.1%、8.2%、0,差异具有统计学意义(P<0.001);Runx2蛋白高表达与浸润性腺癌(26/34,76.47%)、有淋巴结转移(13/15,86.67%)、低分化(14/14,100%)、随访期内出现复发转移(8/8,100%)显著相关(P<0.001,P=0.006,P=0.006,P=0.007)。结论肺腺癌组织中Runx2蛋白高表达,且与肿瘤的低分化、高侵袭转移特性及复发的关系密切。
简介:摘要目的探究鼻咽癌来源外泌体中含有的长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录本(CCAT2)对鼻咽癌血管生成的影响。方法将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为鼻咽癌细胞(CNE2)上清共培组与正常鼻咽上皮细胞(NP69)上清共培组,CCK8法检测两组HUVEC增殖能力。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测CNE2上清与HUVEC共培后lncRNA CCAT2的表达。将HUVEC分为鼻咽癌患者血清共培组、健康人血清共培组,CCK8法检测两组HUVEC增殖能力,qRT-PCR检测两组HUVEC中lncRNA CCAT2的表达。超速离心法提取CNE2、NP69细胞上清外泌体。将HUVEC分为CNE2上清外泌体共培组与NP69细胞上清外泌体共培组,CCK8等血管生成实验比较两组HUVEC功能差异。在HUVEC中转染短发夹RNA(shRNA)抑制lncRNA CCAT2表达,CCK8等血管生成实验比较不同表达lncRNA CCAT2的HUVEC功能差异。通过shRNA转染CNE2,提取上清外泌体RNA,qRT-PCR检测不同表达lncRNA CCAT2的CNE2上清外泌体中lncRNA CCAT2的差异,将上述两组外泌体分别与HUVEC共培,qRT-PCR检测共培后HUVEC中lncRNA CCAT2的表达差异,同时迁移实验检测HUVEC的功能差异。用GraphPad Prism 8作图及统计分析。结果与NP69上清共培组相比,CNE2上清共培组HUVEC增殖能力较高。CNE2上清与HUVEC共培48 h与0 h相比,lncRNA CCAT2表达较高(1比1.40±0.01,t=42.43,P=0.000)。与健康人血清共培组相比,鼻咽癌患者血清共培组HUVEC增殖能力较高,48 h lncRNA CCAT2表达较高(1比1.25±0.03,t=14.43,P=0.001)。与NP69细胞上清外泌体共培组相比,CNE2上清外泌体共培组HUVEC增殖能力较高,迁移实验中穿过小室的细胞数较多(53.12±2.13比154.74±4.17,t=37.73,P=0.000),小管生成实验中结点数较多(10.72±1.02比53.65±3.21,t=22.63,P=0.000)。与sh-NC组相比,sh-CCAT2组HUVEC增殖能力较低,迁移实验中穿过小室的细胞数较少(401.34±22.15比138.25±6.85,t=23.19,P=0.000),裸鼠皮下基质胶栓塞实验中微血管计数较少(41.00±0.32比27.15±0.23,t=61.53,P=0.000)。与正常表达lncRNA CCAT2的CNE2上清外泌体(sh-NC外泌体组)相比,低表达lncRNA CCAT2的CNE2上清外泌体(sh-CCAT2外泌体组)中lncRNA CCAT2表达较少(1比0.65±0.02,t=30.31,P=0.000)。与sh-NC外泌体组相比,sh-CCAT2外泌体组HUVEC中lncRNA CCAT2的表达较低(1比0.73±0.01,t=46.77,P=0.000),sh-CCAT2外泌体组迁移实验中穿过小室的细胞数较少(389.73±26.34比190.54±8.36,t=12.47,P=0.001)。结论鼻咽癌来源外泌体中含有的lncRNA CCAT2促进鼻咽癌血管生成。
简介:摘要颞下颌关节(temporomandibular joint,TMJ)是哺乳动物特有的滑膜关节,在胚胎发育期的结构和功能已多有报道。尽管自20世纪就开展了胚胎发育期TMJ相关信号分子与转录因子的研究,然而与四肢滑膜关节丰富的分子调控信息相比,对TMJ的分子遗传控制信息还知之甚少。关于TMJ胚胎发育的信号分子与转录因子研究主要以啮齿类动物为主,大型哺乳动物与人类胚胎期TMJ发育相关调控分子以及它们的调控机制研究鲜有报道。为了在现代分子生物学技术的基础上发现更多、更核心的调控分子并了解其对TMJ发育的调控机制,本文对当前TMJ胚胎发育中的关键信号分子与转录因子的研究进展进行综述。
简介:【摘要】单细胞转录组测序(scRNA-seq)是近年来新兴的一类单细胞测序技术,该技术可实现对单个细胞水平获得全面、完成的全转录组表达谱,为进一步发掘罕见细胞类型及其亚型、明确更有效的细胞特异性标志物等发挥重要关键作用。该测序技术在医学领域的应用,能够更好地观察并明确各单细胞、单细胞各亚型间存在的差异。目前scRNA-seq这一技术在临床肿瘤诊疗、生殖、妇产、免疫、神经科学、微生物学等领域得到了广泛应用。近年来该技术应用所涉及的领域日益广泛,目前该技术在眼科领域的应用也逐渐增加,在人类视觉系统方面尤其是视网膜发育、相关细胞分化、相关器官形成过程的研究中发挥了一定作用,提示该技术在眼部损伤修复方面能够发掘相关分子机制,为眼科相关疾病的靶点、标志物发掘等提供帮助,可能会为后续眼科诊疗等提供新的思路。本文将对scRNA-seq技术在眼科基础以及疾病研究的应用进展进行综述。
简介:目的进一步探讨阻断乙型肝炎病毒(HBV)母婴垂直传播的效果,明确携带HBV孕妇干预治疗对保护婴儿抗-HBV感染的意义。探讨乙型肝炎病毒转录体(RNA)检测在母婴传播诊断中的意义。方法将91例HBsAg/HBeAg呈阳性孕妇分成两组。其中治疗组为61例,以乙肝免疫球蛋白(HBIG)与左旋咪唑涂布剂阻断治疗;对照组为30例。治疗组在孕26周起开始阻断治疗,自母亲及其婴儿血清和母亲乳汁中提取核酸,经PCR及RT—PCR分别扩增HBVDNA和RNA,Southern—blotting验证反应的特异性,取代表性产物克隆、测序,检测血清HBVDNA及全长型(IRNA)和顿挫性转录体(trRNA)。结果治疗组和对照组新生儿外周血HBVDNA、fRNA和trRNA的阳性率分别为3.3%,3.3%,47.5%和6.7%,13.3%。70.0%。治疗组的前二项指标明显低于对照组,差异有显著意义(P〈0.01),但trRNA差异无显著意义(P〉0.05)。结论携带HBV孕妇于孕晚期给予HBIG和左旋咪唑涂布剂阻断治疗后,婴儿HBVDNA和fRNA携带率明显降低。治疗组和对照组均有超过1/2的患儿携带trRNA。trRNA在HBV母婴垂直传播过程中有可能是一个出现更早期的可检测指标,有助于确定新生儿HBV感染的状态。